治療和預(yù)防生物膜的聯(lián)合療法制造技術(shù)

本文提供了用于使用高遷移率族蛋白(HMGB)多肽、其突變體和/或片段以及抗DNABII抗體、其片段或變體治療和預(yù)防生物膜和相關(guān)疾病的治療和診斷用途的組合物和組合。所述多肽和抗體可以以相同或分開的組合物施用。和抗體可以以相同或分開的組合物施用。和抗體可以以相同或分開的組合物施用。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】治療和預(yù)防生物膜的聯(lián)合療法
[0001]相關(guān)申請的交叉引用
[0002]本申請根據(jù)35U.S.C.
§
119(e)要求分別于2020年7月7日和2021年4月15日提交的美國臨時申請63/049,065號和63/175,487號的優(yōu)先權(quán)，其每一個的內(nèi)容通過引用整體并入本申請。
[0003]政府支持聲明
[0004]本專利技術(shù)是在美國國家衛(wèi)生研究院授予的第DC011818號授權(quán)的政府支持下完成的。政府對本專利技術(shù)享有一定的權(quán)利。
[0005]序列表
[0006]本申請包含序列表，該序列表已以ASCII格式以電子方式提交，并通過引用將其全部內(nèi)容并入本文。上述ASCII副本創(chuàng)建于2021年7月2日，名為106887
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7960_ST25.txt，大小為233,163字節(jié)。

技術(shù)介紹

[0007]DNABII蛋白家族天然存在于細(xì)菌細(xì)胞外，有助于生物膜的形成。在所有已知的真細(xì)菌中都發(fā)現(xiàn)至少一種來自DNABII家族的蛋白質(zhì)。雖然這些蛋白質(zhì)引發(fā)強烈的先天性和獲得性免疫反應(yīng)，但宿主無法由于感染而自然產(chǎn)生針對家庭成員的免疫保護(hù)抗體。細(xì)菌生物膜的主要問題是宿主免疫系統(tǒng)和/或抗生素和其他抗菌劑無法接觸生物膜內(nèi)保護(hù)的細(xì)菌。
[0008]人類宿主體內(nèi)的細(xì)菌更喜歡群落結(jié)構(gòu)，也稱為生物膜。當(dāng)自由生活(浮游)細(xì)菌相互粘附(聚集生物膜)或粘附在表面(附著生物膜)并啟動發(fā)育程序時，生物膜形成，該程序包括基因表達(dá)、細(xì)胞間通訊的改變，重要的是自制細(xì)胞外基質(zhì)(胞外聚合物質(zhì)或EPS)的產(chǎn)生。這些群落結(jié)構(gòu)中的每一個內(nèi)的駐留細(xì)菌都對宿主免疫系統(tǒng)和抗微生物劑具有抗藥性(Slinger et al.,Diagn Microbiol Infect Dis,2006.56(3)：第247
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53頁；和Starner et al.,Antimicrob Agents Chemother,2008.52(1)：第137
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45頁)，這使得細(xì)菌能夠持續(xù)存在，并作為保持慢性和反復(fù)感染的儲存池。因此，迫切需要制定有針對性的策略來解決細(xì)菌生物膜。
[0009]生物膜也存在于工業(yè)環(huán)境中。例如，從生產(chǎn)現(xiàn)場到加油站儲罐，生物膜涉及廣泛的石油工藝問題。在現(xiàn)場，硫酸鹽還原生物膜細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫(酸化油)。在工藝管道中，生物膜活性形成泥狀物，阻礙過濾器和孔口。生物膜和生物膜生物還會對管道和石油加工設(shè)備造成腐蝕。這些問題可以在整個石油或天然氣生產(chǎn)設(shè)施中表現(xiàn)出來，甚至在最終產(chǎn)品儲罐表面發(fā)現(xiàn)了污垢和腐蝕性生物膜生物。
[0010]生物膜涉及廣泛的水處理過程，包括家庭的和工業(yè)的。它們會在工藝設(shè)備表面生長，并阻礙設(shè)備的性能，例如熱傳遞退化或過濾器和膜堵塞。生長在冷卻塔填料上的生物膜會增加足夠的重量，導(dǎo)致填料坍塌。生物膜甚至?xí)g高度專業(yè)化的不銹鋼。水處理過程中的生物膜會降低最終產(chǎn)品的價值，如紙?zhí)幚磉^程中生物膜污染或硅片上單個細(xì)胞的附著。在飲用水分配系統(tǒng)中生長的生物膜可能含有潛在的致病生物、腐蝕性生物或細(xì)菌，從而降低水的美學(xué)質(zhì)量。在家中，生物膜存在于任何支持微生物生長的表面之中或之上，例如下水
道中、食品加工表面上、廁所中、以及游泳池和浴池中。
[0011]因此，需要突破生物膜的保護(hù)屏障，以處理或殺死相關(guān)的細(xì)菌感染，并將其從表面和水系統(tǒng)中清除。本公開滿足了這一需要，并且還提供了相關(guān)的優(yōu)點。
[0012]概述
[0013]本文提供HMG
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box多肽(其非限制性實例包括HMGB1多肽)和抗DNABII抗體或其抗原結(jié)合片段(例如特異性識別和結(jié)合DNABII的頭部(tip)或嵌合頭部結(jié)構(gòu)域的抗體)或其各自的等效物的組合。此外，還提供了單獨或彼此組合表達(dá)該組合的元件的多核苷酸、載體和宿主細(xì)胞。還另外提供了組合物、組合和試劑盒，其包含所述組合或表達(dá)所述組合的多核苷酸或載體或宿主細(xì)胞或兩者，以及生產(chǎn)或使用其的方法，或基本上由其組成，或由其組成。不希望受理論的約束，所公開的組合在防止生物膜形成或破壞生物膜方面顯示出協(xié)同效應(yīng)。
[0014]在一個方面，本文提供了一種組合物或組合，其包含以下組分，或基本上由以下組分組成，或由以下組分組成：
[0015](a)高遷移率族蛋白(high mobility group box protein，HMGB)多肽，其任選地為HMGB1多肽，進(jìn)一步任選地包含一個或多個突變(即，突變HMGB1(mHMGB1)多肽)，或其片段，該片段任選地包含HMGB(任選地HMGB1)多肽的B box或A box或兩者(例如AB box)或基本上由其組成或由其組成，任選地其中所述HMGB多肽或HMGB1多肽或其片段被分離或工程化或兩者均有；以及
[0016](b)抗DNABII抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含以下組分，或基本上由以下組分組成，或由以下組分組成：
[0017](i)重鏈(HC)免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域，其包含SEQ ID NO:13、24或26中的任一個的氨基酸(aa)25至aa 144或其每一個的等效物，或基本上由其組成，或由其組成；和/或
[0018](ii)輕鏈(LC)免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域，其包含SEQ ID NO:14或25的aa 21至aa 132、SEQ ID NO:27的aa 21到aa 126或其每一個的等效物，或基本上由其組成，或由其組成。
[0019]在另一方面，本文提供了一種組合物或組合，其包含以下組分，或基本上由以下組分組成，或由以下組分組成：
[0020](a)高遷移率族蛋白(HMGB)多肽，其任選地為HMGB1多肽，進(jìn)一步任選地包含一個或多個突變(例如，突變HMGB1(mHMGB1)多肽)，或其片段，該片段任選地包含HMGB多肽的B box或A box或兩者(例如AB box)或基本上由其組成或由其組成，任選地其中所述HMGB1多肽或其片段被分離或工程化或兩者均有；以及
[0021](b)抗DNABII抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含以下組分，或基本上由以下組分組成，或由以下組分組成：
[0022](i)重鏈(HC)，其包含SEQ ID NO:13、24或26中的任何一個或多個或其每一個的等效物，或基本上由其組成，或由其組成；和/或
[0023](ii)輕鏈(LC)，其包含SEQ ID NO:14、25或27中的任何一個或多個或其每一個的等效物，或基本上由其組成，或由其組成。
[0024]在另一方面，本文提供了一種組合物或組合，其包含以下組分，或基本上由以下組分組成，或由以下組分組成：
[0025](a)高遷移率族蛋白(HMGB)多肽，其任選地為HMGB1多肽，進(jìn)一步任選地包含一個或多個突變(即，突變HMGB1(mHMGB1)多肽(或HMGB2、HMGB3或HMGB4中對應(yīng)的突變)，或其片段，該片段任選地包含HMGB1多肽的B box或A box或兩者(例如AB box)或基本上由其組成或由其組成，任選地其中所述HMGB1多肽或其片段被分離或工程化或兩者均本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】1.一種組合物或組合，其包含：(a)高遷移率族蛋白(HMGB)多肽或其包含其B box或A box或AB box的片段；以及(b)抗DNABII抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含：(i)重鏈互補決定區(qū)1(CDRH1)，其包含GFTFRTY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa50至aa 56)；(ii)重鏈互補決定區(qū)2(CDRH2)，其包含GSDRRH(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa76至aa 81)；(iii)重鏈互補決定區(qū)3(CDRH3)，其包含VGPYDGYYGEFDY(SEQ ID NO:1或2或3或24的aa 121至aa 133)；(iv)輕鏈互補決定區(qū)1(CDRL1)，其包含QSLLDSDGKTF(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 47至aa 57)；(v)輕鏈互補決定區(qū)2(CDRL2)，其包含LVS(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 75至aa 77)；以及(vi)輕鏈互補決定區(qū)3(CDRL3)，其包含WQGTHFPYT(SEQ ID NO:7或8或9或25的aa 114至aa 122)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物或組合，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈(HC)免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域，其包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3中任一項的氨基酸25
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144。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物或組合，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈(LC)免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域，其包含SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9中任一項的氨基酸21
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132。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物或組合，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈(HC)免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域，其包含SEQ ID NO:1中任一項的氨基酸25至144，并且其中所述LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO:7的氨基酸21至132。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物或組合，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈(HC)免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域，其包含SEQ ID NO:1中任一項的氨基酸25至144，并且其中所述LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO:8的氨基酸21至132。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物或組合，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈(HC)免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域，其包含SEQ ID NO:1中任一項的氨基酸25至144，并且其中所述LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域包含SEQ ID NO:9的氨基酸21至132。7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項所述的組合物或組合，其中所述抗體包含恒定區(qū)，所述恒定區(qū)選自IgA恒定區(qū)、IgD恒定區(qū)、IgE恒定區(qū)、IgG恒定區(qū)或IgM恒定區(qū)。8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項所述的組合物或組合，其中所述其抗原結(jié)合片段包含F(xiàn)ab、F(ab
’
)2、Fab
’
、scFv或Fv。9.根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項所述的組合物或組合，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段被修飾。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物或組合，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段通過選自PEG化、聚唾液酸化、HES化或糖基化的方法而被修飾。11.根據(jù)權(quán)利要求1
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10中任一項所述的組合物或組合，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片
段是單克隆抗體或所述單克隆抗體的抗原結(jié)合片段。12.根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項所述的組合物或組合，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含人源化或人框架。13.根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一項所述的組合物或組合，其中所述HMGB多肽包括：HMGB1多肽，其任選地進(jìn)一步包括一個或多個選自K12、C23、C45、C106或K114處的突變的突變；或選自HMGB2、HMGB3或HMGB4多肽的HMGB多肽，其具有與所述HMGB1多肽相對應(yīng)的突變，該HMGB1多肽包括一個或多個選自K12、C23、C45、C106或K114處的突變的突變。14.根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項所述的組合物或組合，其中所述HMGB多肽、任選地HMGB11多肽的A box進(jìn)一步包括一個或多個選自K12、C23或C45處的突變的突變，或當(dāng)所述HMGB多肽選自HMGB2、HMGB3或HMGB4多肽并具有與該突變的HMGB1多肽相對應(yīng)的突變時的相應(yīng)突變。15.根據(jù)權(quán)利要求1至14中任一項所述的組合物或組合，其中所述HMGB、任選地HMGB1多肽的B box進(jìn)一步包括C106或K114處的一個或兩個突變，或當(dāng)所述HMGB多肽選自HMGB2、HMGB3或HMGB4多肽時與該突變的HMGB1多肽相對應(yīng)的突變。16.根據(jù)權(quán)利要求13至15中任一項所述的組合物或組合，其中所述一個或多個突變是突變?yōu)榻z氨酸、甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、異亮氨酸或蘇氨酸。17.根據(jù)權(quán)利要求1至16中任一項所述的組合物或組合，其中所述HMGB多肽、任選地HMGB1多肽進(jìn)一步包括一個或多個選自C23S、C45S和C106S的突變，或者所述HMGB多肽選自HMGB2、HMGB3或HMGB4多肽并具有與該突變的HMGB1多肽相對應(yīng)的一個或一個突變。18.根據(jù)權(quán)利要求1至17中任一項所述的組合物或組合，其中所述HMGB多肽、任選地HMGB1多肽進(jìn)一步包括C45S突變，或者所述HMGB多肽選自HMGB2、HMGB3或HMGB4多肽并且具有與該突變的HMGB1多肽相對應(yīng)的突變。19.根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一項所述的組合物或組合，其包含：(a)所述HMGB多肽，其任選地是HMGB1多肽，進(jìn)一步包含C45S突變；以及(b)所述抗DNABII抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含含有SEQ ID NO:1的氨基酸25至144的重鏈(HC)免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域和含有SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9的氨基酸21至132的輕鏈(LC)免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域。20.一種組合物或組合，其包含：(a)高遷移率族蛋白1(HMGB1)多肽或其包含其B box或A box或AB box的片段；以及(b)特異性識別和結(jié)合DNABII蛋白的頭部結(jié)構(gòu)域的...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：史蒂文，
申請(專利權(quán))人：國家兒童醫(yī)院研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：