一種蛹蟲草中性多糖及提取方法及其應用技術

本發明專利技術屬于生物技術領域，具體為一種蛹蟲草中性多糖及提取方法及其應用，包括以下步驟：通過鹽酸溶液提取、脫脂、脫色、除蛋白、經DEAE

【技術實現步驟摘要】
一種蛹蟲草中性多糖及提取方法及其應用


[0001]本專利技術涉及生物
，具體涉及一種蛹蟲草中性多糖及提取方法及其應用。

技術介紹

[0002]Ⅱ型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)是一種以高血糖、胰島素抵抗和低度炎癥為特征的慢性代謝疾病，主要影響葡萄糖、脂質和蛋白質的代謝，并且伴隨一些嚴重的并發癥，如心血管疾病、腦血管疾病、糖尿病腎病、糖尿病視網膜病變、糖尿病足等，嚴重影響人類健康和生活質量。且目前T2DM的治療主要是口服一些化學合成的降血糖藥物，如雙胍類、噻唑烷二酮類和磺脲類，然而，口服一些化學合成的降血糖藥物，而它們有明顯低血糖、器官損傷、胃腸道問題等副作用，進一步加重T2DM患者的痛苦。研究表明腸道菌群變化與T2DM及相關代謝疾病有關。
[0003]蛹蟲草(Cordyceps militaris)，又稱北冬蟲夏草，是我國著名的食用、藥用兼有的珍稀蕈菌。蛹蟲草含有豐富的活性成分，如多糖，蟲草素、蟲草酸、多糖、腺苷等，其中，蛹蟲草多糖含量最為豐富。目前，對蛹蟲草多糖中應用的普遍是粗多糖，而粗多糖中成分較多，為了進一步開發蛹蟲草多糖的藥用價值，需要對蛹蟲草化學組分、多糖制備工藝、單一組分結構、藥理作用及其關系進行深入系統研究。

技術實現思路

[0004]為解決上述技術問題，本專利技術提供了一種蛹蟲草中性多糖及提取方法及其應用。
[0005]一種蛹蟲草中性多糖的提取方法，包括以下步驟：
[0006]從蛹蟲草中提取蛹蟲草粗多糖，配制蛹蟲草粗多糖溶液，經濾膜過濾后進行DEAE
?
52纖維素層析柱的柱層析，冷凍干燥，得到蛹蟲草中性多糖。
[0007]優選的，所述蛹蟲草粗多糖溶液經φ＝0.22μm的濾膜過濾。
[0008]優選的，所述DEAE
?
52纖維素層析柱的柱層析通過如下方法實現：
[0009](3.1)將DEAE
?
52纖維素粉末溶于水中靜置，每0.5
?
5h換一次水，至DEAE
?
52纖維素粉末充分膨脹；除去上層去離子水后，加入氫氧化鈉溶液，浸泡后除去上層氫氧化鈉溶液；
[0010](3.2)洗滌步驟(3.1)中的沉淀至中性后，再加入鹽酸溶液，浸泡后除去上層鹽酸溶液，洗滌沉淀至中性；
[0011](3.3)將步驟(3.2)得到的中性沉淀DEAE
?
52纖維素注入層析柱，并注入去離子水平衡；
[0012](3.4)將過濾后的所述蛹蟲草粗多糖溶液加入經步驟(3.3)處理后的DEAE
?
52纖維素的層析柱中，分別用不同濃度的NaCl溶液洗脫，收集所有洗脫液；
[0013]洗脫時的流速為1
?
3mL/min，收集3min洗脫液。
[0014]優選的，將得到的蛹蟲草中性多糖進行Sephadex
?
G100葡聚糖凝膠的層析柱的柱層析，冷凍干燥，得到進一步純化的所述蛹蟲草中性多糖。
[0015]優選的，所述Sephadex
?
G100葡聚糖凝膠的層析柱的柱層析通過如下方法實現：
[0016](5.1)將Sephadex
?
G100葡聚糖凝膠粉末混于中，攪拌至葡聚糖凝膠顆粒溶脹，期間更換每0.5
?
5h更換1次去離子水，直至葡聚糖凝膠顆粒充分膨脹，最后靜置，留沉淀；
[0017](5.2)經步驟(5.1)處理的Sephadex
?
G100葡聚糖凝膠注入層析柱；
[0018](5.3)將得到的所述蛹蟲草中性多糖加入經步驟(5.2)處理的Sephadex
?
G100葡聚糖凝膠的層析柱中，用去離子水洗脫，收集洗脫液；
[0019]所述蛹蟲草中性多糖的進樣濃度為5
?
10mg/mL；
[0020]洗脫時的流速為0.5
?
1mL/min，收集6min洗脫液。
[0021]優選的，所述蛹蟲草粗多糖的獲得方法如下：
[0022]將蛹蟲草子實體粉碎得到蛹蟲草粉末，按料液比1：5
?
10加鹽酸溶液，于80
?
100℃反應6h，離心，取得上清液為酸提液，將酸提液濃縮，與乙醇混合，4℃靜置，離心，收集沉淀后脫脂、脫色、除蛋白，調pH至7，濃縮得到蛹蟲草粗多糖。
[0023]優選的，所述除蛋白的方法為：利用Sevage法除蛋白，具體為按照與脫色后的酸提液的體積比1：1加入Sevage試劑，攪拌2h，離心去除蛋白層和有機層，Sevage試劑中正氯仿與正丁醇的體積比為4：1。
[0024]一種上述蛹蟲草中性多糖的提取方法得到的蛹蟲草中性多糖，所述蛹蟲草中性多糖主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖組成，且摩爾比為2.2：15.1：1，分子量為81752Da。
[0025]蛹蟲草中性多糖的應用，用于降血糖、保護腸道屏障、調節腸道菌群。
[0026]優選的，所述的蛹蟲草中性多糖用于制備有害菌Ruminococcus_torques_group和Enterococcus的抑制劑；或制備有益菌Allobaculum、Alistipes、Lachnospiraceae_NK4A136_group和norank_f_Muribaculaceae生長的產品；所述的蛹蟲草中性多糖通過降低有害菌：Ruminococcus_torques_group和Enterococcus、增加有益菌：Allobaculum、Alistipes、Lachnospiraceae_NK4A136_group和norank_f_Muribaculaceae來調節腸道菌群。
[0027]與現有技術相比，本專利技術的有益效果在于：
[0028]1、本專利技術提供了一種均一的高純度的蛹蟲草中性多糖，主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖組成，且摩爾比為2.2：15.1：1，分子量為81752Da；
[0029]2、本專利技術的蛹蟲草中性多糖用于降血糖、保護腸道屏障、調節腸道菌群，通過降低有害菌：Ruminococcus_torques_group和Enterococcus、增加有益菌：Allobaculum、Alistipes、Lachnospiraceae_NK4A136_group和norank_f_Muribaculaceae來調節腸道菌群；
[0030]3、本專利技術在酸提蛹蟲草粗多糖之后，利用DEAE
?
25纖維素層析柱提取的蛹蟲草中性多糖占總多糖的85％以上且多糖含量為72.91
±
1.35％，利用Sephadex
?
G100葡聚糖凝膠層析之后，得到均一的高純度的蛹蟲草中性多糖且多糖含量為92.22
±
1.81％，蛹蟲草中性多糖可作為一種調節腸道菌群、降血糖的益生元制劑。
附圖說明
[0031]圖本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種蛹蟲草中性多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：從蛹蟲草中提取蛹蟲草粗多糖，配制蛹蟲草粗多糖溶液，經濾膜過濾后進行DEAE
?
52纖維素層析，冷凍干燥，得到蛹蟲草中性多糖。2.根據權利要求1所述的蛹蟲草中性多糖的提取方法，其特征在于，所述蛹蟲草粗多糖溶液經φ＝0.22μm的濾膜過濾。3.根據權利要求1所述的蛹蟲草中性多糖的提取方法，其特征在于，所述DEAE
?
52纖維素層析柱的柱層析通過如下方法實現：(3.1)將DEAE
?
52纖維素粉末溶于水中靜置，每0.5
?
5h換一次水，至DEAE
?
52纖維素粉末充分膨脹；除去上層去離子水后，加入氫氧化鈉溶液，浸泡后除去上層氫氧化鈉溶液；(3.2)洗滌步驟(3.1)中的沉淀至中性后，再加入鹽酸溶液，浸泡后除去上層鹽酸溶液，洗滌沉淀至中性；(3.3)將步驟(3.2)得到的中性沉淀DEAE
?
52纖維素注入層析柱，并注入去離子水平衡；(3.4)將過濾后的所述蛹蟲草粗多糖溶液加入經步驟(3.3)處理后的DEAE
?
52纖維素的層析柱中，分別用不同濃度的NaCl溶液洗脫，收集所有洗脫液；洗脫時的流速為1
?
3mL/min，收集3min洗脫液。4.根據權利要求1所述的蛹蟲草中性多糖的提取方法，其特征在于，將得到的蛹蟲草中性多糖進行Sephadex
?
G100葡聚糖凝膠的層析柱的柱層析，冷凍干燥，得到進一步純化的所述蛹蟲草中性多糖。5.根據權利要求4所述的蛹蟲草中性多糖的提取方法，其特征在于，所述Sephadex
?
G100葡聚糖凝膠的層析柱的柱層析通過如下方法實現：(5.1)將Sephadex
?
G100葡聚糖凝膠粉末混于中，攪拌至葡聚糖凝膠顆粒溶脹，期間更換每0.5
?
5h更換1次去離子水，直至葡聚糖凝膠顆粒充分膨脹，最后靜置，留沉淀；(...

【專利技術屬性】
技術研發人員：趙化杰，劉亮，李瑞，楊帆，李敏，趙林靜，鄧保國，
申請(專利權)人：新鄉醫學院，
類型：發明
國別省市：