一種貝萊斯芽孢桿菌發酵液、制備方法及其應用技術

本發明專利技術公開了一種貝萊斯芽孢桿菌發酵液、制備方法及其應用，涉及微生物菌劑領域，解決了現有技術中采用化學方法防治煙草黑脛病效果不佳、抗藥性增強以及對環境造成污染的問題。本發明專利技術貝萊斯芽孢桿菌發酵液的制備方法，包括菌種活化、種子液的制備和發酵培養的步驟，將所得的貝萊斯芽孢桿菌YWF

【技術實現步驟摘要】
一種貝萊斯芽孢桿菌發酵液、制備方法及其應用


[0001]本專利技術涉及微生物菌劑
，尤其涉及一種貝萊斯芽孢桿菌發酵液、制備方法及其應用。

技術介紹

[0002]貝萊斯芽孢桿菌是一類好氧或兼性厭氧、產芽孢的革蘭氏陽性桿狀細菌。相較于其它微生物而言，芽孢桿菌最突出的特點是可在惡劣的環境中產生抗逆性強的芽孢以度過不良的環境條件，且芽孢桿菌在自然界中普遍存在，對人畜無害，對植物無致病性。
[0003]中國煙區遼闊，自然條件迥異，煙草本身可塑性強，容易受環境影響而變異，經過人們長期的栽培和選擇，形成了各具特色的眾多品種，加之不斷引進新品種，形成了類型俱全、數量豐富的煙草資源。蟲害和病害是影響煙草農藝性狀和經濟性狀的威脅因子，如煙草黑脛病，其分布面積廣，危害嚴重。傳統的化學防治方法對抗煙草黑脛病的效果不佳，并且連年使用化學藥劑，不僅使黑脛病病菌的抗藥性有所增強，而且對環境造成巨大污染。
[0004]生物防治安全、無污染、無公害，是對煙草上有害生物進行綜合治理的發展方向。因此，有必要提供一種生物菌劑以防治煙草黑脛病病菌。

技術實現思路

[0005]本專利技術的目的是提出一種貝萊斯芽孢桿菌發酵液、制備方法及其應用，解決了現有技術中采用化學方法防治煙草黑脛病效果不佳、黑脛病病菌抗藥性增強以及對環境造成巨大污染的技術問題。本專利技術優選技術方案所能產生的諸多技術效果詳見下文闡述。
[0006]為實現上述目的，本專利技術提供了以下技術方案：
[0007]本專利技術貝萊斯芽孢桿菌發酵液的制備方法，包括如下步驟：
[0008]菌種活化：將保存的貝萊斯芽孢桿菌YWF
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0003甘油管菌種稀釋104、105和106倍，在LB固體培養基上，活化培養，得到活化后的貝萊斯芽孢桿菌YWF
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0003種子，挑選所得菌苔作為種子液菌種備用；
[0009]種子液的制備：將所挑選的種子液菌種接入含有種子液培養基的種子罐中，在溫度為32～37℃，攪拌速度為180～300r/min條件下恒溫培養14～20h，得貝萊斯芽孢桿菌YWF
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0003種子液；
[0010]發酵培養：將所得的貝萊斯芽孢桿菌YWF
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0003種子液以3％～6％的接種量接入主發酵液體培養基，在通氣量為0.8～1.7vvm，轉速為300～500rpm/min，培養溫度為35℃～37℃條件下，培養時間24h～36h，得貝萊斯芽孢桿菌YWF
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0003發酵液。
[0011]本專利技術的貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus velezensis)，其編號為YWF
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0003，保藏登記號為CCTCC No：M 2022752，保藏日期2022年05月30日，保藏單位：中國典型培養物保藏中心，保藏地址：中國.武漢.武漢大學(湖北省武漢市武昌區八一路299號)。
[0012]根據一個優選實施方式，菌種活化過程中，LB固體培養基的配方為：細菌學蛋白胨10g/L，NaCl 5g/L，酵母提取粉5g/L。
[0013]根據一個優選實施方式，種子液制備過程中，種子液培養基的配方為：牛肉膏3～5g/L，細菌學蛋白胨5～8g/L，葡萄糖3～5g/L，甘露醇5～8g/L。
[0014]根據一個優選實施方式，發酵培養過程中，主發酵液體培養基的配方為：葡萄糖15～20g/L，豆粕粉15～20g/L，酵母膏4～8g/L，甘露醇5～8g/L，磷酸氫二鉀1～2g/L，硫酸鎂0.5～1g/L。
[0015]根據一個優選實施方式，發酵培養過程中，主發酵液體培養基的pH值為6.0～8.0。
[0016]本專利技術的貝萊斯芽孢桿菌發酵液，所述發酵液是通過本專利技術中任一項技術方案所述的貝萊斯芽孢桿菌發酵液的制備方法所得的貝萊斯芽孢桿菌YWF
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0003發酵液。
[0017]根據一個優選實施方式，所述貝萊斯芽孢桿菌YWF
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0003發酵液中，貝萊斯芽孢桿菌YWF
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0003的有效活菌數為94.4
×
108cfu/ml～113
×
108cfu/ml。
[0018]本專利技術中任一項技術方案所述的貝萊斯芽孢桿菌發酵液在防治煙草黑脛病中的應用。
[0019]根據一個優選實施方式，將貝萊斯芽孢桿菌發酵液與水按質量比為1∶100混勻后施用。
[0020]根據一個優選實施方式，所述貝萊斯芽孢桿菌發酵液采用灌根的方式施加于煙草根部。
[0021]本專利技術提供的貝萊斯芽孢桿菌發酵液、制備方法及其應用至少具有如下有益技術效果：
[0022]本專利技術提供的貝萊斯芽孢桿菌發酵液，將其用于防治煙草黑脛病，發酵液中的芽孢可抑制土壤煙草黑脛病病原菌的生長和改善土壤微生態環境，其代謝分泌的抑菌活性物質細胞壁降解酶類(葡聚糖酶和蛋白酶)、脂肽類抗生素(表面活性素、伊枯草菌素和芬薺素)以及聚酮類抗生素可水解煙草黑脛病病源真菌細胞壁、抑制病原真菌分生孢子萌發、芽管生長和附著胞的形成；還可改變細胞質膜的結構和滲透性，引起胞內物質外泄，導致細胞死亡，因此，發酵液對煙草黑脛病致病菌有明顯的抑制作用；另一方面，發酵液安全無毒、無殘留、且不會污染環境。可見，本專利技術提供的貝萊斯芽孢桿菌發酵液及其應用，解決了現有技術中采用化學方法防治煙草黑脛病效果不佳、黑脛病病菌抗藥性增強以及對環境造成巨大污染的技術問題。
[0023]本專利技術貝萊斯芽孢桿菌發酵液的制備方法，可以提高發酵液的芽孢含量，從而提高所得發酵液的生防效果；另一方面，本專利技術的制備方法通過對原料(培養基原料)進行合理的配比，使原料利用率最大化，縮短發酵周期，適于批量生產，從而降低人工，設備及水、電、氣等運行成本，最終提高經濟效益。
[0024]另外，本專利技術優選技術方案還具有如下有益技術效果：
[0025]本專利技術優選技術方案的制備方法，種子液制備過程中，種子液培養基的配方為：牛肉膏3～5g/L，細菌學蛋白胨5～8g/L，葡萄糖3～5g/L，甘露醇5～8g/L，此配方的種子液培養基在進行種子液培養時，可提高種子活性。
[0026]本專利技術優選技術方案的制備方法，發酵培養過程中，主發酵液體培養基的配方為：葡萄糖15～20g/L，豆粕粉15～20g/L，酵母膏4～8g/L，甘露醇5～8g/L，磷酸氫二鉀1～2g/L，硫酸鎂0.5～1g/L，此配方的主發酵液體培養基可明顯提升發酵液中的菌量。
附圖說明
[0027]為了更清楚地說明本專利技術實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本專利技術的一些實施例，對于本領本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種貝萊斯芽孢桿菌發酵液的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：菌種活化：將保存的貝萊斯芽孢桿菌YWF
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0003甘油管菌種稀釋104、105和106倍，在LB固體培養基上，活化培養，得到活化后的貝萊斯芽孢桿菌YWF
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0003種子，挑選所得菌苔作為種子液菌種備用；種子液的制備：將所挑選的種子液菌種接入含有種子液培養基的種子罐中，在溫度為32～37℃，攪拌速度為180～300r/min條件下恒溫培養14～20h，得貝萊斯芽孢桿菌YWF
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0003種子液；發酵培養：將所得的貝萊斯芽孢桿菌YWF
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0003種子液以3％～6％的接種量接入主發酵液體培養基，在通氣量為0.8～1.7vvm，轉速為300～500rpm/min，培養溫度為35℃～37℃條件下，培養時間24h～36h，得貝萊斯芽孢桿菌YWF
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0003發酵液。2.根據權利要求1所述的貝萊斯芽孢桿菌發酵液的制備方法，其特征在于，菌種活化過程中，LB固體培養基的配方為：細菌學蛋白胨10g/L，NaCl 5g/L，酵母提取粉5g/L。3.根據權利要求1所述的貝萊斯芽孢桿菌發酵液的制備方法，其特征在于，種子液制備過程中，種子液培養基的配方為：牛肉膏3～5g/L，細菌學蛋白胨5～8g/L，葡萄糖3～5g/L，甘...

【專利技術屬性】
技術研發人員：郭紹青，潘菲，楊毅，周歡，趙崇鈞，吳有祥，楊潤霞，
申請(專利權)人：云南省微生物發酵工程研究中心有限公司，
類型：發明
國別省市：