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    綠海龜丙肝病毒全基因組序列及其檢測方法技術(shù)

    技術(shù)編號:37495098 閱讀:30 留言:0更新日期:2023-05-07 09:32
    本發(fā)明專利技術(shù)提供了綠海龜丙肝病毒的全基因組序列及其檢測方法,病毒全基因組序列全長為9430bp,GC含量為45%,此病毒基因組含有一個長的ORF,核苷酸位置在517

    【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
    綠海龜丙肝病毒全基因組序列及其檢測方法


    [0001]本專利技術(shù)涉及分子生物工程
    ,具體涉及一種綠海龜丙肝病毒的全基因組序列及其檢測方法。

    技術(shù)介紹

    [0002]綠海龜(Chelonia mydas)是海洋旗艦物種、傘護物種,一直以來被人們視為海洋生態(tài)系統(tǒng)的健康指示器。由于長期過度利用,綠海龜已成為瀕危物種,被列為國家一級重點保護野生動物。而近幾年,海南文昌、瓊海等地的養(yǎng)殖點不斷有綠海龜群體死亡現(xiàn)象發(fā)生,存活個體也會陸續(xù)發(fā)病死亡。病龜主要表現(xiàn)為厭食、精神萎靡、反應遲緩,經(jīng)剖檢發(fā)現(xiàn)病死綠海龜肝部出現(xiàn)了明顯病變。目前尚無綠海龜感染丙肝病毒的病例報道,若該病繼續(xù)傳播蔓延,經(jīng)由人類放生等行為傳播至野生綠海龜種群,將給海洋生態(tài)安全帶來極大威脅。

    技術(shù)實現(xiàn)思路

    [0003]本專利技術(shù)的第一目的在于提供一種綠海龜丙肝病毒的全基因組序列,以解決現(xiàn)目前對于綠海龜致死的丙肝病毒尚不明確的技術(shù)問題,從而達到保護海龜科動物,改善海洋生態(tài)的目的。
    [0004]本專利技術(shù)的第二目的在于提供一種綠海龜丙肝病毒的檢測方法,以解決目前難以檢測該病毒的技術(shù)問題,從而起到對該綠海龜丙肝病毒進行提前預防的作用。
    [0005]本專利技術(shù)提供了綠海龜丙肝病毒的全基因組序列,病毒全基因組序列全長為9430bp,GC含量為45%,此病毒基因組含有一個長的ORF,核苷酸位置在517
    ?
    9048,該ORF編碼的前體多聚蛋白全長2843aa。綠海龜丙肝病毒全基因組序列、ORF序列及編碼蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO:1
    ?
    NO:3所示。
    [0006]另一方面,本專利技術(shù)提供了一種用于擴增所述綠海龜丙肝病毒全基因組序列的10對引物及1組引物探針,分別用于普通RT
    ?
    PCR和熒光定量RT
    ?
    PCR檢測,其序列如下:
    [0007]RT1269
    ?
    1F:5
    ’?
    GATCCGAGCGGCACCGTT
    ?3’
    (SEQ ID NO:4)
    [0008]RT1269
    ?
    312R:5
    ’?
    CAACTCGCCGTCCTCAGACTATT
    ?3’
    (SEQ ID NO:5)
    [0009]RT1269
    ?
    15F:5
    ’?
    CGTTCTAGAATGGGACAAATCGT
    ?3’
    (SEQ ID NO:6)
    [0010]RT1269
    ?
    1240R:5
    ’?
    CATCATCAAAAGCACCCATATACAT
    ?3’
    (SEQ ID NO:7)
    [0011]RT1269
    ?
    1021F:5
    ’?
    TTTTTAGAGCATATACCCCTGTCAAT
    ?3’
    (SEQ ID NO:8)
    [0012]RT1269
    ?
    2223R:5
    ’?
    AGAAGCAAGTTTAAGGGCACATAGT
    ?3’
    (SEQ ID NO:9)
    [0013]RT1269
    ?
    1976F:5
    ’?
    TGATTATAGCCCTCATGTTTATGTCAG
    ?3’
    (SEQ ID NO:10)
    [0014]RT1269
    ?
    3184R:5
    ’?
    GACATGAGCTATGAGCACACGTAAC
    ?3’
    (SEQ ID NO:11)
    [0015]RT1269
    ?
    2986F:5
    ’?
    GCTAATTGGACCCCTACGTCAC
    ?3’
    (SEQ ID NO:12)
    [0016]RT1269
    ?
    4201R:5
    ’?
    TAGGAATAACATCAATTGATAAACCTCT
    ?3’
    (SEQ ID NO:13)
    [0017]RT1269
    ?
    3999F:5
    ’?
    TAAAGACATCACCGAGGTGCCT
    ?3’
    (SEQ ID NO:14)
    [0018]RT1269
    ?
    5207R:5
    ’?
    GCTTGTACACCTGCTAACATTCG
    ?3’
    (SEQ ID NO:15)
    [0019]RT1269
    ?
    4996F:5
    ’?
    GCTGTAGATGCGGTTAAACAGTATG
    ?3’
    (SEQ ID NO:16)
    [0020]RT1269
    ?
    6200R:5
    ’?
    ATACCTGTTAACCATATTGACTCATCC
    ?3’
    (SEQ ID NO:17)
    [0021]RT1269
    ?
    6000F:5
    ’?
    AGGGCTAATAACAATGCGAAAGT
    ?3’
    (SEQ ID NO:18)
    [0022]RT1269
    ?
    7202R:5
    ’?
    ACGCTTCTTGCACTAACATTATCAT
    ?3’
    (SEQ ID NO:19)
    [0023]RT1269
    ?
    6980F:5
    ’?
    AACCCCCACCTAGTGTACTAAATGT
    ?3’
    (SEQ ID NO:20)
    [0024]RT1269
    ?
    8271R:5
    ’?
    ATCCAGTCTCTGGTCTATGTCATCTAC
    ?3’
    (SEQ ID NO:21)
    [0025]RT1269
    ?
    8061F:5
    ’?
    TCTCCTTGATAAGGAGAATAAACCACT
    ?3’
    (SEQ ID NO:22)
    [0026]RT1269
    ?
    9430R:5
    ’?
    TCCTCTTAGAAATTTTACGTCAATGC
    ?3’
    (SEQ ID NO:23)
    [0027]qF1:5
    ’?
    GCTCTTCTGGTTGTACTC
    ?3’
    (SEQ ID NO:24)
    [0028]qR1:5
    ’?
    AGGGACTGGATCAAATTC
    ?3’
    (SEQ ID NO:25)
    [0029]qP1:5
    ’?
    TTACTTACCAACACAGAGCATAGCACT
    ?3’
    (SEQ ID NO:26)<本文檔來自技高網(wǎng)
    ...

    【技術(shù)保護點】

    【技術(shù)特征摘要】
    1.一種綠海龜丙型肝炎病毒的全基因組序列,其特征在于,該病毒全基因組序列如SEQ ID NO:1所示。2.如權(quán)利要求1所述的綠海龜丙肝病毒全基因組序列,其特征在于,該序列包含一個長的ORF,所述序列如SEQ ID NO:2所示。3.如權(quán)利要求2所述的綠海龜丙肝病毒全基因組序列,其特征在于,所述ORF編碼氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。4.一種用于擴增權(quán)利要求1所述綠海龜丙肝病毒全基因組序列的擴增引物,其特征在于,所述擴增引物序列如下:
    5.一種檢測權(quán)利要求1所述綠海龜丙肝病毒的方法,其特征在于,使用權(quán)利要求4所述檢測引物進行PCR檢測。6.如權(quán)利要求5所述檢測方法,其特征在于,包括以下步驟:(1)提取疑似感染病毒的綠海龜病料組織RNA;(2)將步驟(1)終產(chǎn)物RNA進行cDNA第一鏈合成,用所述檢測引物進行普通定性RT
    ?
    PCR擴增;(3)檢測,用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物條帶,用2kb DNAm...

    【專利技術(shù)屬性】
    技術(shù)研發(fā)人員:吳山楠周宏史衛(wèi)峰
    申請(專利權(quán))人:海口海關(guān)技術(shù)中心
    類型:發(fā)明
    國別省市:

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