本發明專利技術涉及甘蔗種苗的繁殖生產，提供一種去除甘蔗宿根矮化病菌、快速繁殖健康甘蔗種苗的方法，包括如下步驟：熱水處理少量原種并生產、以其再生植株經斑點酶標免疫試驗（ＤＢ－ＥＩＡ）檢測為陰性的莖尖為外植體，經誘導培養、繼代增殖培養、促根培養、假植及二級或三級苗圃擴繁生產健康種苗，并在苗圃擴繁中注意砍種工具（蔗刀）的消毒，在種苗出圃用于大田生產用種前，抽樣取蔗莖汁用ＤＢ－ＥＩＡ檢測ＲＳＤ病菌，確保提供合格種苗。本發明專利技術的優點是：能徹底去除甘蔗種苗宿根矮病病原菌，年繁殖系數高達１萬倍以上，且種苗無變異，具有快速、高效、安全的優點，適合工廠化、規模化、標準化生產甘蔗健康種苗。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及甘蔗種苗的繁殖生產，尤其是關于去除甘蔗宿根矮化病菌的技術
技術介紹
甘蔗(&h/7/瓜是我國主要的糖料作物及具有良好發展前景的生物質能作物。甘蔗宿根矮化病(Ratoon Stunting Disease,簡稱RSD )是一種世界性的 重要甘蔗病害，也是我國蔗區的一種主要甘蔗病害，對甘蔗產量影響較大， 一般新 植蔗產量損失10%-15%,宿根蔗產量損失20%-25%,且影響宿根蔗年限，是甘蔗 品種退化的重要原因之一。甘蔗RSD病原細菌寄居于蔗莖維管東中，尚無有效的化 學防治方法；同時由于缺乏抗源材料，甘蔗RSD抗病育種成效不大，至今未育成抗 性較好的生產品種，其較有效的控制措施是種植健康種苗。 . 培育甘蔗健康種苗的主要目的是去除以甘蔗RSD為主的種苗傳播病害。早期比較 傳統的去除甘蔗RSD病菌的方法是5(TC熱水浸種2-3h或.54-58'C熱空氣處理蔗種 8h,可在一定程度上殺死感病蔗莖中的RSD病原菌，大大減輕RSD的發生程度，但 上述熱處理方法具有不能徹底去除RSD病菌、易傷害蔗芽、水溫難控制、去菌效果 不穩定及種苗繁殖系數低等不足之處，不適合我國蔗區生產實際，難以在生產上大 面積推廣應用。近年也有利用熱處理結合莖尖分生組織(lmm以下)培養去除甘蔗 RSD病菌的報道，但該種方法切取的外植體特別細小，需要在解剖鏡下切取，操作 難度較大，且由于外植體特別細小，導致培養過程中酴污染率極高，誘導成苗率極 低，生產成本較高，難以在生產上推廣應用。因此，生產上迫切需要一種能高效去 除RSD病菌、繁種速度快，同時生產成本低、搡作容易的甘蔗健康種苗生產方法， 來滿足我國甘蔗健康種苗生產的實際需要。
技術實現思路
本專利技術的目的是提出一種去除甘蔗宿根矮化病菌和快速繁殖甘蔗健康種苗的 方法，其具有去菌徹底、能規模化、快速、經濟的地繁殖甘蔗健康種苗的效果。 本專利技術的技術方案如下一種去除甘蔗宿根矮化病菌、快速繁殖健康甘蔗種苗的方法，包括如下步驟1. 原種處理和生產采集甘蔗品種主莖，砍成雙芽段，選取若干有效芽段，經49. 5 — 50. 5'C水浴處理2 ~ 3h,放在35°C ~ 38。C光照培養箱中催芽3d ~ 5d， 催芽后育苗于35'C以下溫室中，待蔗苗長成2~4片葉時，定植于網室苗圃 中，待甘蔗生長至10個芽左右，用經75%酒清浸泡消毒的蔗刀砍取整條蔗莖， 并取汁采用斑點酶標免疫試驗法(Dot blot enzyme immunoassays,簡稱 DB-EIA)檢測RSD病菌；2. 外植體選取與滅菌取步驟1)中經DB-EIA檢測結果呈陰性且生長健壯的 蔗莖的頂芽，經滅菌處理，作組織培養外植體；3. 外植體誘導培養將步驟2)滅菌處理后的頂芽在無菌條件下，切取其3~ 5mm的莖尖組織接種于誘導培養基上，誘導產生叢芽；4. 繼代增殖培養將步驟3)誘導分化的叢芽切成單株接種于增殖培養其上， 進行繼代增殖培養，在27 - 28。C散射光下培養，15 20d繼代一次，繼代數 以不超過10代為宜；5. 促根培養將步驟4 )長至5 ~ 6cm高的小苗轉接于生根培養基上，進行生根 培養；6. 假植當步驟5)生根小苗生長至6~8cm高，根系發育健壯后，將生根瓶 苗移到自然光下煉苗2~3d,取出洗去苗上的培養基，種植于苗圃(塘泥、 泥碳土和河沙混合的基質)上，按常規管理，苗高35 45cm且生長健壯的假 植苗可移栽于大田進行擴繁；7. 苗圃擴繁將步驟6)假植苗定植于大田建立一級健康種苗圃，再通過二級 或三級苗圃擴繁，在從上級苗圃采苗進入下級苗圃擴繁時，采苗工具需用75% 的酒精浸泡消毒5min以上，方可用于采苗，以防交叉感染；8. 種苗RSD檢測將步驟7)擴繁的種苗，在種苗出圃用于大田生產用種前， 抽樣取蔗莖汁用DB-EIA檢測RSD病菌，當蔗莖感染率為0時，種苗合格，可 供大田生產種植。與現有技術對比，本專利技術有如下突出特點和顯著進步 一、以高效徹底去除甘蔗種苗RSD病菌，確保種苗質量本專利技術采用兩次去除RSD病菌的方法(熱水處理及莖尖培養)，確保種苗RSD病菌去除率100%。二、 以快速大量繁殖甘蔗健康種苗，其種苗無變異本專利技術采用組織培養微體快繁及田間多級苗圃擴繁技術，種苗年繁殖系數在 l萬倍以上，本專利技術釆用莖尖培養，未誘導產生愈傷組織，不存在變異問題。而現有技術中熱水處理種苗年繁殖系數約IOO倍；心葉愈傷組織培養雖然 也能高效去除RSD病菌且繁殖系較高，但愈傷組織培養易產生變異，種苗遺傳穩 定性差。三、 本專利技術培植的甘蔗健康種苗，具有明顯的增產、增糖、提高抗單性能效果 由于本專利技術生產的健康種苗，能徹底去除RSD病菌，保持蔗莖維管束暢通，有利于水份和營養物質的運輸，從而具有顯著的增產、增糖效果。 具體實施例方式下面用二個具體實施例來對本專利技術作進一步的說明 實施例一一種高效去除甘蔗宿根矮化病菌、快速繁殖健康甘蔗種苗的方法，包括如下步驟1. 原種處理和生產于8月中甸采取甘蔗品種粵糖00-236主莖10條(株齡8個 月)，砍成雙芽段，選取蔗芽質量較好的有效芽段40段，經50±0. 3'C水洛處理 2h，放在35。C光照培養箱中催芽3d,蔗芽萌動后在玻璃溫室(28~30°C)中， 用細沙育苗，待蔗苗長成3-4片葉、假莖高25cm時，移栽于試驗基地網室中， 待甘蔗生長至12~13個芽，用經75%酒清浸泡5min以上的蔗刀砍取20條生長 正常的蔑莖(保留蔗梢)，并給每條蔗莖編號，砍每條蔗莖基部1~4節中的1 個節，用氣泵取汁200 ~ 300 mL,保存于-2(TC。C冰箱中，3d內用DB—EIA方法 檢測RSD病菌。2. 外植體選取與滅菌取檢測結果為陰性的蔗莖的蔗梢，剝去外葉，切取莖尖1~ 2cm,在超凈工作臺上，用75% (V/V)的酒精擦拭，然后用0.1%的升汞溶液浸泡 消毒12 15min,再用無菌水沖洗4遍，將莖尖組織浸泡在500mg/L PVP溶液中， 切取3 ~ 5mm的莖尖組織作外植體。3. 外植體誘導培養將步驟2 )的外植體在無菌條件下接種于液體莖尖誘導培養基(1/2MS + 0. 2mg/L 6-BA + 30§/1^蔗糖+ lg/L活性炭(AC )， PH=6. 2 ),在27 ~ 28'C光照靜置培養7 ~ 15d誘導出叢芽。4. 繼代增殖培養:將步驟3)誘導出的叢芽切成單株轉接于繼代增殖培養基(MS + 0. 5mg/L 6-BA + NAAO. 2mg/L +蔗糖30g/L,pH=6. 2)中，在28。C散射光下培養， 15 20d繼代一次，總繼代次數8次。5. 促根培養將步驟4)長至5~6cm高的繼代小苗轉接于生根培養基(MS+IBA2 mg/L+蔗糖50g/L)上進行生根培養，經充分光照培養30d左右。6. 假植當生根小苗長至6 8cm高，根系發育健壯后，將生根瓶苗移到自然光下 煉苗2 3d，取出洗去苗上的培養基，種植于由塘泥、泥碳土和河沙混合的基質 苗圃上，種植后7d內每天淋水1~2次，約7d小苗返青后薄施水肥，45d后苗 高35 45cm，生長健壯，即可移栽于大田進行擴繁。7. 苗圃擴繁將步驟6)假植苗定植于一級苗圃中，定植規格為行距1.0m,株距 25~30cm, 2200 ~ 本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種去除甘蔗宿根矮化病菌、快速繁殖健康甘蔗種苗的方法，其特征在于包括如下步驟： ①．原種處理和生產：采集甘蔗品種主莖，砍成雙芽段，選取若干有效芽段，經４９．５～５０．５℃水浴處理２～３ｈ，然后在３５℃～３８℃光照培養箱中催芽３ｄ～５ｄ，催芽后育苗于３５℃以下的溫室中，待蔗苗長成２～４片葉時，定植于網室苗圃中，待甘蔗生長至１０個芽左右，用經７５％酒清浸泡消毒的蔗刀砍取整條蔗莖，并取汁用斑點酶標免疫試驗法（ＤＢ－ＥＩＡ）檢測ＲＳＤ病菌； ②．外植體選取與滅菌：取步驟①中經ＤＢ－ＥＩＡ檢測結果呈陰性且生長健壯的蔗莖頂芽進行滅菌處理，作組織培養外植體； ③．外植體誘導培養：將步驟②滅菌處理后的蔗莖頂芽在無菌條件下，切取其３～５ｍｍ的莖尖組織接種于誘導培養基上，誘導產生叢芽； ④．繼代增殖培養：將步驟③誘導分化的叢芽切成單株接種于增殖培養基上，進行繼代增殖培養，在２７～２８℃散射光下培養，１５～２０ｄ繼代一次，繼代數以不超過１０代為宜； ⑤．促根培養：將步驟④長至５～６ｃｍ高的小苗轉接于生根培養基上，進行生根培養； ⑥．假植：當步驟⑤生根小苗生長至６～８ｃｍ高，根系發育健壯后，將生根瓶苗移到自然光下煉苗２～３ｄ，取出洗去苗上的培養基，種植于苗圃上，按常規管理，苗高３５～４５ｃｍ且生長健壯的假植苗可移栽于大田進行擴繁； ⑦．苗圃擴繁：將步驟⑥中的假植苗定植于大田建立一級健康種苗圃，再通過二級或三級苗圃擴繁，在從上級苗圃采苗進入下級苗圃擴繁時，采苗工具需用７５％的酒精浸泡消毒５ｍｉｎ以上，方可用于采苗，以防交叉感染； ⑧．種苗ＲＳＤ檢測：將步驟⑦擴繁的種苗，在種苗出圃用于大田生產用種前，抽樣取蔗莖汁用ＤＢ－ＥＩＡ檢測ＲＳＤ病菌，當蔗莖感染率為０時，種苗合格，可供大田生產種植。...
【技術特征摘要】
1．一種去除甘蔗宿根矮化病菌、快速繁殖健康甘蔗種苗的方法，其特征在于包括如下步驟①.原種處理和生產采集甘蔗品種主莖，砍成雙芽段，選取若干有效芽段，經49.5～50.5℃水浴處理2～3h，然后在35℃～38℃光照培養箱中催芽3d～5d，催芽后育苗于35℃以下的溫室中，待蔗苗長成2～4片葉時，定植于網室苗圃中，待甘蔗生長至10個芽左右，用經75％酒清浸泡消毒的蔗刀砍取整條蔗莖，并取汁用斑點酶標免疫試驗法(DB-EIA)檢測RSD病菌；②. 外植體選取與滅菌取步驟①中經DB-EIA檢測結果呈陰性且生長健壯的蔗莖頂芽進行滅菌處理，作組織培養外植體；③. 外植體誘導培養將步驟②滅菌處理后的蔗莖頂芽在無菌條件下，切取其3～5mm的莖尖組織接種于誘導培養基上，誘導產生叢芽；④. 繼代增殖培養將步驟③誘導分化的叢芽切成單株接種于增殖...
【專利技術屬性】
技術研發人員：沈萬寬，陳仲華，鄧海華，劉睿，何慧怡，楊湛端，
申請(專利權)人：廣州甘蔗糖業研究所，
類型：發明
國別省市：81[中國|廣州]
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