通過5制造技術

本發明專利技術涉及mRNA疫苗、mRNA治療和基因治療領域，并且具體涉及使用含有5

【技術實現步驟摘要】
GenBank:BC007075.1)，和人血紅蛋白alpha1 mRNA(HBA1,NCBI Sequence:NM_000558.5)。而與其他5
’
UTR序列相比，一些5
’
UTR序列的翻譯和轉錄效率顯著降低。這些新穎的5
’
UTR序列將用于改善或調節用于mRNA疫苗、mRNA治療和基因治療的mRNA和基因的翻譯和/或轉錄。
附圖說明
[0007]圖1顯示了通過5
’
UTR序列優化調節FLuc基因的翻譯效率。
[0008]圖2顯示了含有各種5
’
UTR序列的FLuc基因的轉錄效率比較結果。
[0009]圖3顯示了含有各種5
’
UTR序列的人scIL
?
12mRNA的翻譯效率比較結果。
[0010]圖4顯示了含有各種5
’
UTR序列的人scIL
?
12基因的轉錄效率比較結果。
[0011]圖5顯示了用scIL
?
12mRNA轉染的HeLa細胞的培養上清液刺激的人PBMC產生的IFN
?
γ的比較結果。
[0012]圖6顯示了含有各種5
’
UTR序列的人scIL
?
12mRNA的翻譯效率比較結果。
[0013]圖7顯示了含有各種5
’
UTR序列的HPV的翻譯效率比較結果。
[0014]圖8A、8B、8C顯示了含有各種5
’
UTR序列的HPV的翻譯效率比較結果。
[0015]專利技術詳述
[0016]在一個實施方案中，本專利技術公開了分離的核酸，其在5
’
至3
’
方向包含：
[0017]a)至少一個5
’
UTR元件，所述5
’
UTR元件包含含有SEQ ID NOs.1
?
63,72
?
84中任何一個的多核苷酸；和
[0018]b)至少一個編碼感興趣的肽或蛋白質的開放閱讀框(ORF)。
[0019]優選地，所述本專利技術公開的所述分離的核酸還包含3
’
UTR元件(例如包含如SEQ ID NO:87所示序列)和polyA序列。
[0020]一方面，所述5
’
UTR元件包含含有SEQ ID NOs.38,43,46,61或72中任何一個的多核苷酸。
[0021]一方面，所述5
’
UTR元件由SEQ ID NOs.38,43,46,61或72組成。
[0022]一方面，所述感興趣的肽或蛋白質是藥用活性蛋白，優選選自下組：細胞因子(例如白介素(優選IL
?
12或IL
?
2或IL
?
7))；例如促紅細胞生成素；黏附分子，例如整聯蛋白；免疫球蛋白；免疫活性化合物，例如抗原，例如腫瘤相關抗原、病原體相關抗原(例如，一種或更多種(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10種)病毒抗原，例如一種或更多種(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10種)人乳頭瘤病毒(HPV)抗原、猴痘病毒抗原、流感病毒(A、B或C)抗原、CMV抗原或RSV抗原)、變應原或自身抗原；激素，例如加壓素、胰島素或生長激素；生長因子，例如VEGFA；酶，例如單純皰疹病毒1型胸苷激酶(HSV1
?
TK)、氨基己糖苷酶、苯丙氨酸羥化酶、假膽堿酯酶、胰酶或乳糖酶；受體，例如生長因子受體；蛋白酶抑制劑，例如α1
?
抗胰蛋白酶；凋亡調節劑，例如BAX；轉錄因子，例如FOXP3；腫瘤抑制蛋白，例如p53；結構蛋白，例如表面活性型蛋白質；重編程因子，例如OCT4、SOX2、c
?
MYC、KLF4、LIN28或NANOG；基因組改造蛋白，例如成簇規律間隔短回文重復序列
?
CRISPR
?
相關蛋白9(CRISPR
?
Cas9)；以及血蛋白，例如纖維蛋白原。
[0023]優選地，所述白介素為hIL
?
12；更優選地，所述hIL
?
12編碼序列包含SEQ ID NO:69或65所示序列；
[0024]優選地，所述HPV編碼序列包含SEQ ID NO:85所示序列。
[0025]一方面，本專利技術公開的分離的核酸包含SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:86所示序列。
[0026]在使用本專利技術的RNA或RNA組合物的方法的一個實施方案中，該方法可以包括將所述RNA或RNA組合物轉移到細胞中的步驟。在這方面，可以使用適合將RNA轉移到細胞中的任何技術。優選地，通過本文所述的標準技術將RNA轉染到細胞中，例如磷酸鈣沉淀、DEAE轉染、電穿孔、脂轉染或顯微注射。細胞可以是可以用RNA轉染的任何細胞，并且優選是抗原呈遞細胞，例如未成熟的抗原呈遞細胞，更優選選自巨噬細胞、單核細胞、B細胞和樹突狀細胞。生產目的肽或蛋白質的方法可以在體內或體外進行。
[0027]根據本專利技術，術語“細胞因子”指分子量約為1至200kDa并參與細胞信號傳導(例如旁分泌、內分泌和/或自分泌信號傳導)的蛋白質。特別是，當釋放時，細胞因子會對釋放位置周圍的細胞行為產生影響。細胞因子的例子包括淋巴因子、白細胞介素、趨化因子、干擾素和腫瘤壞死因子(TNF)。根據本申請，細胞因子不包括激素或生長因子。細胞因子與激素的不同之處在于：(i)它們通常以比激素更可變的濃度作用；以及(ii)通常由廣泛范圍的細胞產生(幾乎所有有核細胞都可以產生細胞因子)。干擾素通常以抗病毒、抗增殖和免疫調節活性為特征。干擾素是通過與被調節細胞表面上的干擾素受體結合來改變和調節細胞內基因的轉錄從而阻止病毒在細胞內復制的蛋白質。干擾素可分為三種類型。I型IFN包括IFN
?
alpha,IFN
?
beta,and IFN
?
omega。II型IFN包括IFN
?
gamma。III型IFN包括IFN
?
lambda 1,2,3,和4。細胞因子的具體實例包括促紅細胞生成素(EPO)、集落刺激因子(CSF)、粒細胞集落刺激因子(G
?
CSF)、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM
?
CSF)、腫瘤壞死因子(TNF)、骨形態發生蛋白(BMP)、α干擾素(IFNα)、β干擾素(IFNβ)、γ干擾素(INFγ)、白介素2(IL
?
2)、白介素4(IL
?
4)、白介素10(IL
?
10)、白介素11(IL
?
11)、白介素12(IL
?
12)、白介素7(IL
?
7)、白介素15(IL
?
15)、白介素21(IL
本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.分離的核酸，其在5
’
至3
’
方向包含：a)至少一個5
’
UTR元件，所述5
’
UTR元件包含含有SEQ ID NOs.1
?
63,72
?
84(優選SEQID NOs.38,43,46,61或72)中任何一個的多核苷酸；和b)至少一個編碼感興趣的肽或蛋白質的開放閱讀框(ORF)，優選地，所述感興趣的肽或蛋白質是藥用活性蛋白，優選選自下組：細胞因子(例如白介素(優選IL
?
12或IL
?
2或IL
?
7))；例如促紅細胞生成素；黏附分子，例如整聯蛋白；免疫球蛋白；免疫活性化合物，例如抗原，例如腫瘤相關抗原、病原體相關抗原(例如，一種或更多種(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10種)病毒抗原，例如一種或更多種(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10種)人乳頭瘤病毒(HPV)抗原、猴痘病毒抗原、流感病毒(A、B或C)抗原、CMV抗原或RSV抗原)、變應原或自身抗原；激素，例如加壓素、胰島素或生長激素；生長因子，例如VEGFA；酶，例如單純皰疹病毒1型胸苷激酶(HSV1
?
TK)、氨基己糖苷酶、苯丙氨酸羥化酶、假膽堿酯酶、胰酶或乳糖酶；受體，例如生長因子受體；蛋白酶抑制劑，例如α1
?
抗胰蛋白酶；凋亡調節劑，例如BAX；轉錄因子，例如FOXP3；腫瘤抑制蛋白，例如p53；結構蛋白，例如表面活性型蛋白質；重編程因子，例如OCT4、SOX2、c
?
MYC、KLF4、LIN28或NANOG；基因組改造蛋白，例如成簇規律間隔短回文重復序列
?
CRISPR
?
相關蛋白9(CRISPR
?
Cas9)；以及血蛋白，例如纖維蛋白原；優選地，所述白介素為hIL
?
12；更優選地，所述hIL
?
12編碼序列包含SEQ ID NO:69或65所示序列；優選地，所述HPV編碼序列包含SEQ ID NO:85所示序列。2.權利要求1所述的分離的核酸，其中所述分離的核酸還包含3
’
UTR元件(例如包含如SEQID NO:87所示序列)和polyA序列。3.權利要求2所述的分離的核酸，其中所述分離的核酸包含SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:86所示序列。4.mRNA，其在5
’
至3
’
方向包含：a)至少一個5
’
UTR元件，所述5
’
UTR元件包含含有SEQ ID NOs.1
?
63,72
?
84(優選SEQID NOs.38,43,46,61或72)中任何一個的多核苷酸；和b)至少一個編碼感興趣的肽或蛋白質的開放閱讀框(ORF)；優選地，所述mRNA還包含3
’
UTR元件(例如包含如SEQ ID NO:87所示序列)和polyA序列；優選地，所述感興趣的肽或蛋白質是藥用活性蛋白，優選選自下組：細胞因子(例如白介素(優選IL
?
12或IL
?
2或IL
?
7))；例如促紅細胞生成素；黏附分子，例如整聯蛋白；免疫球蛋白；免疫活性化合物，例如抗原，例如腫瘤相關抗原、病原體相關抗原(例如，一種或更多種(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10種)病毒抗原，例如一種或更多種(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10種)人乳頭瘤病毒(HPV)、猴痘病毒、流感病毒(A、B或C)抗原、CMV抗原或RSV抗原)、變應原或自身抗原；激素，例如加壓素、胰島素或生長激素；生長因子，例如VEGFA；酶，例如單純皰疹病毒1型胸苷激酶(HSV1
?
TK)、氨基己糖苷酶、苯丙氨酸羥化酶、假膽堿酯酶、胰酶或乳糖酶；受體，例如生長因子受體；蛋白酶抑制劑，例如α1
?
抗胰蛋白酶；凋亡調節劑，例如BAX；轉錄因子，例如FOXP3；腫瘤抑制蛋白，例如p53；結構蛋白，例如表面活性型蛋白質；重編程因子，例如OCT4、SOX2、c
?
MYC、KLF4、LIN28或NANOG；基因組改造蛋白，例如成簇規律間
隔短回文重復序列
?
CRISPR
?
相關蛋白9(CRISPR
?
Cas9)；以及血蛋白，例如纖維蛋白原；優選地，所述白介素為hIL
?
12；更優選地，所述hIL
?
12編碼序列包含SEQ ID NO:69或65所示序列；優選地，所述HPV編碼序列包含SEQ ID NO:85所示序列。5.權利要求4所述的mRNA，其中所述mRNA包含SEQ ID NO:68或SEQ ID NO:86所示序列。6.權利要求4或5所述的mRNA，其中所述mRNA包含至少一個修飾的或非天然存在的核苷酸，優選地，所述至少一個修飾的或非天然存在的核苷酸包含至少一個骨架修飾、糖修飾或堿基修飾。7.權利要求6所述的mRNA，其中所述至少一個修飾的或非天然存在的核苷酸包含至少一個堿基修飾，其中優選地，所述堿基修飾選自下組：2
?
氨基
?6?
氯嘌呤
?
核苷
?5’?
三磷酸、2
?
氨基腺苷
?5’?
三磷酸、2
?
硫代胞苷
?5’?
三磷酸、2
?
硫代尿苷
?5’?
三磷酸、4
?
硫代尿苷
?5’?
三磷酸、5
?
氨基烯丙基胞苷
?5’?
三磷酸、5
?
氨基烯丙基尿苷
?5’?
三磷酸、5
?
溴胞苷
?5’?
...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李宰宇，王德華，郝肖瑤，高悅，劉杰，何珊，何婷，柴旦，
申請(專利權)人：南京吉邁生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：