本發明專利技術涉及腫瘤治療領域，具體涉及一種人骨髓間充質干細胞源外泌體制備高效裝載藥物的方法，以及該藥物在胰腺癌治療中的應用。采用人骨髓間充質干細胞源外泌體作為裝載吉西他濱的載體，利用電穿孔、超聲處理的方式進行藥物裝載，提高了外泌體裝載效率，所得藥物能夠有效地抑制癌細胞增殖、促進癌細胞凋亡，進而用于治療胰腺癌等多種疾病。而用于治療胰腺癌等多種疾病。而用于治療胰腺癌等多種疾病。
【技術實現步驟摘要】
一種提高腫瘤治療藥物中外泌體裝載效率的方法
[0001]本專利技術涉及腫瘤治療領域，具體涉及一種人骨髓間充質干細胞源外泌體制備高效裝載藥物的方法，以及該藥物在胰腺癌治療中的應用。
技術介紹
[0002]吉西他濱(Gemcitabine，GEM)屬于細胞周期特異性抗代謝類抗腫瘤藥物，主要作用于DNA合成期的腫瘤細胞，能夠斷裂DNA進而使細胞死亡，目前用于非小細胞肺癌、胰腺癌和乳腺癌等惡性腫瘤的治療。鹽酸吉西他濱(Gemcitabine Hydrochloride)將吉西他濱制成鹽酸鹽，改變了藥物的生物活性和物理化學穩定性。
[0003]外泌體(Exosomes，EXOs)是一種幾乎可以被所有類型細胞分泌的細胞外囊泡，其具有脂質雙分子層，大小在30
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100nm之間。作為天然的胞間信息載體，外泌體有諸多優良特性。首先，外泌體易與受體細胞融合并將藥物釋放到細胞內部，因而受體細胞對其所負載藥物的接收明顯強于其他載體。其次，外泌體表面的膜蛋白可以躲避調理素、共刺激分子及補體成分的攻擊，增加了其在血液循環中的穩定性。最后，外泌體體積較小，不僅能避免網狀系統的捕捉，還可以利用增強滲透滯留效應，有選擇性地滲入腫瘤或炎癥部位。基于此，外泌體在藥物載體領域表現出了顯著的優越性和巨大的應用潛力。
[0004]目前，有研究采用植物、胃部細胞、血漿等多種來源的外泌體包載化學藥物，間充質干細胞或稱間充質基質細胞(Mesenchymal Stem/Stromal Cells，MSCs)便是其中一種外泌體來源。現有研究中采用間充質干細胞來源的外泌體同吉西他濱一起施用或是包載鹽酸吉西他濱以治療腫瘤，然而裝載效率較低，導致藥物的細胞攝取率低、半衰期短且生物利用度低，在臨床應用時需頻繁、高劑量給藥，給患者帶來了嚴重的毒副作用。
技術實現思路
[0005]本專利技術的目的在于克服現有技術不足，解決上述
技術介紹
中提到的外泌體裝載吉西他濱時裝載效率低的問題。
[0006]為實現上述目的，本專利技術提供以下技術方案：
[0007]本專利技術的第一方面，提供一種利用超聲技術提高腫瘤治療藥物中外泌體裝載效率的方法，包括：S10培養人骨髓間充質干細胞；S20利用所述人骨髓間充質干細胞提取所述外泌體；S30將所述外泌體溶于緩沖鹽溶液制備外泌體混合溶液，將吉西他濱溶于有機溶劑制備吉西他濱混合溶液，并混合所述外泌體混合溶液、所述吉西他濱混合溶液得到混合物；S40對所述混合物進行超聲處理，得到所述外泌體，所述超聲處理的條件是振幅為10
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30％、超聲時間為20
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40s、冰上置冷時間為70
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110s、循環次數為2
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4次。
[0008]優選地，所述步驟S40中，所述超聲處理的條件是振幅為20％、超聲時間為30s、冰上置冷時間為90s、循環次數為3次。
[0009]優選地，所述步驟S40中，所述超聲處理后還包括將所述外泌體于37℃下孵育2h。
[0010]在一些實施例中，所述步驟S10包括：S11采用完全培養基培養所述人骨髓間充質
干細胞；S12收集所述完全培養基中含3
?
10代所述人骨髓間充質干細胞的上清液。
[0011]優選地，所述步驟S12中，所述人骨髓間充質干細胞每代匯合度不小于90％。
[0012]在一些實施例中，所述步驟S30中，所述緩沖鹽溶液選自磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液、Tris
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鹽酸緩沖液、甘氨酸
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氫氧化鈉緩沖液、硼酸
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硼砂緩沖液；所述有機溶劑選自N,N
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二甲基甲酰胺、二甲基亞砜。
[0013]本專利技術的第二方面，提供一種利用電穿孔技術提高腫瘤治療藥物中外泌體裝載效率的方法，包括：S10培養人骨髓間充質干細胞；S20利用所述人骨髓間充質干細胞提取所述外泌體；S30將所述外泌體溶于緩沖鹽溶液制備外泌體混合溶液，將吉西他濱溶于有機溶劑制備吉西他濱混合溶液，并混合所述外泌體混合溶液、所述吉西他濱混合溶液得到混合物；S40將所述混合物轉移至預冷的比色皿中進行電穿孔處理，得到所述外泌體，所述電穿孔處理的條件是電壓為300
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500V、電容為100
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150μF、脈沖時間為4.5
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5.5ms、脈沖次數為2
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4次。
[0014]優選地，所述步驟S40中，所述電穿孔處理的條件是電壓為400V、電容為125μF、脈沖時間為5ms、脈沖次數為3。
[0015]優選地，所述步驟S40中，所述電穿孔處理后還包括將所述外泌體放置在冰上5
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15分鐘。
[0016]在一些實施例中，所述步驟S10包括：S11采用完全培養基培養所述人骨髓間充質干細胞；S12收集所述完全培養基中含3
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10代所述人骨髓間充質干細胞的上清液。
[0017]優選地，所述步驟S12中，所述人骨髓間充質干細胞每代匯合度不小于90％。
[0018]在一些實施例中，所述步驟S30中，所述緩沖鹽溶液選自磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液、Tris
?
鹽酸緩沖液、甘氨酸
?
氫氧化鈉緩沖液、硼酸
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硼砂緩沖液；所述有機溶劑選自N,N
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二甲基甲酰胺、二甲基亞砜。
[0019]本專利技術的第三方面，提供一種腫瘤治療藥物，所述腫瘤治療藥物包括外泌體和吉西他濱，具體通過一種提高腫瘤治療藥物中外泌體裝載效率的方法制得。
[0020]與現有技術相比，本專利技術的有益效果是：
[0021](1)本專利技術通過研究證實了采用人骨髓間充質干細胞源外泌體作為吉西他濱的載體，并通過電穿孔或超聲處理進行裝載，能夠有效地提高藥物裝載效率。
[0022](2)本專利技術提供的提高腫瘤治療藥物中外泌體裝載效率的方法能夠制得細胞攝取率高、半衰期長且生物利用度高的腫瘤治療藥物，在臨床應用時無需頻繁、高劑量給藥，有效降低了毒副作用。
[0023](3)本專利技術提供的提高腫瘤治療藥物中外泌體裝載效率的方法能夠制得有效抑制癌細胞增殖、促進癌細胞凋亡的藥物，從而為胰腺癌等多種腫瘤的指導治療提供重要參考。
附圖說明
[0024]為了更清楚地說明本申請實施例中的技術方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本申請的一些實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。
[0025]圖1為流式散點圖，其中圖1A是對照組、圖1B是濃度為0.02μM吉西他濱組、圖1C是濃度為0.02μM裝載吉西他濱外泌體組、圖1D是濃度為0.04μM吉西他濱組、圖1E是濃度為
0.04μM裝載吉西他濱外泌體組、圖1F是濃度為0.10μM吉西他濱組、圖1G是濃度為0.10μM裝載吉西他濱外泌體組本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.一種提高腫瘤治療藥物中外泌體裝載效率的方法，其特征在于，所述方法包括：S10培養人骨髓間充質干細胞；S20利用所述人骨髓間充質干細胞提取所述外泌體；S30將所述外泌體溶于緩沖鹽溶液制備外泌體混合溶液，將吉西他濱溶于有機溶劑制備吉西他濱混合溶液，并混合所述外泌體混合溶液、所述吉西他濱混合溶液得到混合物；S40對所述混合物進行超聲處理，得到所述外泌體，所述超聲處理的條件是振幅為10
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30％、超聲時間為20
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40s、冰上置冷時間為70
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110s、循環次數為2
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4次。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S40中，所述超聲處理的條件是振幅為20％、超聲時間為30s、冰上置冷時間為90s、循環次數為3次。3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟S40中，所述超聲處理后還包括將所述外泌體于37℃下孵育1.5
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2.5h。4.一種提高腫瘤治療藥物中外泌體裝載效率的方法，其特征在于，所述方法包括：S10培養人骨髓間充質干細胞；S20利用所述人骨髓間充質干細胞提取所述外泌體；S30將所述外泌體溶于緩沖鹽溶液制備外泌體混合溶液，將吉西他濱溶于有機溶劑制備吉西他濱混合溶液，并混合所述外泌體混合溶液、所述吉西他濱混合溶液得到混合物；S40將所述混合物轉移至預冷的比色皿中進行電穿孔處理，得到所述外泌體，所述電穿孔處理的條件是電壓為300
【專利技術屬性】
技術研發人員：孔藝，陳有海，李韻清，吳佳欣，
申請(專利權)人：中國科學院深圳理工大學籌，
類型：發明
國別省市：
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