本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)公開(kāi)了一種提取細(xì)菌基因組DNA的方法及其應(yīng)用，包括，取樣本液，與A組分混合，其中，A組分包括Tris、EDTA和水；加入B組分，其中，B組分由不同粒徑的玻璃珠混合組成；置于漩渦混勻儀震蕩混勻后，在水浴鍋高溫將蛋白質(zhì)變性，得到核酸提取液；將核酸提取液冷卻至室溫后，獲得的細(xì)菌基因組DNA。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)簡(jiǎn)便快速易操作、提取方法操作步驟少，操作簡(jiǎn)單，整個(gè)過(guò)程僅需要15分鐘就可以完成；提取通量高，樣品需求少:可以一次性提取多個(gè)樣本，樣本可以是培養(yǎng)皿的單菌落菌體或增菌液。皿的單菌落菌體或增菌液。皿的單菌落菌體或增菌液。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種提取細(xì)菌基因組DNA的方法及其應(yīng)用
[0001]本專(zhuān)利技術(shù)屬于體外診斷試劑領(lǐng)域，具體涉及到一種提取細(xì)菌基因組DNA的方法及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
[0002]目前，在臨床或科研領(lǐng)域中常規(guī)核酸提取方法包括物理法、化學(xué)法、酶法以及上述方法的組合。物理法包括凍融、超聲、煮沸、研磨等。化學(xué)法為采用十二烷基硫酸鈉(SDS)、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、Trixon、螯合樹(shù)脂、吐溫20等裂解后進(jìn)行提取。酶法為采用蛋白酶K、植物蛋白酶、溶菌酶等裂解后進(jìn)行提取。
[0003]文獻(xiàn)1(CN103820431A)和文獻(xiàn)2(CN104450684A)公開(kāi)了用磁珠法提取病毒或細(xì)菌中核酸的試劑盒及提取方法。該方法主要是通過(guò)裂解液將病毒或細(xì)菌破碎，破碎后通過(guò)磁珠吸附游離的核酸形成磁珠
?
核酸復(fù)合物，并在配合磁場(chǎng)的作用下完成核酸的純化。該方法提取的核酸純度高、完整、可直接用于后續(xù)檢測(cè)，但是存在核酸提取時(shí)間較長(zhǎng)、操作步驟復(fù)雜、成本昂貴，并在利用磁場(chǎng)
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磁珠反復(fù)純化核酸的過(guò)程中造成核酸流失等問(wèn)題。
[0004]酶解法需要用酶來(lái)消化細(xì)胞壁肽聚糖成分，然后用溶劑抽提，如酚/氯仿。吸附DNA材料主要采用硅質(zhì)材料、陰離子交換樹(shù)脂及磁珠等。該方法試劑耗材價(jià)格昂貴，成本較高。且步驟多、費(fèi)時(shí)，操作過(guò)程中易產(chǎn)生蛋白酶殘留，導(dǎo)致PCR反應(yīng)受到抑制，酚、氯仿等有機(jī)溶劑易造成環(huán)境污染，有損實(shí)驗(yàn)操作者的健康。
[0005]不論是上述文獻(xiàn)中提到的磁珠法、酶解法的核酸提取方法，還是其他常規(guī)核酸提取方法均如凍融、超聲、煮沸、研磨等破除細(xì)菌的細(xì)胞壁，普遍存在步驟繁瑣、操作復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)，嚴(yán)重減緩了檢測(cè)速度，價(jià)格昂貴、試劑保存條件苛刻，以及核酸提取物不能直接用于后續(xù)核酸擴(kuò)増，需要用特殊儀器等方面的限制。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
[0006]本部分的目的在于概述本專(zhuān)利技術(shù)的實(shí)施例的一些方面以及簡(jiǎn)要介紹一些較佳實(shí)施例。在本部分以及本申請(qǐng)的說(shuō)明書(shū)摘要和專(zhuān)利技術(shù)名稱(chēng)中可能會(huì)做些簡(jiǎn)化或省略以避免使本部分、說(shuō)明書(shū)摘要和專(zhuān)利技術(shù)名稱(chēng)的目的模糊，而這種簡(jiǎn)化或省略不能用于限制本專(zhuān)利技術(shù)的范圍。
[0007]鑒于上述和/或現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，提出了本專(zhuān)利技術(shù)。
[0008]因此，本專(zhuān)利技術(shù)的目的是，克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種提取細(xì)菌基因組DNA的方法。
[0009]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本專(zhuān)利技術(shù)提供了如下技術(shù)方案：一種提取細(xì)菌基因組DNA的方法，包括，
[0010]取樣本液，與A組分混合，其中，A組分包括Tris、EDTA和水；
[0011]加入B組分，其中，B組分由不同粒徑的玻璃珠混合組成；
[0012]置于漩渦混勻儀震蕩混勻后，在水浴鍋高溫將蛋白質(zhì)變性，得到核酸提取液；
[0013]將核酸提取液冷卻至室溫后，獲得的細(xì)菌基因組DNA。
[0014]作為本專(zhuān)利技術(shù)所述方法的一種優(yōu)選方案，其中：A組分中，Tris的濃度為5～20mM，Tris的pH值為8.0～9.0，EDTA的濃度為1～5mM。
[0015]作為本專(zhuān)利技術(shù)所述方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述B組分中，玻璃珠粒徑為300～600μm。
[0016]作為本專(zhuān)利技術(shù)所述方法的一種優(yōu)選方案，其中：所述震蕩混勻時(shí)間為8～15min。
[0017]作為本專(zhuān)利技術(shù)所述方法的一種優(yōu)選方案，其中：蛋白質(zhì)變性溫度為93～97℃。
[0018]作為本專(zhuān)利技術(shù)所述方法的一種優(yōu)選方案，其中：A組分為70～90μL，樣本液為10～20μL；
[0019]B組分使用0.08
?
0.12g；
[0020]漩渦混勻儀轉(zhuǎn)數(shù)范圍為2000～3000rpm。
[0021]水浴時(shí)間為5～10min。
[0022]本專(zhuān)利技術(shù)的再一個(gè)目的是，克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種快速提取細(xì)菌基因組DNA的試劑盒。
[0023]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本專(zhuān)利技術(shù)提供了如下技術(shù)方案：一種快速提取細(xì)菌基因組DNA的試劑盒，包括A組分和B組分，其中，
[0024]A組分為含有1～5mM的EDTA和5～20mM的Tris水溶液，且pH值為8.0～9.0；
[0025]所述B組分為粒徑300～600μm的玻璃珠混合物；
[0026]細(xì)菌基因組DNA用于LAMP擴(kuò)增。
[0027]作為本專(zhuān)利技術(shù)所述試劑盒的一種優(yōu)選方案，其中：所述試劑盒B組分使用0.08～0.12g；所述試劑盒在使用時(shí)先將細(xì)菌富集至10
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20μL。
[0028]作為本專(zhuān)利技術(shù)所述試劑盒的一種優(yōu)選方案，其中：所述試劑盒在使用時(shí)轉(zhuǎn)數(shù)范圍為2000～3000rpm的漩渦混勻儀混勻8～15min，然后水浴或金屬浴加熱至93～97℃，加熱時(shí)間5～10min。
[0029]本專(zhuān)利技術(shù)有益效果：
[0030](1)簡(jiǎn)便快速易操作:提取方法操作步驟少，操作簡(jiǎn)單，整個(gè)過(guò)程僅需要15分鐘就可以完成。
[0031](2)提取通量高，樣品需求少:可以一次性提取多個(gè)樣本，樣本可以是培養(yǎng)皿的單菌落菌體或增菌液。
[0032](3)適用菌體范圍廣泛:采用不同粒徑的玻璃珠，可以適用不同直徑大的細(xì)菌，提取效果可靠、高效；成本低、安全可靠:不需要特殊儀器、昂貴試劑，無(wú)有毒有害物質(zhì)，安全性高。
附圖說(shuō)明
[0033]為了更清楚地說(shuō)明本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本專(zhuān)利技術(shù)的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖。其中：
[0034]圖1為本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例1中用試劑盒得到的測(cè)試結(jié)果圖，(a)是試劑盒I得到的測(cè)試結(jié)果，(b)是試劑盒Ⅱ得到的測(cè)試結(jié)果，(c)是試劑盒Ⅲ得到的測(cè)試結(jié)果。
[0035]圖2為本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例2中試劑盒Ⅳ得到的測(cè)試結(jié)果圖。
[0036]圖3為本專(zhuān)利技術(shù)實(shí)施例4中用試劑盒得到的測(cè)試結(jié)果圖，(d)是試劑盒
Ⅵ
得到的測(cè)試結(jié)果，(e)是試劑盒
Ⅶ
得到的測(cè)試結(jié)果。
具體實(shí)施方式
[0037]為使本專(zhuān)利技術(shù)的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合說(shuō)明書(shū)實(shí)施例對(duì)本專(zhuān)利技術(shù)的具體實(shí)施方式做詳細(xì)的說(shuō)明。
[0038]在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本專(zhuān)利技術(shù)，但是本專(zhuān)利技術(shù)還可以采用其他不同于在此描述的其它方式來(lái)實(shí)施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本專(zhuān)利技術(shù)內(nèi)涵的情況下做類(lèi)似推廣，因此本專(zhuān)利技術(shù)不受下面公開(kāi)的具體實(shí)施例的限制。
[0039]其次，此處所稱(chēng)的“一個(gè)實(shí)施例”或“實(shí)施例”是指可包含于本專(zhuān)利技術(shù)至少一個(gè)實(shí)現(xiàn)方式中的特定特征、結(jié)構(gòu)或特性。在本說(shuō)明書(shū)中不同地方出現(xiàn)的“在一個(gè)實(shí)施例中”并非均指同一個(gè)實(shí)施例，也不是單獨(dú)的或選擇性的與其他實(shí)施例互相排斥的實(shí)施例。
[0040]下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為自常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買(mǎi)得到的試劑。
[0041]銅綠假單胞桿菌本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
【技術(shù)特征摘要】
1.一種提取細(xì)菌基因組DNA的方法，其特征在于：包括，取樣本液，與A組分混合，其中，A組分包括Tris、EDTA和水；加入B組分，其中，B組分由不同粒徑的玻璃珠混合組成；置于漩渦混勻儀震蕩混勻后，在水浴鍋高溫將蛋白質(zhì)變性，得到核酸提取液；將核酸提取液冷卻至室溫后，獲得的細(xì)菌基因組DNA。2.如權(quán)利要求1所述提取細(xì)菌基因組DNA的方法，其特征在于：A組分中，Tris的濃度為5～20mM，Tris的pH值為8.0～9.0，EDTA的濃度為1～5mM。3.如權(quán)利要求1或2所述提取細(xì)菌基因組DNA的方法，其特征在于：所述B組分中，玻璃珠粒徑為300～600μm。4.如權(quán)利要求3所述提取細(xì)菌基因組DNA的方法，其特征在于：所述震蕩混勻時(shí)間為8～15min。5.如權(quán)利要求1所述提取細(xì)菌基因組DNA的方法，其特征在于：蛋白質(zhì)變性溫度為93～97℃。6.如權(quán)利要求1所述提取細(xì)菌基因組DNA的方法，其特征在于：A組分為70～90μL，樣本液為1...
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：彭湖，羅杰，胡江，陳芳，鄧麗，周澤波，周庭波，任戰(zhàn)濤，張思宇，陳漢柒，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：貴州金玖生物技術(shù)有限公司，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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