一種亮氨酸氨基肽酶的測定試劑盒制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種亮氨酸氨基肽酶的測定試劑盒，包括R1試劑和R2試劑，R1試劑包括：10～100mmol/L的兩性離子緩沖液、1～10mmol/L的金屬螯合劑、1～10g/L的非離子表面活性劑、10～100g/L的NaCl和0.1～1g/L的防腐劑；R2試劑包括：5～50mmol/L的檸檬酸鹽緩沖液、0.5～5mmol/L金屬螯合劑、8～40 mmol/L的L

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種亮氨酸氨基肽酶的測定試劑盒


[0001]本專利技術(shù)屬于體外診斷試劑盒
，具體涉及一種亮氨酸氨基肽酶的測定試劑盒。

技術(shù)介紹

[0002]LAP廣泛分布于人體各種組織和器官中，在肝、膽、胰、腎、小腸及子宮的活性高。根據(jù)來源和分子結(jié)構(gòu)的不同，LAP涵蓋不同的種類，人體中常見的有亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase,LAP)和胎盤亮氨酸氨基肽酶(placental leucine aminopeptidase,P
?
LAP)兩類。不同種類的LAP均存在相同的離子結(jié)合活性中心，具有相似的性能。
[0003]LAP在機(jī)體中的作用與各種組織、器官的生理功能密切相關(guān)，其濃度升高主要表現(xiàn)在肝、腎功能受損，以及正常妊娠的中、后期。在肝臟中，LAP主要分布于膽小管區(qū)域，膽道感染、肝小葉結(jié)構(gòu)破壞、腫瘤壓迫等各種阻礙膽汁流通的因素均可刺激LAP合成增加；在腎臟中，LAP主要位于腎小管上皮細(xì)胞的溶酶體內(nèi)，各種原因?qū)е碌哪I實(shí)質(zhì)損傷尤其是腎小管損傷，在亞臨床期就表現(xiàn)出明顯的尿酶排泌量增高；在妊娠時(shí)，特別是孕中、后期，大量增加的P
?
LAP可發(fā)揮積極作用。P
?
LAP可降解催產(chǎn)素、血管緊張素原Ⅱ及減少細(xì)胞膜表面的催產(chǎn)素受體數(shù)量，對妊娠子宮起到舒張血管、調(diào)節(jié)子宮血流、降低妊期子宮對催產(chǎn)素的敏感性的作用，從而維持妊娠期間母體及胎兒的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。
[0004]目前市場上亮氨酸氨基肽酶的測定試劑盒具有以下缺陷：1)線性范圍窄，導(dǎo)致測定高值不準(zhǔn)確，特別是在妊娠后期某些孕婦表現(xiàn)出>400U/L的LAP活性，如果伴隨肝功能異常會更高，容易給臨床造成誤判；2)尿液中LAP正常值通常小于10U/L，試劑重復(fù)性差會導(dǎo)致參考區(qū)間附近的尿液樣本產(chǎn)生不可接受的偏倚，尿液樣本不適用。3)黃疸常見于肝病，當(dāng)肝功能受損時(shí)，抗干擾性能差特別是抗膽紅素干擾性能差的LAP測定試劑盒，測出的值不是LAP真實(shí)濃度，影響病因判斷。
[0005]專利文獻(xiàn)CN108913752A公開了一種亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒采用連續(xù)監(jiān)測法檢測血液中的亮氨酸氨基肽酶，試劑盒僅包括試劑R，通過往試劑R中選擇了B
?
R緩沖液，加入了適量的聚乙二醇2萬、N
?
β
?
羥基乙基乙二胺三乙酸、氯化鈉、L
?
亮氨酰
?2?
萘胺鹽酸鹽和Brom
?
nitro
?
dioxan(BND)，提高了試劑盒的穩(wěn)定性，但線性最高只能做到240U/L，不能滿足臨床需求。
[0006]專利文獻(xiàn)CN111154834A公開了一種亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒及其制備方法，包括R1試劑和R2試劑，所述R1試劑包括三羥基甲基甲烷緩沖液100
?
200mmol/L、甘氨酸緩沖液200
?
260mmol/L、聚羧基乙二醇氨基1.0
?
5.0g/L、甲酰胺30
?
50mmol/L、IgG1.5
?
2g/L、山梨酸20
?
30mmol/L，辣根過氧化物酶50
?
70mmol/L、其余為去離子水；所述R2試劑包括L
?
亮氨酸對硝基苯胺15mmol/L、甘氨酸緩沖液150
?
180mmol/L、哌嗪
?
N,N
?
二(2
?
乙磺酸)1
?
5mmol/L，其余為去離子水；具有抗干擾能力強(qiáng)，同時(shí)具有穩(wěn)定性高的效果。但其需要經(jīng)過靜置、邊滴加邊攪拌、去上清等工藝過程，且不同工藝還要嚴(yán)格控制溫度，制備工藝復(fù)雜，耗時(shí)很長且費(fèi)力不易得。
[0007]專利文獻(xiàn)CN103266164A公開了一種亮氨酸氨基肽酶檢測試劑，包括稀釋液和反應(yīng)試劑，其中稀釋液為緩沖液、表面活性劑、防腐劑、去膽紅素干擾劑和維生素C氧化酶；反應(yīng)試劑為緩沖液、氯化鈉、L
?
亮氨酸
?4?
硝基苯胺、防腐劑0.1
?
1g/L和凍干保護(hù)劑10
?
30g/L。但是其組份中含有的維生素C氧化酶的穩(wěn)定性很差。另外，文獻(xiàn)公開的是一種POCT技術(shù)，該技術(shù)具有即時(shí)檢測的特點(diǎn)，但不適用于大批量快速檢測場景，具有一定的應(yīng)用局限性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

[0008]本專利技術(shù)提供了一種亮氨酸氨基肽酶的測定試劑盒，以克服上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足。
[0009]為解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)提供以下技術(shù)方案：
[0010]本專利技術(shù)的一種亮氨酸氨基肽酶的測定試劑盒，其特征在于，包括R1試劑和R2試劑；
[0011]所述R1試劑包括以下成分：10～100mmol/L的兩性離子緩沖液、1～10mmol/L的金屬螯合劑、1～10g/L的非離子表面活性劑、10～100g/L的NaCl和0.1～1g/L的防腐劑；
[0012]所述R2試劑包括以下成分：5～50mmol/L的檸檬酸鹽緩沖液、0.5～5mmol/L金屬螯合劑、8～40mmol/L的L
?
亮氨酰
?
P
?
硝基苯胺和0.1～1g/L的防腐劑；
[0013]所述R1試劑與所述R2試劑的體積比為3:1～4:1。
[0014]進(jìn)一步地，所述兩性離子緩沖液為三羥甲基氨基甲烷(Tris)緩沖液，優(yōu)選的pH為7.0～8.0；優(yōu)選的，所述兩性離子緩沖液的緩沖對為三羥甲基氨基甲烷(Tris)與氨基酸及其衍生物緩沖對；更優(yōu)選的，所述氨基酸及其衍生物為甘氨酸或二甘肽。
[0015]進(jìn)一步地，所述非離子表面活性劑為聚乙二醇型非離子表面活性劑或多元醇型非離子表面活性劑中的一種或幾種，更優(yōu)的為壬基酚聚氧乙烯醚(NP
?
9)、辛基酚聚氧乙烯醚(OP
?
9)、山梨醇單月桂酸酯(Span
?
20)、聚氧乙烯山梨醇單月桂酸酯(Tween
?
20)中的一種或幾種。
[0016]進(jìn)一步地，所述檸檬酸鹽緩沖液的pH為4.0～5.0；所述金屬螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)；所述防腐劑為疊氮鈉、proclin300中的至少一種。
[0017]本專利技術(shù)具有以下有益效果：
[0018]本專利技術(shù)通過調(diào)整穩(wěn)定的緩沖液及其pH，并添加特定的且適量的聚乙二醇型非離子表面活性劑或多元醇型非離子表面活性劑，提高樣本中被檢測物——亮氨酸氨基肽酶的穩(wěn)定性和選擇性。本專利技術(shù)的試劑盒具有優(yōu)異的抗干擾能力，良好的重復(fù)性、較寬的線性范圍、較高的靈敏度和穩(wěn)定性，同時(shí)表現(xiàn)出優(yōu)異的抗干擾能力，能夠滿足臨床上血、尿同測的需求，具有良好的市場應(yīng)用前景。
具體實(shí)施方式
[0019]下面結(jié)合具體實(shí)施例對本專利技術(shù)進(jìn)行詳細(xì)說明。本
的一般技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到本實(shí)施例僅是用來說明本專利技術(shù)，而并非用作對本專利技術(shù)的限定，只要在本專利技術(shù)的實(shí)施范圍內(nèi)對實(shí)施本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
1.一種亮氨酸氨基肽酶的測定試劑盒，其特征在于，包括R1試劑和R2試劑；所述R1試劑包括以下成分：10～100mmol/L的兩性離子緩沖液、1～10mmol/L的金屬螯合劑、1～10g/L的非離子表面活性劑、10～100g/L的NaCl和0.1～1g/L的防腐劑；所述R2試劑包括以下成分：5～50mmol/L的檸檬酸鹽緩沖液、0.5～5mmol/L金屬螯合劑、8～40 mmol/L的L
?
亮氨酰
?
P
?
硝基苯胺和0.1～1g/L的防腐劑；所述R1試劑與所述R2試劑的體積比為3:1～4:1。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亮氨酸氨基肽酶的測定試劑盒，其特征在于，所述兩性離子緩沖液為三羥甲基氨基甲烷緩沖液，pH為7.0～8.0，所...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：汪順麗，
申請(專利權(quán))人：上海科華生物工程股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：