GalNAc簇亞磷酰胺和靶向治療性核苷制造技術

本發明專利技術提供了包含一種或多種治療性寡核苷酸例(如siRNA)和一種或多種靶向綴合化合物的寡核苷酸試劑。在一些實施方案中，所述綴合化合物包含一種或多種作為靶向基團的N

【技術實現步驟摘要】
GalNAc簇亞磷酰胺和靶向治療性核苷
[0001]本專利技術申請是基于申請日為2022年3月8日、申請號為202210230071.5、專利技術名稱為“GalNAc簇亞磷酰胺和靶向治療性核苷”的專利申請的分案申請。


[0002]本專利技術涉及使用碳水化合物綴合物遞送治療劑領域。特別地，本專利技術提供了新的碳水化合物綴合物和包含這些綴合物的iRNA試劑，它們有利于這些iRNA試劑的體內遞送，以及適用于體內治療用途的iRNA組合物。此外，本專利技術提供制備這些組合物的方法，以及使用這些組合物將這些iRNA試劑引入細胞的方法，例如用于治療包括代謝性疾病或病患(如肝臟疾病或病患)在內的各種疾病癥狀。

技術介紹

[0003]治療劑的肝細胞靶向遞送是治療代謝、心血管和其他肝臟疾病的特別有吸引力的策略。去唾液酸糖蛋白受體(ASGP
?
R)在肝細胞上大量表達，而在肝外細胞上很少發現，這使其成為肝細胞靶向治療的理想入口。已經闡明ASGPR的碳水化合物結合域，這使得有效結合劑的設計更加簡單(Bioconjugate Chem.2017,28,283
?
295)。已經開發多種用于靶向ASGP
?
R的多價配體，這其中明確定義的多價N
?
乙酰D半乳糖胺(GalNAc)部分顯示出高結合親和力(J Am Chem Soc.2017,139,3528
–
3536)。最近，數個基于針對ASGP
?
R的GalNAc配體的基因傳遞系統顯示出令人鼓舞的臨床結果，并且FDA已批準與GalNAc偶聯的siRNA用于肝病(Molecular Therapy,2020,28,1759
?
1771)。
[0004]反義寡核苷酸(ASO)和siRNA與互補的mRNA結合，并招募因子來降解靶mRNA以調節蛋白質表達，從而產生藥理學反應(Nucleic Acids Research,2018,46,1584
–
1600)。第二代ASO通常是20個核苷酸長的硫代磷酸酯寡核苷酸，其包含一個10個核苷酸的DNA“缺口”并且末端用2'
?
O
?
甲基、2'
?
O
?
甲氧基乙基(MOE)或鎖核酸(LNA)核苷酸修飾(Drug Discovery Today,2018,23,101
?
114)。有幾種針對各種適應癥的第二代ASO已進入臨床，其中許多靶向主要在肝臟的肝細胞中表達的mRNA。最近，已經證明ASOs和siRNAs與三接頭(tri
?
antennary)GalNAc配體的綴合可以提高肝細胞的效力(Molecular Therapy,2019,27,1547
?
1555)。已經評估了寡核苷酸3'
?
和5'
?
末端處的GalNAc綴合，并且它們在細胞和動物中均顯著增強了效力(Bioconjugate Chem.2015,26,1451
–
1455)。
[0005]相關現有技術
[0006]WO2009/002944A1描述了一種與至少一種(優選雙接頭或三接頭)碳水化合物配體綴合的iRNA試劑。所述碳水化合物綴合的iRNA試劑特別針對肝臟的實質細胞。
[0007]WO2015/042447A1描述了一系列支化基團，該支化基團上綴合有治療性核苷劑和GalNAc配體。
[0008]WO2017084987A1描述了GalNAc亞磷酰胺衍生物，其可以在固相寡核苷酸合成中與核苷構件物一起作為構件物直接引入。
[0009]然而，合成合適的多價GalNAc配體并非易事，并且通常需要10多個化學反應步驟。
在這里，我們通過引入長碳鏈創造新的結構來改進GalNAc配體，以實現更有效的合成；并且GalNAc偶聯物具有更長的耐久性。
附圖說明
[0010]圖1A：GalNAc和寡核苷酸之間存沒有間隔物(spacer)的GalNAc簇B001與GalNAc和寡核苷酸之間存在間隔物(spacer)陽性對照GalNAc簇B005，處理小鼠后的血漿ApoB水平。
[0011]圖1B：GalNAc和寡核苷酸之間存存在間隔物(spacer)的本公開的GalNAc簇B003與陽性對照GalNAc簇B005，處理小鼠后的血漿ApoB水平。
[0012]圖1C：本公開的GalNAc簇B003的結構。
[0013]圖2A：本公開的GalNAc
?
ApoB反義綴合物B006(組3/4)和陽性對照GalNAc簇B005(組1/2)在兩種劑量水平下的ApoB水平比較。
[0014]圖2B：本公開的GalNAc
?
ApoB反義綴合物B007(組5/6)與兩種劑量水平的陽性對照GalNAc簇B005(組1/2)之間的ApoB水平比較。
[0015]圖2C：本公開的GalNAc
?
ApoB反義綴合物B008(組7/8)和陽性對照GalNAc簇B005(組1/2)在兩種劑量水平下的ApoB水平比較。
[0016]圖2D：本公開的GalNAc
?
ApoB反義綴合物B009(組9/10)和陽性對照GalNAc簇B005(組1/2)在兩種劑量水平下的ApoB水平比較。
[0017]圖2E：本公開的GalNAc
?
ApoB反義綴合物B011(組11/12)和陽性對照GalNAc簇B005(組1/2)在兩種劑量水平下的ApoB水平比較。
[0018]圖2F：本公開的GalNAc
?
ApoB反義綴合物B013(組13/14)和陽性對照GalNAc簇B005(組1/2)在兩種劑量水平下的ApoB水平比較。
[0019]圖2G：本公開的GalNAc
?
ApoB反義綴合物B015(組15/16)和陽性對照GalNAc簇B005(組1/2)在兩種劑量水平下的ApoB水平比較。
[0020]圖3：DNA/RNA合成儀上通用接頭固相支持物寡核苷酸合成的標準合成循環。

技術實現思路

[0021]本專利技術涉及一系列綴合物、綴合的反義寡核苷酸試劑(其可用作治療劑)、制備綴合物和綴合的反義寡核苷酸試劑的方法，以及包括使細胞與綴合的反義試劑接觸以減少細胞中核酸轉錄物數量或活性的方法。
[0022]在某些實施方案中，本公開涉及具有式(I)結構的綴合物：
[0023][0024]其中，
[0025]T是細胞靶向配體；
[0026]L1和L2各自獨立地是栓系基團；
[0027]C是連接基團；
[0028]B是支化基團(branching group)；
[0029]D是連接基團；
[0030]E是酯基；
[0031]A是siRNA的反義序列或本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.綴合物，其包含下式(I)表示的結構：其中，T是細胞靶向配體；L1和L2各自獨立地是一個栓系基團；C是連接基團；B是支化基團；D是連接基團；E是酯基；A是siRNA的反義序列或信使鏈；a為0或1；b是1
?
5之間的整數；c為1或2。2.根據權利要求1所述的綴合物，其中：所述T選自葡萄糖、甘露糖、半乳糖、N
?
乙酰基
?
半乳糖胺、巖藻糖、葡糖胺、N
?
乙酰甘露糖胺、乳糖、麥芽糖、葉酸；所述L1和L2是C1?
C
20
亞烷基、酰胺、(C1?
C
20
)亞烷基
?
酰胺
?
(C1?
C
20
)亞烷基；所述C是C1?
C
20
亞烷基、酰胺、羰基、酰胺
?
(C1?
C
20
)亞烷基、羰基
?
雜環
?
磷酸酯
?
(C1?
C
10
)亞烷基；所述B為雙接頭(di
?
antennary)支化基團、三接頭(tri
?
antennary)支化基團、四接頭(tetra
?
antennary)支化基團、五接頭(penta
?
antennary)支化基團或六接頭(hexa
?
antennary)支化基團；所述D是C1?
C
20
亞烷基、酰胺、羰基、(C1?
C
20
)亞烷基
?
酰胺
?
(C1?
C
20
)亞烷基；所述E是磷酸酯基，或硫代磷酸酯基或二硫代磷酸酯基或硼酸酯基。3.根據權利要求1所述的綴合物，其中：T選自葡萄糖、甘露糖、半乳糖、N
?
乙酰基
?
半乳糖胺、巖藻糖、葡糖胺、N
?
乙酰甘露糖胺、乳糖、麥芽糖、葉酸；L1和L2各自獨立地是
?
(CH2)
n
?
、
?
(CH2)
m
?
CONH
?
(CH2)
m
?
，或
?
(CH2)
m
?
NHCO
?
(CH2)
m
?
；其中：m是1
?
9之間的整數；n是5
?
20之間的整數；C選自
其中d是0
?
5的整數；B選自：其中x是1
?
5之間的整數；j是0
?
5之間的整數；D選自
?
(CH2)
k
?
、
?
(C＝O)
?
、
?
CONH
?
、
?
NHCO
?
；其中k是0
?
5之間的整數；E是4.根據權利要求3所述的綴合物，其中：T選自葡萄糖、甘露糖、半乳糖、N
?
乙酰基
?
半乳糖胺、巖藻糖、葡糖胺、乳糖、麥芽糖、葉酸；L1和L2各自獨立地是
?
(CH2)
n
?
、
?
(CH2)
m
?
CONH
?
(CH2)
m
?
，或
?
(CH2)
m
?
NHCO
?
(CH2)
m
?
；其中：m是1
?
9之間的整數；n是5
?
20之間的整數；C選自其中d是0
?
5的整數；B選自：
其中x是1
?
5之間的整數；D選自
?
(CH2)
k
?
、
?
(C＝O)
?
、
?
CONH
?
、
?
NHCO
?
；其中k是0
?
...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張敬新，埃坎巴雷斯瓦拉，
申請(專利權)人：南京吉邁生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：