本發明專利技術公開了一種人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體及其在活化擴增人Vδ1T細胞中的應用，屬于生物技術領域中的人源化單克隆抗體制備及細胞擴增的技術領域。本發明專利技術提供的人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體的重鏈可變區包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，輕鏈可變區包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，該人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體能夠在體外高效活化擴增Vδ1T細胞，且獲得的Vδ1T細胞能夠有效殺傷腫瘤細胞。且獲得的Vδ1T細胞能夠有效殺傷腫瘤細胞。且獲得的Vδ1T細胞能夠有效殺傷腫瘤細胞。
【技術實現步驟摘要】
一種人源化抗人V
δ
1TCR單克隆抗體及其在活化擴增人V
δ
1 T細胞中的應用
[0001]本專利技術屬于生物
中的人源化單克隆抗體制備及體外細胞擴增的
，具體涉及一種人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體及其制備方法和在高效活化擴增人Vδ1 T細胞中的應用。
技術介紹
[0002]γδT細胞是一群在進化上比B細胞和αβT細胞還要古老的淋巴細胞。雖然γδT細胞只占成人外周血CD3
+
T細胞的0.5％
?
10％，卻兼有固有免疫和適應性免疫應答的雙重特性，在機體抗感染、抗腫瘤和組織損傷修復等過程中發揮著重要的免疫作用。與αβT細胞相比，γδT細胞具有以下特點有利于發揮免疫作用：第一，在粘膜和皮下組織的大量分布以及TCRγδ的有限多樣性，有利于γδT細胞在早期接觸識別入侵的病原微生物，無需大量擴增即可發揮抗感染的作用；第二，γδT細胞識別抗原無MHC限制性，同時與TCRαβ相比，TCRγ和TCRδ的CDR3長度及結構更加類似于抗體的輕鏈和重鏈，因而TCRγδ可以像抗體一樣無需抗原提呈分子輔助直接識別多種抗原分子；第三，γδT細胞表達NKG2D及NCR(NKp30、NKp44和NKp46)等NK細胞樣受體，使其可以類似NK細胞在早期識別病原微生物及病原微生物引起的應激分子信號；第四，γδT細胞處于一種預活化狀態，迅速發揮多種功能，包括分泌細胞因子，殺傷靶細胞等；第五，γδT細胞具有抗原提呈功能，啟動后繼的適應性免疫應答；第六，γδT細胞在維持上皮組織的完整及組織損傷修復方面具有重要作用。
[0003]γδT細胞根據TCR的γ和δ鏈的表達，主要分為3個亞群，分別為Vδ1 T細胞、Vδ2 T細胞和Vδ3 T細胞，其中Vδ3 T細胞主要分布于肝和腸，Vδ2 T細胞主要分布在外周血中，Vδ1T細胞主要存在于粘膜和上皮組織中，尤其是胃腸道、呼吸道和泌尿生殖道的黏膜下區域，外周血中也有極少量的Vδ1 T細胞亞群。γδT細胞不同亞群可發揮自己獨特的作用，近年來發現粘膜中的Vδ1 T細胞能夠有效滲入實體腫瘤中，識別腫瘤表面異常表達的MHC I類相關分子A和B(MICA和MICB)以及UL
?
16結合蛋白(ULBP)發揮抗腫瘤作用，然而目前Vδ1T細胞過繼免疫療法面臨的最大阻礙是其在外周血中的數量非常少，且難以進行高效體外擴增，從而限制了Vδ1 T細胞在臨床治療上的應用。
技術實現思路
[0004]針對現有技術中存在的問題的一個或多個，本專利技術一個方面提供一種人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體，其重鏈可變區包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或由其組成，輕鏈可變區包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或由其組成。
[0005]在一些實施方式中，所述人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體的重鏈恒定區包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或由其組成，輕鏈恒定區包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或由其組成。
[0006]在一些實施方式中，所述人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體的重鏈包含SEQ ID NO:11
所示的氨基酸序列或由其組成，輕鏈包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或由其組成。
[0007]本專利技術另一方面提供一種編碼所述人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體的基因；優選地，其中編碼所述人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體的重鏈的基因包含如SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列或由其組成，編碼所述人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體的輕鏈的基因包含如SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列或由其組成。
[0008]本專利技術另一方面還提供一種含有編碼所述人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體的基因的表達載體、轉基因細胞系和宿主菌。
[0009]本專利技術再一方面提供一種制備所述人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體的方法，其包括以下步驟：
[0010]1)將鼠源抗人Vδ1TCR單克隆抗體的重輕鏈可變區的氨基酸序列分別與人源化抗體重輕鏈恒定區的氨基酸序列連接，分別得到人源化抗體的重鏈和輕鏈的氨基酸序列；其中所述鼠源抗人Vδ1TCR單克隆抗體的重鏈可變區包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或由其組成，輕鏈可變區包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或由其組成；
[0011]2)將步驟1)所得人源化抗體的重鏈和輕鏈的氨基酸序列進行逆翻譯后，分別得到人源化抗體的重鏈和輕鏈的編碼基因；和
[0012]3)對步驟2)所得人源化抗體的重鏈和輕鏈的編碼基因進行真核表達，得到所述人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體。
[0013]在一些實施方式中，所述人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體在活化擴增Vδ1 T細胞中的應用也屬于本專利技術的內容。
[0014]在一些實施方式中，所述活化擴增Vδ1 T細胞的方式包括固相化體外擴增。
[0015]在一些實施方式中，所述人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體還聯合細胞因子對所述Vδ1 T細胞進行活化擴增；可選地，所述細胞因子包括IL
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4、IL
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12、IL
?
15、IFN
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γ、IL
?
21、或其組合。
[0016]在一些實施方式中，所述人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體或由所述人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體擴增獲得的Vδ1 T細胞在制備殺傷腫瘤細胞的藥物中的應用也屬于本專利技術的內容。
[0017]在一些實施方式中，所述腫瘤細胞包括但不限于Daudi細胞、K562細胞、OVCAR
?
8細胞、HepG2細胞和SW480細胞。
[0018]基于以上技術方案提供的人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體由鼠源單克隆抗體經重輕鏈可變區與人源化抗體重輕鏈恒定區連接獲得，得到的人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體的重鏈可變區包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，輕鏈可變區包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。實施例結果表明，本專利技術提供的人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體能夠在體外特異性活化人γδT細胞中的Vδ1 T細胞亞群增殖，尤其是當該人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體聯合其他細胞因子(例如IL
?
4、IL
?
12、IL
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15、IFN
?
γ和IL
?
21)時更能夠有效活化增殖Vδ1 T細胞，且增殖獲得的Vδ1 T細胞能有效殺傷腫瘤細胞，例如Daudi細胞、K562細胞、OVCAR
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8細胞、HepG2細胞和SW480細胞，因此由本專利技術提供的人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體體外固相化刺激增殖獲得的Vδ1 T細胞對腫瘤細胞具有較好的細胞毒作用，可應用于臨床上腫瘤的Vδ1 T淋巴細胞的過繼免疫治療。
附圖說明
[0019]圖1為12種候選人源化單克隆抗體分別體外活化擴增γδT細胞及Vδ1 T亞群的流式檢測結果。
[00本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.一種人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體，其重鏈可變區包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或由其組成，輕鏈可變區包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或由其組成。2.根據權利要求1所述的人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體，其重鏈恒定區包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或由其組成，輕鏈恒定區包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或由其組成。3.根據權利要求1或2所述的人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體，其重鏈包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或由其組成，輕鏈包含SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或由其組成。4.一種編碼權利要求1
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3中任一項所述的人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體的基因；優選地，其中編碼所述人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體的重鏈的基因包含如SEQ ID NO:13所示的核苷酸序列或由其組成，編碼所述人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體的輕鏈的基因包含如SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列或由其組成。5.含有權利要求4所述的基因的表達載體、轉基因細胞系和宿主菌。6.一種制備權利要求1
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3中任一項所述的人源化抗人Vδ1TCR單克隆抗體的方法，其包括以下步驟：1)將鼠源抗人Vδ1TCR單克隆抗體的重輕鏈可變區的氨基酸序列分別與人源化抗體重輕鏈恒定區的氨基酸序列連接，分別得到人源化抗體的重鏈和輕鏈的氨基酸序列；其中所述鼠源抗人Vδ1TCR單克隆抗體的重鏈可變...
【專利技術屬性】
技術研發人員：何維，蔡孟華，張建民，陳慧，胡愉，許依，
申請(專利權)人：中國醫學科學院基礎醫學研究所，
類型：發明
國別省市：
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