本發明專利技術涉及醫藥領域，具體涉及用于提高I型糖尿病小鼠腸道菌群中丁酸梭菌屬(Clostridium butyricum)細菌水平、同一性或比例的制劑的制備及其在改善I型糖尿病小鼠空腹血糖、脂代謝紊亂或腸道菌群紊亂方面的應用。本發明專利技術提供了向I型糖尿病小鼠施用用于提高腸道菌群中丁酸梭菌屬(Clostridium butyricum)細菌水平、同一性或比例的制劑的制備方法，及該制劑在提高I型糖尿病小鼠腸道內有益微生物的水平、同一性或比例，進一步改善所述糖尿病小鼠空腹血糖升高、脂代謝紊亂和腸道菌群紊亂方面的應用。脂代謝紊亂和腸道菌群紊亂方面的應用。
【技術實現步驟摘要】
來自人腸道的丁酸梭菌在預防或治療I型糖尿病方面的應用
[0001]本專利技術涉及醫藥領域，具體涉及用于提高I型糖尿病小鼠腸道菌群中丁酸梭菌屬(Clostridium butyricum)細菌水平、同一性或比例的制劑的制備及其在改善I型糖尿病小鼠空腹血糖、脂代謝紊亂或腸道菌群紊亂方面的應用。
技術介紹
[0002]近年來，益生菌在功能性乳制品、保健食品、微生態制劑及醫療等領域得到廣泛應用，具體是指一類對宿主有功能性健康益處的活性微生物，具有調節人體免疫功能、改善腸道微生態平衡、降低血脂和促進營養物質消化與吸收等優點。常見的益生菌有乳酸菌、雙歧桿菌、酪酸梭菌及酵母菌等。
[0003]腸道菌群益生菌(又叫微生態制劑，或微生物制劑，或微生物飼料添加劑)是最先被提出的抗生素替代品，它的作用主要在于扶植正常腸道微生物菌群，調節生態平衡([1]李長強,邱純森.益生素在畜禽飼料中的應用[J].江西飼料,2010(02):21
?
25.)。自上世紀八十年代以來，微生態制劑作為生物獸藥和飼料添加劑已用于仔豬、犢牛、羔羊、家禽等動物的部分疾病的治療和預防上。
[0004]丁酸梭菌(Clostridium butyricum)作為機體腸道中最重要的生理性細菌，與人體的生長、新陳代謝密切相關，在人體健康和疾病等方面起著重要的作用。它屬于嚴格的革蘭氏陽性芽孢桿菌。菌體呈直桿狀或稍有彎曲，單個或成對存在，兩端鈍圓，芽孢偏心或次端生，呈圓形或橢圓形，發酵產酸，主要是丁酸、乙酸。現有研究表明，丁酸梭菌是具有特殊功能的益生菌，其微生態制劑具有促進其他益生菌繁殖等功效，且無毒、無殘留。
[0005]文獻未報到丁酸梭菌對I型糖尿病小鼠腸道菌群結構的影響和空腹血糖的治療作用，對腸道菌群結構的影響在于菌群的種類和數量變化。
技術實現思路
[0006]為了克服現有技術存在的問題，專利技術人經過大量實驗曬選，得到一種源于健康人腸道的丁酸梭菌(Clostridium butyricum)GYJK
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2021D1，經動物實驗證實，具有降低I型糖尿病小鼠空腹血糖水平和改善小鼠腸道菌群結構的作用，可用于I型糖尿病的預防或治療產品的制備。
[0007]優選的，所述丁酸梭菌選自丁酸梭菌Clostridium butyricum strain VPI3266或者丁酸梭菌Clostridium butyricum strain JCM 1391與Clostridium butyricum strain JCM 1391、Clostridium butyricum strain ATCC 19398、Clostridium diolis strain SH1、Clostridium beijerinckii strain JCM 1390中的至少一種的組合。
[0008]更優選的，所述丁酸梭菌(Clostridium butyricum)為CGMCC No.24206。
[0009]更優選的，如上所述產品中丁酸梭菌含量大于1.5
×
109CFU/g。
[0010]所述的產品可以是食品，保健品或藥品。
[0011]本專利技術所述的丁酸梭菌，其16SrRNA序列如SEQ ID NO.1所示：cacacatgcaagtcga
gcgatgaagctccttcgggagtggattagcggcggacgggtgagtaacacgtgggtaacctgcctcatagaggggaatagcctttcgaaaggaagattaataccgcataagattgtagtaccgcatggtacagcaattaaaggagtaatccgctatgagatggacccgcgtcgcattagctagttggtgaggtaacggctcaccaaggcgacgatgcgtagccgacctgagagggtgatcggccacattgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtggggaatattgcacaatgggggaaaccctgatgcagcaacgccgcgtgagtgatgacggtcttcggattgtaaagctctgtctttagggacgataatgacggtacctaaggaggaagccacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttgtccggatttactgggcgtaaagggagcgtaggtggatatttaagtgggatgtgaaatacccgggcttaacctgggtgctgcattccaaactggatatctagagtgcaggagaggaaaggagaattcctagtgtagcggtgaaatgcgtagagattaggaagaataccagtggcgaaggcgcctttctggactgtaactgacactgaggctcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgaatactagtgtaggggttgtcatgacctctgtgccgccgctaacgcattaagtattccgcctggggagtacggtcgcaagattaaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcagcggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttacctagacttgacatctcctgaattactctgtaatgagaagccacttcggtgcagagacagtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttatgtagtgctagcatttagttgagcactctagcgagactgcccggtacggggagaaggtggatgacgtcggaagtcatcatgcccttatgtctaggc
[0012]如上所述的丁酸梭菌的分離制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
[0013]a.富集培養糞便樣本菌體，獲得大量菌體；
[0014]b.對菌體DNA用特異引物進行PCR擴增，檢測其丁酸梭菌的豐度；
[0015]c.挑選丁酸梭菌豐度較高的菌液進行稀釋涂布平板，挑取單菌落；
[0016]d.對單菌落分別進行厭氧培養和兼性厭氧培養，篩選獲得嚴格厭氧菌；
[0017]e.對獲得的嚴格厭氧菌在不同碳源的RCM培養基中進行培養，選擇在蜜二糖為碳源培養基中能生長，但在松三糖為碳源的培養基中不能生長的菌株；
[0018]f.將步驟e獲得的菌株再次涂布平板，挑取乳白色、形態較小單菌落，即得權利要求1所述丁酸梭菌。
[0019]如上所述丁酸梭菌的制備方法，其中步驟b所述的特異引物的核苷酸序列為：丁F:5
‘?
CAGCAGCAGATGGTCCAATG
?3’
，和丁R:5
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【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.一種源于健康人腸道的丁酸梭菌在制備預防或治療I型糖尿病產品中的應用。2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述丁酸梭菌選自丁酸梭菌Clostridium butyricum strain VPI3266或者丁酸梭菌Clostridium butyricum strain JCM 1391與Clostridium butyricum strain JCM 1391、Clostridium butyricum strain ATCC 19398、Clostridium diolis strain SH1、Clostridium beijerinckii strain JCM 1390中的至少一種的組合。3.如權利要求1所述的應用，優選的，所述丁酸梭菌Clostridium butyricum為CGMCC No.24206。4.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述產品中丁酸梭菌含量大于1
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109CFU/g。5.如權利要求1所述的應用，所述的產品是食品，保健品或藥品。6.如權利要求3所述的應用，...
【專利技術屬性】
技術研發人員：吳永威，胡海峰，丁子慧，黃浩龍，張夢瑩，
申請(專利權)人：國藥集團健康產業研究院有限公司，
類型：發明
國別省市：
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