本發明專利技術提供了一種用于肝纖維化和肝硬化檢測的試劑盒，屬于生物技術領域。本發明專利技術試劑盒通過測定患者血清中CHI3L1的含量，不僅能夠有效區分正常人群和肝硬化患者，還能夠有效區分代償性肝硬化和失代償性肝硬化患者，使檢測結果更加準確，有利于更加準確地判斷患者的病情。并且本發明專利技術試劑盒具有良好的標準品，能夠進一步提高檢測的準確度。進一步提高檢測的準確度。進一步提高檢測的準確度。
【技術實現步驟摘要】
一種用于肝纖維化和肝硬化檢測的試劑盒
[0001]本專利技術涉及生物
，具體涉及一種用于肝纖維化和肝硬化檢測的試劑盒。
技術介紹
[0002]肝硬化（Cirrhosis）是指肝纖維化中晚期。它的形態學定義為彌漫性肝臟纖維化伴有異常結節形成。僅有彌漫性肝纖維化而無結節形成（如先天性肝纖維化），或僅有結節形成而無纖維化（如結節性再生性增生）均不能稱為肝硬化。從臨床的角度來看，肝硬化是指上述肝臟組織病理學改變所導致的肝功能衰竭和門脈高壓癥等表現。從病理學上來看，慢性炎癥壞死首先導致肝臟纖維結締組織增生和沉積（纖維化），繼而導致肝小葉結構的破環和假小葉形成，最終發展為肝硬化。
[0003]肝硬化代償期無明顯臨床癥狀，失代償期以門靜脈高壓和肝功能嚴重損傷為特征，患者常因并發腹水、消化道出血、膿毒癥、肝性腦病、肝腎綜合征和癌變等導致多臟器功能衰竭而死亡。肝硬化是中國常見的肝病，每年有3%的代償期肝硬化患者進入失代償期。失代償期肝硬化的預后通常較差，常規治療下5年生存率僅為14
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35%。失代償期肝硬化患者經常發生慢加急性肝衰竭（ACLF），這與高死亡率相關。
[0004]因此，及時并且準確地對肝纖維化、肝硬化，以及代償期肝硬化和失代償期肝硬化進行檢測對肝硬化的診斷和治療具有重要意義。目前對肝硬化檢測有很多方法，例如中國專利CN103160575A公開了SAA1β/β純合子基因型在肝硬化預后診斷及肝硬化診斷中的應用，該專利通過實時熒光定量等位基因特異性PCR檢測人SAA1 β/β純合子基因型和非SAA1 β/β純合子基因型，從而實現對肝硬化易感人群的檢測；中國專利CN103160507A公開了檢測肝硬化的miRNA血清標志物及其應用。這些方法從基因或mRNA層面進行檢測，方法較為繁瑣，檢測成本較高。還有一些利用抗原抗體反應在蛋白層面進行檢測的方法，但這些方法在轉化為實際應用的試劑盒時，會出現標樣較差影響檢測特異性和靈敏度的情況。此外，在肝纖維化和肝硬化的病程中，對能夠簡單并且準確區分代償期和是代償期的方法或產品鮮有研究和報道。因此，對于肝纖維化和肝硬化的檢測，仍需要大量研究。
技術實現思路
[0005]本專利技術的目的在于提供一種肝纖維化和肝硬化的試劑盒，本專利技術試劑盒具有良好的標準品，能夠有效保證測定結果的準確性；本專利技術試劑盒除了能夠準確區分患者是否患有肝纖維化或肝硬化，還能夠用于準確區分肝硬化患者處于代償期、失代償期或再代償期。
[0006]為達到上述專利技術目的，采用如下技術方案。
[0007]本專利技術公開了同位素標記的CHI3L1，CHI3L1的特異性多肽片段序列為：ILGQQVPYATK；同位素包括
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C。
[0008]優選地，同位素標記的CHI3L1標記位點在賴氨酸。
[0009]本專利技術還公開了一種CHI3L1標準品，包括來自于乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1或化學合成的CHI3L1。乙肝患者肝硬化血清即為由乙肝病毒引起的肝硬化患者的血清，包含
殼酶蛋白的所有結構變異體，特別是乙肝相關纖維化過程中的殼酶蛋白變異體。乙肝患者肝硬化血清中的各種蛋白修飾、表位、免疫原性等更符合實際蛋白特點，是更好的標準品和賦值來源。
[0010]優選地，上述標準品的用途包括：通過溯源鏈賦值得到適用于肝纖維化肝硬化試劑盒的校準品和質控品。
[0011]優選地，化學合成的CHI3L1、同位素標記的CHI3L1與乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1的溯源鏈的比值為：合成的CHI3L1：同位素標記的CHI3L1：乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1=150
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250: 700
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850:150
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250。
[0012]更優選地，化學合成的CHI3L1、重同位素標記的CHI3L1與乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1的溯源鏈的比值為：合成的CHI3L1：重同位素標記的CHI3L1：乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1=200
?
220: 770
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780:200
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220。
[0013]更進一步優選地，化學合成的CHI3L1、重同位素標記的CHI3L1與乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1的溯源鏈的比值為：合成的CHI3L1：重同位素標記的CHI3L1：乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1=218: 780: 220。
[0014]本專利技術還公開了同位素標記的CHI3L1作為參考物質在標準品溯源和/或賦值中的用途，同位素標記的CHI3L1，由重同位素標記或輕同位素標記，標記位點在賴氨酸。
[0015]優選地，同位素包括
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N和/或
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C。
[0016]優選地，CHI3L1特異性序列為ILGQQVPYATK。該序列為CHI3L1特異性多肽序列，與其他蛋白無交叉，可以很好地代表CHI3L1，使檢測更加準確。
[0017]優選地，同位素標記的CHI3L1作為二級參考物質。
[0018]優選地，稱重法為一級參考方法。
[0019]優選地，二級參考方法為同位素稀釋法。通過使用反應監測和質譜比較重同位素標記的ILGQQVPYATK和輕同位素標記得ILGQQVPYATK，來對重同位素標記的多肽進行精確賦值。
[0020]優選地，上述用途中，化學合成的CHI3L1、重同位素標記的CHI3L1與乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1的溯源鏈的比值為：合成的CHI3L1：重同位素標記的CHI3L1：乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1=150
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250: 700
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850:150
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250。
[0021]更優選地，上述用途中，化學合成的CHI3L1、重同位素標記的CHI3L1與乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1的溯源鏈的比值為：合成的CHI3L1：重同位素標記的CHI3L1：乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1=200
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220: 770
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780:200
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220。
[0022]更進一步優選地，上述用途中，化學合成的CHI3L1、重同位素標記的CHI3L1與乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1的溯源鏈的比值為：合成的CHI3L1：重同位素標記的CHI3L1：乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1=218: 780: 220。
[0023]本專利技術還公開了一種用于肝纖維化和肝硬化的試劑盒，包括標準品；標準品為CHI3L1。
[0024]優選地，作為標準品的CHI3L1來自于乙肝患者肝硬化血清或化學合成。當CHI3L1標準樣取自患者的血清，尤其是中國人群患者的血清時，該標準品具有廣譜適用性，檢測得到的結果準確。
[0025]優選地，用做標準品的CHI3L1是包括溶液的多種形態。
[0026]優選地，來源于患者的標準品通過常規蛋白質分離純化方法本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.同位素標記的CHI3L1，其特征在于，所述CHI3L1的特異性多肽片段序列為：ILGQQVPYATK；所述同位素包括
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C。2.如權利要求1所述的CHI3L1，其特征在于，所述同位素標記的CHI3L1標記位點在賴氨酸。3.一種CHI3L1標準品，其特征在于，所述標準品包括來自于乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1或化學合成的CHI3L1。4.如權利要求3所述的標準品，其特征在于，所述化學合成的CHI3L1、同位素標記的CHI3L1與乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1的溯源鏈的比值為：化學合成的CHI3L1：同位素標記的CHI3L1：乙肝患者肝硬化血清的CHI3L1=150
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250: 700
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250。5.同位素標記的CHI3L1在標準品溯源和/或賦值中的用途，其特征在于，所述同位素標記的CHI3L1，由重同位素標記或輕同位素標記，標記位點在賴氨酸。6.如權利要求5所述的用途，其特征在于，所述同位素標記的CHI3L1作為參考物質。7.如權利要求5所述的用途，其特征在于，在標準品溯源和/或賦值過程中，所述化學合成的CHI3L1、重同位素標記的CH...
【專利技術屬性】
技術研發人員：林標揚，
申請(專利權)人：杭州普望生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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