重組火雞皰疹病毒活載體疫苗及其應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種重組火雞皰疹病毒活載體疫苗，所述活載體疫苗包含H9亞型禽流感病毒HA基因和傳染性法氏囊病病毒VP2基因，并穩(wěn)定表達(dá)H9亞型禽流感病毒HA蛋白和傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白。本發(fā)明專利技術(shù)還公開了上述重組火雞皰疹病毒活載體疫苗的應(yīng)用。本發(fā)明專利技術(shù)的重組火雞皰疹病毒活載體疫苗，在免疫動物體內(nèi)，可以誘導(dǎo)良好的免疫應(yīng)答，具有血清Ⅲ型MDV疫苗株的弱毒特征，可作為禽流感、傳染性法氏囊病和馬立克氏病三價活載體疫苗，具有很好的應(yīng)用前景。景。景。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
重組火雞皰疹病毒活載體疫苗及其應(yīng)用


[0001]本專利技術(shù)涉及生物工程
，尤其涉及一種穩(wěn)定表達(dá)H9亞型禽流感病毒HA基因與傳染性法氏囊VP2基因的重組火雞皰疹病毒(rHVT)活載體疫苗及其應(yīng)用。

技術(shù)介紹

[0002]禽流感是由禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)引起禽類感染的一種急性接觸性傳染病。禽流感病毒屬于正粘病毒科A型流感病毒屬，根據(jù)OIE的分類標(biāo)準(zhǔn)，依病毒的毒力和致病力強(qiáng)弱不同，可將禽流感病毒分為高致病力禽流感病毒和低致病力禽流感病毒，H9N2病毒屬于低致病性亞型禽流感病毒。
[0003]H9N2流感病毒是目前在全球范圍流行的一種低致病性禽流感病毒，可以感染包括雞、鴨、鵪鶉等禽類。H9N2亞型禽流感病毒與其他病原體共同感染可以引起產(chǎn)蛋量減少、死亡率增高，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前主要通過免疫的方式防止雞感染H9N2，目前使用的H9N2疫苗是滅活疫苗，包括單苗、多價滅活苗等類型。然而，由于滅活疫苗不能有效刺激細(xì)胞免疫與粘膜免疫，導(dǎo)致使用滅活疫苗免疫后并不能完全阻止H9N2感染，導(dǎo)致病毒在免疫壓力下，持續(xù)變異，不利于H9N2病毒的防控。
[0004]傳染性法氏囊病(IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的，損害雞的免疫器官，引起免疫抑制疾病。IBDV在全世界范圍內(nèi)流行，疫苗免疫是防控IBD的主要手段。目前常用的疫苗為重組活疫苗、減毒活疫苗與滅活疫苗。目前變異型IBDV在國內(nèi)與國外廣泛流行，給禽養(yǎng)殖行業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失，急需研制針對變異型IBDV的新型疫苗。
[0005]馬立克氏病(MD)是一種由馬立克氏病病毒(MDV)引起的雞的淋巴增殖性疾病。由于火雞皰疹病毒(HVT)與MDV病毒具有一定的進(jìn)化親緣關(guān)系，而且HVT對雞沒有致病性，HVT一直被廣泛用于預(yù)防MDV強(qiáng)毒(vMDV)感染。但目前仍缺乏安全高效的預(yù)防MDV強(qiáng)毒感染的活疫苗。

技術(shù)實現(xiàn)思路

[0006]本專利技術(shù)要解決目前缺乏能同時預(yù)防H9亞型禽流感病毒、傳染性法氏囊病毒和馬立克氏病毒感染的安全有效疫苗的技術(shù)問題，提供一種重組火雞皰疹病毒(HVT)活載體疫苗，該疫苗不僅穩(wěn)定表達(dá)H9亞型禽流感病毒主要抗原蛋白HA，而且穩(wěn)定表達(dá)傳染性法氏囊病毒VP2抗原蛋白，在免疫動物體內(nèi)，可以誘導(dǎo)良好的體液免疫與細(xì)胞免疫應(yīng)答，適用于作為禽流感、傳染性法氏囊病和馬立克氏病的三價活載體疫苗。
[0007]為了解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)通過如下技術(shù)方案實現(xiàn):
[0008]在本專利技術(shù)的一個方面，提供了一種重組火雞皰疹病毒活載體疫苗，所述活載體疫苗包含H9亞型禽流感病毒HA基因和傳染性法氏囊病病毒VP2基因，并穩(wěn)定表達(dá)H9亞型禽流感病毒HA蛋白和傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白。
[0009]所述重組火雞皰疹病毒的基因組含有表達(dá)低致病性H9亞型禽流感病毒HA蛋白的基因、表達(dá)傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白的基因及CMV真核啟動子。
[0010]在一個具體實施方式中，所述重組火雞皰疹病毒(rHVT)穩(wěn)定表達(dá)H9亞型禽流感病毒HA基因與傳染性法氏囊病病毒VP2基因。
[0011]在一個具體實施方式中，所述重組火雞皰疹病毒(rHVT)利用CMV啟動子與polyA尾同時表達(dá)H9亞型禽流感病毒HA基因與傳染性法氏囊病病毒VP2基因。
[0012]在一個具體實施方式中，所述重組火雞皰疹病毒(rHVT)中，H9亞型禽流感病毒HA基因的插入位置為火雞皰疹病毒的UL區(qū)域；傳染性法氏囊病病毒VP2基因的插入位置為火雞皰疹病毒的US區(qū)域。
[0013]優(yōu)選的，所述H9亞型禽流感病毒HA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述H9亞型禽流感病毒HA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0014]優(yōu)選的，所述傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述傳染性法氏囊病病毒VP2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0015]在本專利技術(shù)的另一方面，還提供了一種上述重組火雞皰疹病毒活載體疫苗在制備預(yù)防和/或治療禽流感、傳染性法氏囊病、和馬立克氏病的疫苗中的應(yīng)用。
[0016]本專利技術(shù)的重組火雞皰疹病毒活載體疫苗，是利用火雞皰疹病毒為活載體，構(gòu)建表達(dá)禽流感病毒與傳染性法氏囊病毒的主要免疫保護(hù)性抗原基因的重組活載體疫苗，在靶動物體內(nèi)，該類重組活載體疫苗，可以誘導(dǎo)良好的體液免疫與細(xì)胞免疫應(yīng)答，可以彌補(bǔ)常規(guī)滅活疫苗不能有效激活細(xì)胞免疫的缺陷。本專利技術(shù)獲得的活載體疫苗(rHVT
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H9
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VP2)具有血清Ⅲ型MDV疫苗株的弱毒特征，可作為禽流感、傳染性法氏囊病和馬立克氏病三價活載體疫苗，具有很好的應(yīng)用前景。
附圖說明
[0017]圖1是本專利技術(shù)實施例2的PCR檢測rHVT
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H9
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VP2中的HA與VP2基因結(jié)果圖；
[0018]圖2是本專利技術(shù)實施例2的rHVT
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H9
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VP2表達(dá)HA蛋白的免疫熒光圖；
[0019]圖3是本專利技術(shù)實施例2的rHVT
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H9
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VP2表達(dá)VP2蛋白的免疫熒光圖；
[0020]圖4是本專利技術(shù)實施例3的rHVT
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H9
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VP2免疫雞產(chǎn)生H9抗體效價結(jié)果圖；
[0021]圖5是本專利技術(shù)實施例3的rHVT
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H9
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VP2免疫雞產(chǎn)生IBDV抗體效價結(jié)果圖。
具體實施方式
[0022]本專利技術(shù)利用火雞皰疹病毒為活載體，構(gòu)建表達(dá)H9亞型禽流感病毒HA基因與傳染性法氏囊病毒VP2基因的重組火雞皰疹病毒活載體疫苗(rHVT
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H9
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VP2)，在靶動物體內(nèi)，該類重組活載體疫苗，可以誘導(dǎo)良好的體液免疫與細(xì)胞免疫應(yīng)答，可以彌補(bǔ)常規(guī)滅活疫苗不能有效激活細(xì)胞免疫的缺陷。本專利技術(shù)的活載體疫苗具有血清Ⅲ型MDV疫苗株的弱毒特征，可作為禽流感、傳染性法氏囊病毒和馬立克氏病三價活載體疫苗。
[0023]所述rHVT
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H9
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VP2能穩(wěn)定地表達(dá)禽流感病毒HA蛋白于其細(xì)胞膜上。
[0024]本專利技術(shù)rHVT
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H9
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VP2表達(dá)的HA與VP2蛋白，包括本領(lǐng)域所公認(rèn)的任何禽流感病毒的HA與VP2蛋白，包括但不限于HA與VP2蛋白，還包括其它禽類病原的主要保護(hù)抗原基因。
[0025]本專利技術(shù)的HA蛋白也包括其類似物或突變蛋白，或其片段。術(shù)語“類似物”和“突變蛋白”指參照分子的生物活性衍生物，或這些衍生物保留所需活性(如免疫反應(yīng)性)的片段。通常，術(shù)語“類似物”指具有天然多肽序列和結(jié)構(gòu)，以及相對于天然分子的一個或多個氨基酸
添加、取代(通常性質(zhì)保守)和/或缺失的化合物，只要修飾不破壞免疫原性的活性。術(shù)語“突變蛋白”指具有一種或多種肽模擬物(“類肽”)的肽。優(yōu)選類似物或突本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】

【技術(shù)特征摘要】
1.一種重組火雞皰疹病毒活載體疫苗，其特征在于，所述活載體疫苗包含H9亞型禽流感病毒HA基因和傳染性法氏囊病病毒VP2基因，并穩(wěn)定表達(dá)H9亞型禽流感病毒HA蛋白和傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白。2.如權(quán)利要求1所述的重組火雞皰疹病毒活載體疫苗，其特征在于，所述H9亞型禽流感病毒HA基因在病毒活載體中的插入位置為火雞皰疹病毒的UL區(qū)域。3.如權(quán)利要求1所述的重組火雞皰疹病毒活載體疫苗，其特征在于，所述傳染性法氏囊病病毒VP2基因在病毒活載體中的插入位置為火雞皰疹病毒的US區(qū)域。4.如權(quán)利要求1所述的重組火雞皰疹病毒活載體疫苗，其特征在于，所述H9亞型禽流感病毒HA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。5.如權(quán)利要求1所述的重組火雞皰疹病毒活載體疫苗，其特征在于，所述H9亞型禽流感病毒HA基因的核...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李澤君，劉芹防，張志飛，
申請(專利權(quán))人：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：