【技術實現步驟摘要】
【技術保護點】
ＨＡ標簽單克隆抗體的制備方法，其特征是用碳二亞胺法合成ＨＡ－ｔａｇ完全抗原，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，采用雜交瘤技術進行細胞融合，通過有限稀釋法和間接ＥＬＩＳＡ法克隆和篩選陽性雜交瘤細胞株，得到ＨＡ標簽單克隆抗體，步驟為： （１）免疫抗原 的合成：稱取４．４ｍｇ ＨＡ－ｔａｇ和５ｍｇ ＯＶＡ溶于１ｍＬｐＨ７．０、０．０５ｍｏｌ／Ｌ的ＰＢ中，充分溶解后，將２００μＬ含有２．２ｍｇ碳二亞胺的ＰＢ溶液逐滴加入，邊滴入邊混勻，搖床１００ｒ／ｍｉｎ反應４ｈ，４℃靜置過夜，用０．０１ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ７．０ ＰＢＳ透析７２ｈ，得到ＨＡ－ｔａｇ－ＯＶＡ免疫抗原，存儲于－２０℃備用； （２）包被抗原的合成；合成方法同免疫抗原的合成，載體蛋白為ＢＳＡ，得到ＨＡ－ｔａｇ－ＢＳＡ包被抗原，存儲于－２０℃備用； （３）雜交瘤 細胞株的建立按常規方法免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，２０～３０μｇ／只，末次免疫后免疫小鼠血清效價達到１∶１００００以上，進行細胞融合，并以間接ＥＬＩＳＡ法篩選分泌抗ＨＡ－ｔａｇ的陽性克隆，得到ＨＡ標簽單克隆抗體。
【技術特征摘要】
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