基于LVSS-MSS-CDEKC的生物堿分析方法及在養心氏片質量控制中的應用技術

本發明專利技術涉及基于LVSS

【技術實現步驟摘要】
基于LVSS
?
MSS
?
CDEKC的生物堿分析方法及在養心氏片質量控制中的應用


[0001]本專利技術屬于生物堿分析方法
，具體涉及一種基于大體積樣品堆積
?
膠束到溶劑堆積
?
環糊精電動色譜法(LVSS
?
MSS
?
CDEKC)的生物堿分析方法及所述分析方法在養心氏片質量控制方面的應用。

技術介紹

[0002]公開該
技術介紹
部分的信息僅僅旨在增加對本專利技術的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。
[0003]心血管疾病(CVDs)是一種心臟血管和周圍血管疾病的統稱，嚴重威脅著人類生命健康，具有高發病率、高致殘率和高死亡率的特點。經調研發現，我國的心血管疾病患者數量在逐年上升，且患病群體不再僅僅局限于中老年人，而逐漸向年輕化趨勢發展。養心氏片是一種用于臨床治療冠心病、心絞痛、心肌梗死、高血脂或高血糖等癥狀的傳統中藥制劑，由黃芪、人參、丹參、黨參、葛根、淫羊藿、山楂、地黃、當歸、黃連、延胡索(炙)、靈芝和甘草(炙)等13味中藥組成。中藥制劑的化學成分復雜多樣，且臨床療效的發揮是多種化學成分協同作用的結果。然而在2020年版《中國藥典》中僅對黃芪甲苷的含量標準進行了規定，這似乎不能滿足有效控制養心氏片質量以及探討藥理作用機制的要求。因此,一些研究者基于HPLC
?
DAD技術建立有效的分析方法，成功實現了多種化學成分的同時測定。但其分析時間長，效率低，且目標成分主要集中于黃酮類和酚酸類化合物。Zhu等人采用HPLC
?
ESI
?
Q
?
TOF
?
MS雖實現了對黃酮類、酚酸類、生物堿等多種成分的同時測定，但缺乏定量分析。此外，養心氏片中的生物堿成分已被預測是治療心血管疾病的活性成分之一。基于此，亟需建立高效、快速的分析方法對養心氏片中的生物堿成分開展系統研究。
[0004]毛細管電泳技術(CE)因操作簡單、分析時間快、有機溶劑消耗少等優點，已被廣泛應用于醫藥，食品及化工等領域。近些年來，各種在線樣品預濃縮技術不斷被開發，無需額外的設備，在一定程度上解決了傳統電泳分離模式靈敏度低的問題。大體積樣品堆積(LVSS)是指通過引入較長的樣品溶液來使樣品加載量最大化，以此獲得提高的富集效率。此兩種方法已被證明即使在復雜的樣品分析中亦能實現一定的高效性。膠束到溶劑堆積(MSS)是一種對陽離子或陰離子成分實現富集的方法，主要機理是基于帶電分析物在富含有機溶劑的邊界處發生有效電泳遷移率的反轉，整個過程主要涉及分析物的遷移、釋放和積累。當LVSS與MSS耦合時，分散在樣品區域的離子組分在MSS過程中會被重新聚焦，從而在一定程度上提高了堆積效率和分離性能。

技術實現思路

[0005]本專利技術將大體積樣品堆積(LVSS)和膠束到溶劑堆積(MSS)兩種富集方法結合構建一種兩步堆積策略，基于由環糊精修飾的毛細管電動色譜分離模式(CDEKC)對養心氏片中
的陽離子生物堿成分進行分析，可以同時檢測多種生物堿類成分，該分析方法快速、靈敏，具有良好的重復性，應用于養心氏片的質量控制具有良好的工業應用前景。
[0006]本專利技術第一方面，提供一種基于LVSS
?
MSS
?
CDEKC的生物堿分析方法，所述分析方法用于同時檢測待測樣品中的表小檗堿、脫氫紫堇堿、藥根堿、黃連堿和小檗堿，所述LVSS
?
MSS
?
CDEKC電泳運行模式如下：將運行緩沖溶液充滿毛細管柱，一定壓力下注入SDS膠束溶液及待測樣品，最后在毛細管柱前端引入甲醇溶液，施加分離電壓對待測樣品中的生物堿進行分離。
[0007]本專利技術提供的檢測方法中，預處理后的毛細管柱需要充滿運行緩沖溶液對其內部環境進行調節，隨后相繼引入一段膠束溶液，一定長度的樣品溶液及一段有機溶劑。在電泳分離過程中，電滲流(EOF)對上述生物堿的有效遷移率存在一定的干擾作用，考慮到這一問題，該方法中的緩沖溶液均在酸性磷酸鹽溶液中制備，以控制EOF的強度。當在毛細管兩端施加正電壓時，帶負電的SDS膠束向電極的陽極端遷移，而樣品區域中帶正電的陽離子成分則向電極的陰極端遷移，隨后陽離子成分被膠束掃集成條帶并隨膠束一起向電極的陽極端遷移。膠束在不同的溶液基質中具有不同的臨界膠束濃度。當SDS膠束攜帶著待測成分遷移至有機溶劑區域時，SDS的臨界膠束濃度變大，膠束破裂，因此陽離子成分被釋放出來，隨后陽離子成分在正電壓的驅動下向電極的陰極端遷移直至檢測窗口。
[0008]上述毛細管中溶劑體系的檢測對于養心氏片中生物堿類成分的富集和分離具有重要意義，本專利技術第一方面提供的分析方法能夠有效實現五種生物堿成分的同時檢測，富集效率相比普通的電泳分離提高了12～15倍。
[0009]優選的，所述運行緩沖液為磷酸鹽緩沖液，pH為2～3，緩沖液中還包括一定濃度的羥丙基
?
β
?
環糊精(HP
?
β
?
CD)；所述磷酸鹽為酸式磷酸鹽，包括但不限于磷酸二氫鈉(NaH2PO4)、磷酸二氫銨(NH4H2PO4)、磷酸一氫鈉(Na2HPO4)中的一種或幾種。
[0010]本專利技術提供的一種實施方式中，所述磷酸鹽為NaH2PO4，濃度為20～40mM，優選為25～35mM，進一步優選為27mM,28mM,29mM,30mM,31mM或32mM.
[0011]另外，所述HP
?
β
?
CD的濃度為10～20mg/mL，優選為13～17mg/mL，更優選為14mg/mL,15mg/m或16mg/mL。
[0012]優選的，所述毛細管柱為未涂層的石英毛細管柱，有效長度應達到40cm以上，內徑為45～66μm；本專利技術提供的一種具體的實施方式中，所述毛細管的長度為50cm，內徑為50μm，有效長度為41.5cm。
[0013]優選的，上述分析運行前，所述毛細管柱經過預處理，步驟如下：采用堿液和水依次沖洗以活化毛細管內壁，電泳運行前還需要采用運行緩沖溶液對毛細管進行沖洗。
[0014]進一步的，所述堿液為0.08～0.12M NaOH溶液。
[0015]進一步的，上述堿液及水的沖洗時間為1～3min，緩沖溶液的沖洗時間為2～4min。
[0016]優選的，所述SDS膠束溶液為含有一定濃度SDS的磷酸鹽緩沖液，所述磷酸鹽緩沖液中磷酸鹽的種類及濃度與運行緩沖液相同，所述SDS的濃度為15～25mM，進一步優選為18～22mM。
[0017]優選的，所述SDS膠束溶液的注入壓力為45～55mbar，注入時間為4～6s。
[0018]優選的，所述待測樣品采用甲醇溶液作為溶劑進行提取，所述甲醇溶液的濃度可依據待測樣品的溶解效果進行調整，可行的濃度如50～99％。本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種基于LVSS
?
MSS
?
CDEKC的生物堿分析方法，其特征在于，所述分析方法用于同時檢測待測樣品中的表小檗堿、脫氫紫堇堿、藥根堿、黃連堿和小檗堿，所述LVSS
?
MSS
?
CDEKC電泳運行模式如下：將運行緩沖溶液充滿毛細管柱，一定壓力下注入SDS膠束溶液及待測樣品，最后在毛細管柱前端引入甲醇溶液，施加分離電壓對待測樣品中的生物堿進行分離。2.如權利要求1所述基于LVSS
?
MSS
?
CDEKC的生物堿分析方法，其特征在于，所述運行緩沖液為NaH2PO4緩沖液，濃度為20～40mM，pH為2～3，緩沖液中還包括10～20mg/mL的羥丙基
?
β
?
環糊精。3.如權利要求1所述基于LVSS
?
MSS
?
CDEKC的生物堿分析方法，其特征在于，所述毛細管柱為未涂層的石英毛細管柱，有效長度應達到40cm以上，內徑為45～66μm；上述分析運行前，所述毛細管柱經過預處理，步驟如下：采用0.08～0.12M NaOH溶液和水依次沖洗1～3min以活化毛細管內壁，電泳運行前還需要采用運行緩沖溶液對毛細管進行沖洗2～4min。4.如權利要求1所述基于LVSS
?
MSS
?
CDEKC的生物堿分析方法，其特征在于，所述SDS膠束溶液為含有15～25mM SDS的NaH2PO4緩沖液；所述SDS膠束溶液的注入壓力為45～55mbar，注入時間為4～6s。5.如權利要求1所述基于LVSS
?
MSS
?
CDEKC的生物堿分析方法，其特征在于，所述待測樣品采用50～99％甲醇溶液作為溶劑進行...

【專利技術屬性】
技術研發人員：常艷旭，李晉，杜昆澤，郝佳，袁宏偉，何俊，房士明，文佳柯，王輝，陳建，郭彩杰，李彥，
申請(專利權)人：上海醫藥集團青島國風藥業股份有限公司，
類型：發明
國別省市：