經改造的流感血凝素多肽的修飾制造技術

本發明專利技術尤其提供了具有擴寬的免疫原性譜的經修飾的重組HA多肽，其將覆蓋范圍擴展至抗原性不同的流感毒株，以及其制備和使用方法。以及其制備和使用方法。以及其制備和使用方法。

【技術實現步驟摘要】
經改造的流感血凝素多肽的修飾
[0001]本申請是申請號為2017800485714的中國專利技術專利申請(申請日：2017年6月2日，專利技術名稱：經改造的流感血凝素多肽的修飾)的分案申請。
[0002]相關申請的交叉引用
[0003]本專利申請要求于2016年6月3日提交的美國臨時申請62/345,502的優先權，所述美國臨時申請整體在此以引用的方式并入。

技術介紹

[0004]流感在大流行病、地方流行病、復蘇和爆發方面具有悠久的歷史。疫苗已成為針對流感最有效的防御。然而，由于流感繼續跨越全球引起嚴重的健康問題，所以設計和制造逐年誘導毒株特異性免疫的疫苗的努力一直很困難。實際上，目前上市的流感疫苗必須基于即將到來的季節中將存在于人群中的預測毒株每年進行更新。
[0005]目前的流感疫苗基于誘導對流感病毒的表面上存在的血凝素抗原的免疫。血凝素(HA)是負責通過與其膜上的含唾液酸結構的相互作用將流感病毒與細胞結合的糖蛋白。由于病毒的持續突變和通過宿主的免疫壓力，它跨越流感毒株是高度可變的。HA分子中的可變性(也稱為抗原漂移)導致基于HA多肽的疫苗一般僅對相關循環病毒的小亞集反應。隨著時間過去，隨著病毒繼續突變，交叉反應毒株的數目降低。因而，當HA分子的變異使得現有疫苗不再有效時，定期修飾流感疫苗的HA組合物。在目前針對流感疫苗接種的策略中，通用疫苗的開發有希望增加目前毒株特異性疫苗的寬度和對抗原漂移的耐受性。通用流感疫苗具有保護人和動物不受廣泛范圍的流感類型、亞型和毒株(包括大流行和/或季節性毒株)的潛力。設計通用流感抗原的幾種方法是本領域已知的。然而，現有方法經常導致HA多肽仍然偏向季節性或大流行毒株。

技術實現思路

[0006]本專利技術提供了具有擴寬的免疫原性譜的改進的經修飾的重組HA多肽，其將覆蓋范圍(即，引發針對HA多肽的免疫原性應答的能力)擴展至抗原性不同的流感毒株，例如新的或另外的大流行和/或季節性流感株。本專利技術部分基于從循環流感毒株中的序列變異的計算機芯片分析推導的修飾，HA的抗原區域的繪制，和/或HA肽的表位模式和結構分析。隨后可以在具有已知免疫譜的HA多肽的各種氨基酸殘基位置和/或特定區域處引入靶向修飾，以產生具有改善的和更平衡的免疫譜的新型HA多肽。如下文詳細描述的，包括實例部分，本專利技術人已尤其開發了用于改造HA多肽以擴展季節性應答譜以覆蓋大流行毒株的各種不同策略，或反之亦然。這些策略擴展了跨越抗原性不同毒株的序列(或進化枝)簇的免疫譜；隨著時間過去，它們可以應用于經改造的重組HA分子，使得它繼續引發針對抗原漂移的循環季節性毒株的免疫應答。在所有情況下，該策略被設計為一般保留宿主HA多肽的受體結合位點(RBS)的特定殘基，其具有在RBS附近的區域中改造的修飾。類似的策略可以用于擴展大流行應答譜，以覆蓋季節性毒株。本專利技術的組合物和方法適用于廣泛多樣的重組HA多肽，包括通過各種方法改造的那些和包含基本上野生型序列的那些。
[0007]因此，在一個方面，本專利技術提供了重組血凝素(HA)多肽，其包含源自具有占優勢的季節性免疫譜的經改造的HA多肽的經改造的頭區或其區段和源自大流行毒株的莖區。在一些實施例中，經改造的頭區或其區段包含與對應于SEQ ID NO:1的位置135
–
269、125
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277、或63
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278的氨基酸至少95％、96％、97％、98％、99％或更相同的序列。在一些實施例中，經改造的頭區或其區段包含與對應于SEQ ID NO:1(SMARt_DO2a序列)的位置135
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269、125
–
277、或63
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278的氨基酸相同的序列。
[0008]在一些實施例中，莖區源自天然存在的或野生型大流行毒株。在一些實施例中，合適的天然存在的大流行毒株選自A/California/07/2009、A/New Jersey/10/1976或A/South Carolina/1/1918。在一些實施例中，莖區源自具有大流行性免疫譜的經改造的HA多肽。
[0009]在一些實施例中，具有大流行性免疫譜的經改造的HA多肽通過以下進行改造：計算優化的廣泛反應性抗原(COBRA)技術、拼接技術、基于共有區的流感毒株組合、結構域的缺失和/或重排、結構域交換或者多個流感毒株中的中和或交叉反應表位的組合。
[0010]在另一個方面，本專利技術提供了包含經改造的頭區的重組流感血凝素(HA)多肽，所述經改造的頭區源自具有占優勢的季節性免疫譜的HA多肽，并且包含在由NxS/Ty的共有序列限定的一個或多個推定的N聯糖基化位點處的一個或多個氨基酸取代、缺失或插入，其中x和y不是脯氨酸(P)，使得一個或多個推定的N聯糖基化位點被破壞。在特定實施例中，一個或多個氨基酸取代、缺失或插入中的每一個源自大流行毒株中的相應序列。
[0011]在另外一個方面，本專利技術提供了包含經改造的頭區的重組流感血凝素(HA)多肽，所述經改造的頭區源自具有占優勢的大流行性免疫譜的HA多肽，在其內已插入由NxS/Ty的共有序列限定的一個或多個經改造的推定的N聯糖基化位點，其中x和y不是P。在特定實施例中，一個或多個經改造的推定的N聯糖基化位點中的每一個通過基于季節性毒株中的相應序列的氨基酸取代、缺失或插入進行改造。
[0012]在一些實施例中，血凝素對應于A型流感。在一些實施例中，A型流感是H1N1亞型。
[0013]在一些實施例中，一個或多個推定的N聯糖基化位點對應于位置142
?
145和/或177
?
179(與A/California/07/2009HA(SEQ ID NO:2)的標準化序列比對；“CA09編號”)。在一些實施例中，一個或多個推定的N聯糖基化位點在受體結合位點(RBS)的15埃內，其中所述RBS定義為在三維(3
?
D)結構中對應于W167(CA09編號)的位置15埃內的所有氨基酸殘基?？商娲?，RBS可以定義為由單克隆抗體CH65的互補位結合的表位，并且一個或多個氨基酸取代鄰近(例如，在100個氨基酸殘基內、在75個氨基酸殘基內、在50個氨基酸殘基內、在40個氨基酸殘基內、在30個氨基酸殘基內、在25個氨基酸殘基內、在20個氨基酸殘基內、在15個氨基酸殘基內、在10個氨基酸殘基內、在5個氨基酸殘基內等)CH65的表位發生。在一些實施例中，一個或多個氨基酸取代、缺失或插入選自本文提供的列表或表，例如表4或表5。在一些實施例中，一個或多個氨基酸取代、缺失或插入包括將共有序列NxS/Ty修飾為z1z2z3z4，其中z1是N、D、K或S；z2是Y或不變；z3是E、D或N；并且z4是I、L、P、S或T，或者不變。
[0014]在一些實施例中，一個或多個氨基酸取代、缺失或插入源自其的大流行毒株或季節性毒株是循環流感毒株。在一些實施例中，循環流感毒株選自A/California/07/2009和A/South Carolina/1/1918。在一些實施例中本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種重組流感血凝素(HA)多肽，其包含源自具有占優勢的季節性免疫譜的經改造的HA多肽的經改造的頭區；和源自大流行毒株的莖區。2.根據權利要求1所述的重組流感HA多肽，其中所述經改造的頭區包含與對應于SEQ ID NO：1(SMARt_DO2a序列)的位置135
?
269、125
?
277或63
?
278的氨基酸至少95％相同的序列。3.根據權利要求2所述的重組流感HA多肽，其中所述序列與對應于SEQ ID NO：1(SMARt_DO2a序列)的位置135
?
269、125
?
277或63
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278的氨基酸至少96％相同。4.根據權利要求2或3所述的重組流感HA多肽，其中所述序列與對應于SEQ ID NO：1(SMARt_DO2a序列)的位置135
?
269、125
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277或63
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278的氨基酸至少98％相同。5.根據權利要求2
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4中任一項所述的重組流感HA多肽，其中所述序列與對應于SEQ ID NO：1(SMARt_DO2a序列)的位置135
?

【專利技術屬性】
技術研發人員：T，
申請(專利權)人：圣諾菲，
類型：發明
國別省市：