CAR修飾的免疫細胞、制備方法及其應用技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了CAR修飾的免疫細胞、制備方法及其應用，其中所述的BCMA的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段能特異性與BCMA結(jié)合，所述BCMA的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段包括特異性抗體重鏈可變區(qū)的抗原互補決定區(qū)CDR1、CDR2、CDR3和特異性抗體輕鏈可變區(qū)的抗原互補決定區(qū)CDR1、CDR2、CDR3。本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種CAR細胞，所述CAR細胞能夠有效地提高殺傷腫瘤細胞的效率和臨床治療的安全性、有效性；同時，本發(fā)明專利技術(shù)還提供了特異性抗體、CAR結(jié)構(gòu)或一種CAR細胞在制備藥物中的應用，從而提供一種具有優(yōu)良應用前景的高效、可靠、安全的腫瘤治療的新手段。安全的腫瘤治療的新手段。安全的腫瘤治療的新手段。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
CAR修飾的免疫細胞、制備方法及其應用


[0001]本專利技術(shù)屬于免疫治療領(lǐng)域，涉及一種靶向BCMA的CAR修飾的免疫細胞、制備方法及其應用。

技術(shù)介紹

[0002]近年來，免疫治療越來越多的用于腫瘤治療領(lǐng)域，相對于傳統(tǒng)手術(shù)、化療、放療，靶向免疫療法能夠高效的識別腫瘤細胞，并大幅度減少對身體的損傷，具有不可替代的優(yōu)勢和發(fā)展?jié)摿ΑＧ逗峡乖荏w(chimeric antigen receptor，縮寫CAR)修飾的免疫細胞使用遺傳工程手段修飾免疫細胞使其表達外源性抗腫瘤基因。目前隨著腫瘤免疫治療研究的積累，免疫治療手段逐步進入臨床。
[0003]多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是一種漿細胞的惡性腫瘤，全球每年約有160,000新發(fā)病例，是血液系統(tǒng)第二位常見腫瘤，目前仍無法治愈。傳統(tǒng)的治療方法例如蛋白酶抑制劑(PI)和免疫調(diào)節(jié)劑(IMID)雖表現(xiàn)出了很好的療效，卻依舊沒有解決病患復發(fā)率高和藥物有效清除率低等問題。B細胞成熟抗原(B cell maturation antigen，BCMA)在漿細胞中高水平選擇性表達，是理想的MM治療靶點。
[0004]BCMA也叫TNFRSF17(TNF receptor superfamily member 17，TNF配體超家族成員17)，主要在漿細胞和成熟B淋巴細胞中表達，在其它的正常人體細胞中基本檢測不到。BCMA是MM細胞系上最具選擇性表達的受體，其表達量隨著B細胞的分化而逐漸增加，在多發(fā)性骨髓瘤的疾病進程中也逐步遞增。
[0005]自然殺傷(natural killer，縮寫NK)細胞是非特異性免疫系統(tǒng)的重要組成部分，NK細胞是一種廣譜免疫細胞，具有快速發(fā)現(xiàn)和摧毀異常細胞(如癌癥或病毒感染的細胞)的特異功能，而且NK細胞不需要提前致敏或HLA配型，即可有強大的溶解異常細胞的活性。包括NK細胞在內(nèi)的免疫細胞來治療癌癥已成為新的趨勢，新療法有望成為傳統(tǒng)手術(shù)、化療和放療治療無效的腫瘤患者新的治愈希望。

技術(shù)實現(xiàn)思路

[0006]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)提供了一種BCMA的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段，以及一種靶向BCMA的CAR修飾的免疫細胞及其制備方法和應用。
[0007]第一方面，本專利技術(shù)提供了一種BCMA的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0008]進一步，所述特異性抗體或其抗原結(jié)合片段與BCMA特異性地結(jié)合。
[0009]進一步，所述特異性抗體或其抗原結(jié)合片段包括重鏈CDR1、重鏈CDR2、重鏈CDR3、輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3。
[0010]進一步，所述重鏈CDR1含有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或與SEQ IDNO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列。
[0011]進一步，所述重鏈CDR2含有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或與SEQ IDNO:2具有至少70％同一性的氨基酸序列。
[0012]進一步，所述重鏈CDR3含有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或與SEQ IDNO:3具有至少70％同一性的氨基酸序列。
[0013]進一步，所述輕鏈CDR1含有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或與SEQ IDNO:4具有至少70％同一性的氨基酸序列。
[0014]進一步，所述輕鏈CDR2含有SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或與SEQ IDNO:5具有至少70％同一性的氨基酸序列。
[0015]進一步，所述輕鏈CDR3含有SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或與SEQ IDNO:6具有至少70％同一性的氨基酸序列。
[0016]進一步，所述BCMA的特異性抗體的重鏈可變區(qū)具有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。
[0017]進一步，所述BCMA的特異性抗體的輕鏈可變區(qū)具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
[0018]術(shù)語“抗體”在本專利技術(shù)中以最廣義使用，而且明確覆蓋單克隆抗體、多克隆抗體、自至少兩種完整抗體形成的多特異性抗體(例如雙特異性抗體)，只要它們展現(xiàn)期望的生物學活性。
[0019]第二方面，本專利技術(shù)提供了一種分離的核酸分子或包含其的載體。
[0020]進一步，所述核酸分子編碼前面所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0021]進一步，所述載體包括質(zhì)粒、慢病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體、腺相關(guān)病毒載體、線性多核苷酸。
[0022]術(shù)語“核酸”等同于“多核苷酸”、“核苷酸”、“核酸分子”，它們之間可以在本專利技術(shù)中互換使用，指任何長度的核苷酸聚合物，包括DNA和RNA。核苷酸可以是脫氧核糖核苷酸，核糖核苷酸，經(jīng)過修飾的核苷酸或堿基，和/或其類似物，或者是可通過DNA或RNA聚合酶，或者通過合成反應摻入聚合物中的任何底物。
[0023]第三方面，本專利技術(shù)提供了一種BCMA的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段的抗體衍生物。
[0024]進一步，所述抗體衍生物包括前面所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段直接或間接的偶聯(lián)至可檢測標記物形成的復合物。
[0025]進一步，所述可檢測標記物包括熒光色素、親和素、順磁原子、放射性同位素、酶標記物。
[0026]進一步，所述熒光色素包括熒光素、羅丹明、Texas紅、藻紅蛋白、藻藍蛋白、別藻藍蛋白、多甲藻黃素
?
葉綠素蛋白。
[0027]進一步，所述親和素包括生物素、卵白親和素、鏈親和素、卵黃親和素、類親和素。
[0028]進一步，所述放射性同位素包括放射性碘、放射性銫、放射性銥、放射性鈷。
[0029]進一步，所述酶標記物包括辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β
?
半乳糖苷酶、溶菌酶、蘋果酸脫氫酶。
[0030]第四方面，本專利技術(shù)提供了一種抗體或其抗原結(jié)合片段的偶聯(lián)物。
[0031]進一步，所述偶聯(lián)物包括前面所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段與治療劑偶聯(lián)形成的偶聯(lián)物。
[0032]進一步，所述治療劑包括細胞毒性劑、激素制劑、靶向小分子制劑、蛋白酶體抑制
劑、化療劑、溶瘤藥物、細胞因子、共刺激分子的激活劑、抑制性分子的抑制劑。
[0033]第五方面，本專利技術(shù)提供了一種經(jīng)過改造的宿主細胞或包含其的宿主細胞群體。
[0034]進一步，所述改造的宿主細胞包括前面所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段，或本專利技術(shù)第二方面所述的核酸分子或包含其的載體。
[0035]進一步，所述宿主細胞群體還包括所述改造的宿主細胞之外的宿主細胞。
[0036]進一步，所述改造的宿主細胞包括原核細胞、真核細胞。
[0037]進一步，所述原核細胞包括細菌、放線菌、藍細菌、支原體、衣原體、立克次氏體。
[0038]進一步，所述細菌包括大腸桿菌、枯草桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、假單胞菌屬、鏈霉菌、葡萄球菌。
[0039]進一步，所述真核細胞包括哺乳動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞、酵母細胞。
[0040]第六方面，本本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】

【技術(shù)特征摘要】
1.一種BCMA的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段，其特征在于，所述特異性抗體或其抗原結(jié)合片段與BCMA特異性地結(jié)合；優(yōu)選地，所述特異性抗體或其抗原結(jié)合片段包括重鏈CDR1、重鏈CDR2、重鏈CDR3、輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；優(yōu)選地，所述重鏈CDR1含有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或與SEQ ID NO:1具有至少70％同一性的氨基酸序列；優(yōu)選地，所述重鏈CDR2含有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或與SEQ ID NO:2具有至少70％同一性的氨基酸序列；優(yōu)選地，所述重鏈CDR3含有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或與SEQ ID NO:3具有至少70％同一性的氨基酸序列；優(yōu)選地，所述輕鏈CDR1含有SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或與SEQ ID NO:4具有至少70％同一性的氨基酸序列；優(yōu)選地，所述輕鏈CDR2含有SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或與SEQ ID NO:5具有至少70％同一性的氨基酸序列；優(yōu)選地，所述輕鏈CDR3含有SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或與SEQ ID NO:6具有至少70％同一性的氨基酸序列；優(yōu)選地，所述BCMA的特異性抗體的重鏈可變區(qū)具有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；優(yōu)選地，所述BCMA的特異性抗體的輕鏈可變區(qū)具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。2.如下任意一項所述的物質(zhì)：1)一種分離的核酸分子或包含其的載體，其特征在于，所述核酸分子編碼權(quán)利要求1所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段；優(yōu)選地，所述載體包括質(zhì)粒、慢病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體、腺相關(guān)病毒載體、線性多核苷酸；2)一種BCMA的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段的抗體衍生物，其特征在于，所述抗體衍生物包括權(quán)利要求1所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段直接或間接的偶聯(lián)至可檢測標記物形成的復合物；優(yōu)選地，所述可檢測標記物包括熒光色素、親和素、順磁原子、放射性同位素、酶標記物；優(yōu)選地，所述熒光色素包括熒光素、羅丹明、Texas紅、藻紅蛋白、藻藍蛋白、別藻藍蛋白、多甲藻黃素
?
葉綠素蛋白；優(yōu)選地，所述親和素包括生物素、卵白親和素、鏈親和素、卵黃親和素、類親和素；優(yōu)選地，所述放射性同位素包括放射性碘、放射性銫、放射性銥、放射性鈷；優(yōu)選地，所述酶標記物包括辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β
?
半乳糖苷酶、溶菌酶、蘋果酸脫氫酶；3)一種抗體或其抗原結(jié)合片段的偶聯(lián)物，其特征在于，所述偶聯(lián)物包括權(quán)利要求1所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段與治療劑偶聯(lián)形成的偶聯(lián)物；優(yōu)選地，所述治療劑包括細胞毒性劑、激素制劑、靶向小分子制劑、蛋白酶體抑制劑、化療劑、溶瘤藥物、細胞因子、共刺激分子的激活劑、抑制性分子的抑制劑；4)一種經(jīng)過改造的宿主細胞或包含其的宿主細胞群體，其特征在于，所述改造的宿主
細胞包括權(quán)利要求1所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段，或權(quán)利要求2所述的核酸分子或包含其的載體；優(yōu)選地，所述宿主細胞群體還包括所述改造的宿主細胞之外的宿主細胞；優(yōu)選地，所述改造的宿主細胞包括原核細胞、真核細胞；優(yōu)選地，所述原核細胞包括細菌、放線菌、藍細菌、支原體、衣原體、立克次氏體；優(yōu)選地，所述細菌包括大腸桿菌、枯草桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、假單胞菌屬、鏈霉菌、葡萄球菌；優(yōu)選地，所述真核細胞包括哺乳動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞、酵母細胞。3.一種檢測BCMA的產(chǎn)品，其特征在于，所述產(chǎn)品包括權(quán)利要求1所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段或權(quán)利要求2中2)所述的抗體衍生物；優(yōu)選地，所述產(chǎn)品包括試劑盒、芯片或試紙。4.一種靶向BCMA的CAR，其特征在于，所述CAR包括靶向BCMA的胞外抗原結(jié)合域，所述胞外抗原結(jié)合域包括權(quán)利要求1中所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈CDR1、重鏈CDR2、重鏈CDR3、輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3；優(yōu)選地，所述胞外抗原結(jié)合域包括權(quán)利要求1中所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈可變區(qū)；優(yōu)選地，所述胞外抗原結(jié)合域包括權(quán)利要求1中所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段的輕鏈可變區(qū)；優(yōu)選地，所述胞外抗原結(jié)合域中的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間由linker連接；優(yōu)選地，所述linker的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示；優(yōu)選地，所述胞外抗原結(jié)合域的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示；優(yōu)選地，所述CAR還包括鉸鏈區(qū)、跨膜結(jié)構(gòu)域、共刺激結(jié)構(gòu)域、胞內(nèi)信號傳導結(jié)構(gòu)域中的一種或多種；優(yōu)選地，所述鉸鏈區(qū)是如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列；優(yōu)選地，所述跨膜結(jié)構(gòu)域是如SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列；優(yōu)選地，所述共刺激結(jié)構(gòu)域是如SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列；優(yōu)選地，所述胞內(nèi)信號傳導結(jié)構(gòu)域是如SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列；優(yōu)選地，所述CAR結(jié)構(gòu)完整的氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示。5.一種核酸分子或包含其的載體，其特征在于，所述核酸分子包括編碼權(quán)利要求4所述的CAR；優(yōu)選地，所述載體包括質(zhì)粒、慢病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體、腺相關(guān)病毒載體、線性多核苷酸。6.一種經(jīng)過改造的宿主細胞或包含其的宿主細胞群體，其特征在于，所述改造的宿主細胞或包含其的宿主細胞群體包括權(quán)利要求4所述的CAR、權(quán)利要求5所述的核酸分子或包含其的載體；優(yōu)選地，所述宿主細胞群體還包含所述改造的宿主細胞之外的宿主細胞；優(yōu)選地，所述改造的宿主細胞包括原核細胞、真核細胞；優(yōu)選地，所述原核細胞包括細菌、放線菌、藍細菌、支原體、衣原體、立克次氏體；優(yōu)選地，所述細菌包括大腸桿菌、枯草桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、假單胞菌屬、鏈霉菌、葡
萄球菌；優(yōu)選地，所述真核細胞包括哺乳動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞、酵母細胞；優(yōu)選地，所述哺乳動物細胞包括成纖維細胞、淋巴細胞、上皮細胞、成髓細胞；優(yōu)選地，所述淋巴細胞包括T細胞、B細胞、NK細胞；優(yōu)選地，所述載體包括質(zhì)粒、慢病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體、腺相關(guān)病毒載體、線性多核苷酸；優(yōu)選地，所述載體為質(zhì)粒載體；優(yōu)選地，所述質(zhì)粒載體是pLenti
?
puro。7.如下任一種方法，其特征在于，所述方法包括：(1)一種生產(chǎn)權(quán)利要求1所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：培養(yǎng)權(quán)利要求2中4)所述的改造的宿主細胞或包含其的宿主細胞群體，從培養(yǎng)物中分離出權(quán)利要求1所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段；(2)一種非診斷和非治療目的檢測待測樣品中BCMA或其片段的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：將待測樣品與權(quán)利要求1所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段接觸或?qū)⒋郎y樣品與權(quán)利要求2中2)所述的抗體衍生物接觸，檢測BCMA或其片段與權(quán)利要求1所述的特異性抗體或其抗原結(jié)合片段或權(quán)利要求2中2)所述的抗體衍生物的復合物的形成；(3...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉永峰，蘆志華，
申請(專利權(quán))人：北京奇邁永華生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：