本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種青稞嫩葉酶提多糖的制備方法及其應(yīng)用；本發(fā)明專利技術(shù)所述的青稞嫩葉酶提多糖的制備方法可以得到高純度的酶提多糖，酶提多糖的提取率可達7.68％，純度可達99.75％。本發(fā)明專利技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)所述的青稞嫩葉酶提多糖具有良好的抗癌活性，可以顯著抑制乳腺癌細胞和結(jié)直腸癌細胞增殖。尤其能夠特異性地抑制結(jié)直腸癌細胞的增殖，且不影響正常結(jié)腸粘膜上皮細胞的增殖，具有生物相容性好、特異性強、毒副作用低等特點，能夠彌補傳統(tǒng)癌癥治療手段的不足，具有廣闊的應(yīng)用前景。有廣闊的應(yīng)用前景。有廣闊的應(yīng)用前景。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
青稞嫩葉酶提多糖的制備方法及其應(yīng)用
[0001]本專利技術(shù)屬于抗癌活性成分
，涉及一種青稞嫩葉酶提多糖的制備方法及其應(yīng)用，具體涉及一種青稞嫩葉酶提多糖的制備方法和在抗癌中的應(yīng)用，尤其涉及一種從青稞嫩葉中酶提多糖的制備方法和在特異性抑制結(jié)直腸癌細胞增殖中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
[0002]青稞生長在嚴(yán)寒缺氧的高原地帶，是藏族人民每日飲食當(dāng)中最主要的碳水化合物來源，具有突出的醫(yī)療保健功效，被認為是藏族人民長壽的重要因素之一。嚴(yán)寒、缺氧、干燥、強光照射等特殊環(huán)境使得青稞獲得了極強的抗逆性，產(chǎn)生了十分豐富的次生代謝產(chǎn)物。青稞也因其營養(yǎng)組成全面且獨特、食療價值高而越來越受到民眾青睞。有學(xué)者指出，青稞中的酶提多糖含量普遍高于世界其它地區(qū)種植的大麥品種。因此酶提多糖也被認為是青稞中與人體健康和長壽關(guān)系最為密切的營養(yǎng)物質(zhì)。根據(jù)報道，酶提多糖具有：1)降低血清膽固醇，預(yù)防心血管疾病；2)調(diào)節(jié)血糖水平，預(yù)防糖尿病；3)促進腸道益生菌增殖，預(yù)防腸癌；4)調(diào)節(jié)機體免疫功能等功效，應(yīng)用前景廣泛。目前對植物多糖的研究主要聚焦在小麥、大麥、玉米等谷類作物，其提取方法也主要分為水法、堿法、酶法以及這些方法的聯(lián)用。其中，酶法改性主要是通過體系外加酶，如添加淀粉酶和蛋白酶去除淀粉和蛋白質(zhì)，添加纖維素酶切斷不溶性膳食纖維的β
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1,4
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糖苷鍵，增強多糖的溶解性，持水性等理化性質(zhì)。該方法的優(yōu)點在于反應(yīng)條件簡單，對設(shè)備要求較低，操作方便；另外，酶法改性還具有專一性的特點。本專利技術(shù)采用復(fù)合酶法提取的方法為實驗室優(yōu)化后的最佳方法，最大限度增加了多糖的得率，并保證了多糖的生物活性。
[0003]目前對植物多糖分子細胞活性的研究主要以抗炎作用、抗氧化作用和抗腫瘤作用為主，對于植物多糖在抗癌方面的研究數(shù)量很多，由于癌癥對人體健康的危害高且治療難度大，許多學(xué)者將目光投向了天然藥物，希望將如植物多糖的天然物質(zhì)用于腫瘤的預(yù)防和治療。國內(nèi)外對裸大麥(青稞即為裸大麥的一種)中酶提多糖的研究相對較少。借鑒專家學(xué)者對谷物中酶提多糖的研究方法，我們優(yōu)化提取方法及其工藝，成功從青稞嫩葉中分離純化得到高純度的酶提多糖。另外，與化療、放療相比，天然提取的多糖，作為抗腫瘤藥物，具有生物相容性好、作用平緩、毒副作用低、不容易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點。因此，開發(fā)青稞嫩葉酶提多糖的抗癌活性不僅可以擴大青稞嫩葉的應(yīng)用范圍，提高其相關(guān)產(chǎn)品的附加值，并且可以彌補傳統(tǒng)抗癌藥物的毒副作用大，價格高昂等缺點。綜上所述，本專利技術(shù)在開發(fā)天然安全的抗癌藥物中具有廣泛的應(yīng)用前景。
技術(shù)實現(xiàn)思路
[0004]本專利技術(shù)提供了一種青稞嫩葉酶提多糖的制備方法及其應(yīng)用。具體而言，
[0005]第一目的在于提供一種全新的從青稞嫩葉中提取和純化的酶提多糖活性成分。
[0006]本專利技術(shù)第二目的在于提供一種所述的青稞嫩葉酶提多糖的制備方法。
[0007]本專利技術(shù)第三目的在于提供所述青稞嫩葉酶提多糖活性成分在用于制備抗癌藥物
中的應(yīng)用。
[0008]本專利技術(shù)的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：
[0009]第一方面，本專利技術(shù)涉及一種青稞嫩葉酶提多糖活性成分的制備方法，所述方法包括如下步驟：
[0010]S1、將青稞葉真空冷凍干燥、打粉后收集獲得青稞嫩葉粉；
[0011]S2、將青稞嫩葉粉進行脫脂、酶提以及醇沉得到青稞酶提粗多糖；
[0012]S3、將青稞酶提粗多糖先用纖維素柱進行分離后再經(jīng)葡聚糖凝膠柱純化處理即得青稞嫩葉酶提多糖活性成分。
[0013]作為本專利技術(shù)的一個實施方案，所述的青稞品種為青海黃，打粉后過200目網(wǎng)篩，獲得大小均一的粉末。
[0014]作為本專利技術(shù)的一個實施方案，步驟S1中，真空冷凍干燥的條件為
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50～
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60℃，4
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6小時；
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35～
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40℃，10
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15小時；
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10～
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20℃，10
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15小時；20
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25℃，24
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48小時。優(yōu)選真空冷凍干燥的條件為
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60℃，6小時；
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35℃，15小時；
?
20℃，15小時；25℃，48小時，依次進行。
[0015]在一些實施例中，步驟S1，在種植盤中種植青稞種子，待青稞葉長度長到15cm左右時，將青稞葉從根部剪下，清洗、冷藏、真空冷凍干燥、打粉后收集獲得的青稞嫩葉粉。
[0016]具體地，在每個種植盤中均勻種滿100g左右用清水浸泡隔夜的青海黃青稞種子，之后用少量營養(yǎng)土覆蓋青稞種子，充分澆水至營養(yǎng)土濕透，之后每天澆水少量，種植周期為14
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21天。
[0017]作為本專利技術(shù)的一個實施方案，步驟S2中，脫脂過程中以石油醚作溶劑進行脫脂，青稞嫩葉粉與石油醚的比例為1g：40
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50mL。脫脂條件為55
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60℃浸泡90
?
120分鐘，65
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70℃抽提120
?
150min，75
?
80℃回收15
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20min；脫脂處理后進行固液分離，獲得的脫脂物進行后續(xù)的提取。
[0018]作為本專利技術(shù)的一個實施方案，步驟S2中，水提過程，按青稞粉和水1:20
?
1:30的重量比投加水。
[0019]作為本專利技術(shù)的一個實施方案，步驟S2中，所述酶解為將耐高溫α
?
淀粉酶、木瓜蛋白酶、糖化酶、木聚糖酶和纖維素酶加入上述溶液進行酶解。
[0020]作為本專利技術(shù)的一個實施方案，步驟S2中，向上述青稞粉水溶液中加入5
?
10μL/g青稞粉的耐高溫α
?
淀粉酶，80
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90℃水浴1
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2h；水浴溫度調(diào)至60
?
80℃，加入5
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10μL/g青稞粉的木瓜蛋白酶，水浴1
?
2h；100℃水浴滅酶10
?
20min，冷卻后加入40
?
50μL/g青稞粉的糖化酶，60
?
80℃水浴1
?
2h；100℃水浴滅酶10
?
20min，冷卻后60
?
90℃水浴2
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4h，得到酶解液。
[0021]作為本專利技術(shù)的一個實施方案，所得酶解液用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至5
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6，加入600
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1000U/g青稞嫩葉粉的木聚糖酶和200
?
600U/g青稞嫩葉粉的纖維素酶，40
?
60℃保溫2
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3h后100℃水浴滅酶10
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20min。將酶解所得上清液于60
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80℃下水浴濃縮至50mL本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
【技術(shù)特征摘要】
1.一種青稞嫩葉酶提多糖活性成分的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：S1、將青稞葉真空冷凍干燥、打粉后收集獲得青稞嫩葉粉；S2、將青稞嫩葉粉進行脫脂、酶提、醇沉以及干燥得到青稞酶提粗多糖；S3、將青稞酶提粗多糖先用纖維素柱進行分離后再經(jīng)葡聚糖凝膠柱純化處理即得青稞嫩葉酶提多糖活性成分。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟S2中，脫脂過程中以石油醚為溶劑進行脫脂，青稞嫩葉粉與石油醚的比例為1g：40
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50mL；脫脂條件為55
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60℃浸泡90
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120min，65
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70℃抽提120
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150min，75
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80℃回收15
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20min；脫脂處理后進行固液分離，獲得的脫脂物進行后續(xù)的提取過程。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟S2中，所述酶提過程為將青稞嫩葉粉和水1:20
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1:30的重量比投加水，向上述溶液中加入5
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10μL/g青稞粉的耐高溫α
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淀粉酶，80
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90℃水浴1
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2h；水浴溫度調(diào)至60
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80℃，加入5
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10μL/g青稞粉的木瓜蛋白酶，水浴1
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2h；100℃水浴滅酶10
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20min，冷卻后加入40
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50μL/g青稞粉的糖化酶，60
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80℃水浴1
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2h；100℃水浴滅酶10
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20min，冷卻后60
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4h，得到酶解液。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟S2中，所得酶解液用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至5
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6，加入600
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1000U/g青稞嫩葉粉的木聚糖酶和200
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600U/g青稞嫩葉粉的纖維...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：隋中泉，徐義娟，王明明，南流，南瀟，
申請(專利權(quán))人：上海愛發(fā)投資管理有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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