本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種用于EBER檢測(cè)的探針組及試劑盒，所述探針組包括選自核苷酸序列如SEQ ID NO:1
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種用于EBER檢測(cè)的探針組及試劑盒
[0001]本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其是涉及一種用于EBER檢測(cè)的探針組及試劑盒。
技術(shù)介紹
[0002]EB病毒編碼的小RNA包含EBER1和EBER2，EBER1的保守性高，幾乎不存在突變，較易根據(jù)EBER1的序列設(shè)計(jì)探針檢測(cè)，而EBER2的保守性較低，易發(fā)生突變，根據(jù)EBER2的序列設(shè)計(jì)探針存在一定的難度，因此目前檢測(cè)該病毒的探針設(shè)計(jì)大多集中在EBER1的檢測(cè)上。同時(shí)，探針長(zhǎng)度較短時(shí)，敏感性更高，但特異性下降，容易發(fā)生非特異性雜交，對(duì)探針的具體序列設(shè)計(jì)要求較高，而探針長(zhǎng)度較長(zhǎng)時(shí)，敏感性下降，特異性上升，不容易發(fā)生非特異雜交，對(duì)探針的設(shè)計(jì)要求較低，因此目前檢測(cè)該病毒的探針設(shè)計(jì)長(zhǎng)度較長(zhǎng)，缺點(diǎn)是敏感性較低，對(duì)發(fā)生部分降解的小RNA不能完整結(jié)合，較易被洗脫掉，最終導(dǎo)致顯色較淺或者假陰性的結(jié)果。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
[0003]有鑒于此，本專利技術(shù)旨在提出一種用于EBER檢測(cè)的探針組及試劑盒，針對(duì)EBER1和EBER2同時(shí)設(shè)計(jì)探針，可同時(shí)檢測(cè)兩個(gè)小RNA，探針設(shè)計(jì)的長(zhǎng)度較短，增加探針檢測(cè)的敏感性且同時(shí)保證了特異性。
[0004]為達(dá)到上述目的，本專利技術(shù)的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：
[0005]一種用于EBER檢測(cè)的探針組，包括選自核苷酸序列如SEQ ID NO:1
?
8至少一種所示的EBER1探針及選自核苷酸序列如SEQ ID NO:9
?
15至少一種所示的EBER2探針。
[0006]進(jìn)一步地，所述EBER1探針及EBER2探針的3
’
端用地高辛標(biāo)記。
[0007]進(jìn)一步地，包括選自核苷酸序列如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8所示的EBER1探針及選自核苷酸序列如SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15所示的EBER2探針。
[0008]進(jìn)一步地，選自核苷酸序列如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8所示的EBER1探針及選自核苷酸序列如SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15所示的EBER2探針的摩爾比為8:12:5：15:15:5。
[0009]一種用于EBER檢測(cè)的試劑盒，包括如上任一所述的探針組。
[0010]進(jìn)一步地，還包括TE緩沖液、探針雜交緩沖液、胃酶工作液、PBS緩沖液、抗地高辛抗體、DAB工作液、去離子水。
[0011]使用本專利技術(shù)中試劑盒進(jìn)行檢測(cè)的方法及原理如下：
[0012]根據(jù)各核苷酸序列合成為單鏈DNA探針，3
’
端用地高辛標(biāo)記，將探針干粉與TE緩沖液充分溶解，溶解后的探針與探針雜交緩沖液混合稀釋，得到工作液；
[0013]工作液中的探針序列與組織中的EBER序列堿基互補(bǔ)，在適當(dāng)?shù)臏囟燃皶r(shí)間下，探針穿過(guò)細(xì)胞核孔進(jìn)入細(xì)胞核，與EBER堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，探針3
’
標(biāo)記的地高辛與HRP標(biāo)記抗地高辛抗體結(jié)合，最終HRP經(jīng)DAB工作液催化生成棕褐色沉淀物，可在光學(xué)顯微鏡下被觀察到。
[0014]進(jìn)一步地，探針干粉與TE緩沖液的用量比為2OD：1mL。
[0015]進(jìn)一步地，探針雜交緩沖液的制備方法如下：將去離子甲酰胺55mL、硫酸葡萄糖8g、20XSSC 8mL混合后，去離子水定容至100ml。
[0016]進(jìn)一步地，溶解后的探針與探針雜交緩沖液的體積比為6:100。
[0017]進(jìn)一步地，TE緩沖液的pH為8。
[0018]進(jìn)一步地，抗地高辛抗體為HRP標(biāo)記的。
[0019]進(jìn)一步地，工作液在手工檢測(cè)時(shí)每例用量為10ul；全自動(dòng)免疫組化儀(Ultra30/Ultra60)檢測(cè)時(shí)每例用量為150ul。
[0020]相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本專利技術(shù)所述的用于EBER檢測(cè)的探針組及試劑盒具有以下優(yōu)勢(shì)：
[0021]本專利技術(shù)所述的用于EBER檢測(cè)的探針組及試劑盒使用了分別與EBER1和EBER2特異性結(jié)合的探針，可同時(shí)檢測(cè)兩個(gè)EB病毒編碼的小RNA，探針設(shè)計(jì)的長(zhǎng)度較短，增加探針檢測(cè)的敏感性且同時(shí)保證了特異性。
附圖說(shuō)明
[0022]構(gòu)成本專利技術(shù)的一部分的附圖用來(lái)提供對(duì)本專利技術(shù)的進(jìn)一步理解，本專利技術(shù)的示意性實(shí)施例及其說(shuō)明用于解釋本專利技術(shù)，并不構(gòu)成對(duì)本專利技術(shù)的不當(dāng)限定。在附圖中：
[0023]圖1為本專利技術(shù)實(shí)施例6所述的探針組合以手工方法檢測(cè)淋巴瘤EBER陽(yáng)性樣本100倍放大示意圖；
[0024]圖2為本專利技術(shù)實(shí)施例6所述的探針組合以手工方法檢測(cè)淋巴瘤EBER陽(yáng)性樣本200倍放大示意圖；
[0025]圖3為本專利技術(shù)實(shí)施例6所述的探針組合以手工方法檢測(cè)鼻咽癌樣本100倍放大示意圖；
[0026]圖4為本專利技術(shù)實(shí)施例6所述的探針組合以手工方法檢測(cè)鼻咽癌樣本200倍放大示意圖；
[0027]圖5為本專利技術(shù)實(shí)施例6所述的探針組合以手工方法檢測(cè)胃癌EBER陽(yáng)性樣本100倍放大示意圖；
[0028]圖6為本專利技術(shù)實(shí)施例6所述的探針組合以手工方法檢測(cè)胃癌EBER陽(yáng)性樣本200倍放大示意圖；
[0029]圖7為本專利技術(shù)實(shí)施例6所述的探針組合以全自動(dòng)免疫組化儀檢測(cè)淋巴瘤EBER陽(yáng)性樣本100倍放大示意圖；
[0030]圖8為本專利技術(shù)實(shí)施例6所述的探針組合以全自動(dòng)免疫組化儀檢測(cè)淋巴瘤EBER陽(yáng)性樣本200倍放大示意圖；
[0031]圖9為本專利技術(shù)實(shí)施例6所述的探針組合以全自動(dòng)免疫組化儀檢測(cè)胃癌EBER陽(yáng)性樣本200倍放大示意圖。
具體實(shí)施方式
[0032]除有定義外，以下實(shí)施例中所用的技術(shù)術(shù)語(yǔ)具有與本專利技術(shù)所屬領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的相同含義。以下實(shí)施例中所用的試驗(yàn)試劑，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)生化試劑；所述實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0033]下面結(jié)合實(shí)施例來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本專利技術(shù)。
[0034]本實(shí)施例中使用的各探針設(shè)計(jì)信息信息如表1所示
[0035]表1探針設(shè)計(jì)信息
[0036][0037][0038]探針有效性驗(yàn)證實(shí)施例
[0039]本實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法包括以下步驟：
[0040]1、使用1ml PH8.0的TE緩沖液溶解每管2OD探針，作為探針儲(chǔ)存液；探將針儲(chǔ)存液與探針雜交緩沖液以1:100比例稀釋，作為工作液。
[0041]2、實(shí)驗(yàn)方法
[0042]2.1脫蠟
[0043]切片樣本經(jīng)新鮮二甲苯脫蠟(10分鐘
×
3)。脫蠟后的切片在新鮮100％乙醇中放置3分鐘,3缸。經(jīng)空氣干燥5
?
10分鐘即可進(jìn)行酶處理。
[0044]2.2酶處理
[0045]干燥后的切片根據(jù)組織大小，滴加80
?
100ul胃酶工作液，37℃孵育30分鐘。棄去胃
酶工作液后，逐級(jí)酒精脫水(75％、95％和100％)，每個(gè)梯度放置2分鐘。空氣干燥后雜交。
[004本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于EBER檢測(cè)的探針組，其特征在于：包括選自核苷酸序列如SEQ ID NO:1
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8至少一種所示的EBER1探針及選自核苷酸序列如SEQ ID NO:9
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15至少一種所示的EBER2探針。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于EBER檢測(cè)的探針組，其特征在于：所述EBER1探針及EBER2探針的3
’
端用地高辛標(biāo)記。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于EBER檢測(cè)的探針組，其特征在于：包括選自核苷酸序列如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8所示的EBER1探針及選自核苷酸序列如SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15所示的EBER2探針。4.根據(jù)權(quán)利要求3所...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：馬慧寧，呂佳，李舒然，竇凱佳，劉麗華，樊旭利，陳曦，劉勝南，朱玉潔，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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