一種帶狀皰疹病毒疫苗的嵌合抗原及其應用制造技術

本發明專利技術屬于醫藥領域，具體涉及帶狀皰疹病毒疫苗。具體的涉及一種帶狀皰疹疫苗的嵌合抗原及其應用。通過將gE蛋白胞外539區段或者胞外134區段不同方式的和Fc片段串聯得到嵌合抗原，能夠很好的誘導小鼠產生免疫反應，達到保護目的。護目的。

【技術實現步驟摘要】
一種帶狀皰疹病毒疫苗的嵌合抗原及其應用


[0001]本專利技術屬于醫藥領域，具體涉及帶狀皰疹病毒疫苗。

技術介紹

[0002]帶狀皰疹是由潛伏在體內的水痘
?
帶狀皰疹病毒(Varicella zoster virus，VZV)再激活而引起的一種急性感染性皮膚疾病。兒童時期初次感染VZV引起水痘，感染后病毒進入皮膚的感覺神經末梢，沿著脊髓后根或三叉神經節神經纖維向中心移動，以一種持久潛伏的形式長期存在與脊神經或顱神經感覺神經節中。當人體免疫力低下或受到非特異性刺激后，病毒再次活動，生長繁殖，導致受侵犯的神經節發炎或壞死，產生神經痛，同時再活動的病毒從一個或數個相鄰的神經節沿著相應的感覺神經纖維傳播到皮膚，造成單側分布的紅斑基礎上的簇集性水泡。亞太地區帶狀皰疹發病率約為1％，發病率隨著年齡增長而升高，40
?
50歲之后帶狀皰疹發病率達5％以上。在帶狀皰疹患者中約9％～34％的帶狀皰疹患者會發生帶狀皰疹后神經痛，疼痛評級可達7級以上，屬于重度疼痛，嚴重影響患者生活質量。帶狀皰疹和帶狀皰疹后神經痛尚無特效藥，因此接種帶狀皰疹疫苗是預防帶狀皰疹的有效手段。目前全球已上市兩款帶狀皰疹疫苗為Zostavax(減毒活疫苗技術)和Shingrix(重組蛋白疫苗技術)。
[0003]雖然從技術水平上來看，重組技術優于減毒活疫苗技術。Zostavax為減毒活疫苗，最早于2006年獲得FDA批準上市，用于預防60歲及以上老年人，2011年適用范圍又被批準擴大至50歲及以上人群。Shingrix為含佐劑重組蛋白疫苗，含水痘帶狀皰疹病毒糖蛋白E及AS01B佐劑系統。Shingrix于2017年獲得FDA批準上市，用于預防50歲及以上老年人。Shingrix接種為2劑次，間隔2
?
6個月，上臂三角肌肌內注射，1600元/劑，全程接種共3200元。亟需一種國產疫苗來代替國外的疫苗，降本增效，達到更好的患者依從性。
[0004]VZV是最小的皰疹病毒，在其編號的糖蛋白中，糖蛋白gE(glycoprotein E)是由ORF68編碼的一種晚期蛋白，屬I型跨膜蛋白，全長623aa，其中544aa為胞外區、17aa為跨膜區、62aa為胞內區，富含N
?
及O
?
糖基化的位點。VZV結構蛋白gE在病毒感染的細胞中可大量表達，且在病毒傳播中發揮重要的作用，同時也是誘導宿主體液免疫和細胞免疫的主要抗原之一。有研究表明通過Western blotting和ELISA檢測手段發現gE蛋白的胞外1
?
135區段是主要的抗原活性區，而其中的56
?
75,86
?
105和116
?
135區段被水痘和皰疹病人的血清所識別，這一結果提示此三個區段是最主要的抗原決定表位(W J Fowler,M Garcia
?
Valcarcel,MS Hill
?
Perkins,G Murphy,D R Harper,D J Jeffries,N R Burns,S E Adams,A J Kingsman,G T Layton.Identification of immunodominant regions and linear B cell epitopes of the gE envelope protein of varicella
?
zoster virus.Virology.1995Dec 20；214(2):531
?
40)。

技術實現思路

[0005]本專利技術通過研究，發現結合gE蛋白胞外134區段和胞外539區段具體很好的效果，
因此設計了不同組合的嵌合體，抗原技術路線采用中國倉鼠卵巢細胞(Chinese hamster ovary，CHO)表達系統，與佐劑配伍之后，得到具有更好免疫原性的疫苗，為自主探索和研發具有更佳免疫原性的亞單位重組疫苗提供保障，有助于擺脫對國際皰疹疫苗的依賴程度。
[0006]本專利技術首先提供用于制備帶狀皰疹病毒疫苗的嵌合抗原，其由gE蛋白胞外539區段和Fc片段串聯構成；
[0007]或者由兩個串聯的gE蛋白胞外539區段和Fc片段串聯構成；
[0008]或者由gE蛋白胞外539區段和胞外134區段以及Fc片段串聯構成；
[0009]或者由gE蛋白胞外134區段和胞外539區段以及Fc片段串聯構成；
[0010]其中，gE蛋白胞外134區段的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，gE蛋白胞外539區段的氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示。優選地，Fc片段是來源于人IgG Fc片段；更具體地，其氨基酸序列SEQ ID NO：16所示。
[0011]優選地，所述用于制備帶狀皰疹病毒疫苗的嵌合抗原，其其氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，SEQ ID NO：9所示，SEQ ID NO：11所示或SEQ ID NO：13所示。
[0012]本專利技術提供所述用于制備帶狀皰疹病毒疫苗的嵌合抗原的編碼核酸。優選地，其核苷酸序列分別如SEQ ID NO：8所示，SEQ ID NO：10所示，SEQ ID NO：12所示或SEQ ID NO：14所示。
[0013]本專利技術提供含有所述的核酸的重組表達載體，重組宿主細胞。
[0014]本專利技術提供所述用于制備帶狀皰疹病毒疫苗的嵌合抗原在制備帶狀皰疹病毒疫苗中的應用。
[0015]本專利技術進一步提供帶狀皰疹病毒疫苗，包括由所述嵌合抗原以及佐劑的組合物免疫動物獲得免疫原性的疫苗。
[0016]更具體地，佐劑是AS01B。佐劑與抗原的用量比為1:1。
[0017]在具體實施方式中，所述動物是小鼠。
[0018]在優選實施方式中，免疫的劑量為：1μg,2μg,5μg每只小鼠，體積為100μl/只。免疫程序為一次免疫后，隔2周后采用相應劑量加強免疫。
[0019]本專利技術構建嵌合抗原可以得到更高質量的蛋白，免疫效果更好，優于GSK疫苗。
附圖說明
[0020]圖1、N134
?
Fc HIC層析。即實施例1表中FA02的構建方式的跑膠圖。
[0021]圖2、N134
?
N134
?
Fc HIC層析。即實施例1表中FA03的構建方式的跑膠圖。
[0022]圖3、N134_Q540_Fc HIC層析。即實施例1表中FA04的構建方式的跑膠圖。
[0023]圖4、Q540
?
N134
?
Fc HIC層析。即實施例1表中FA05的構建方式的跑膠圖。
[0024]圖5、Q540_Q540_Fc HIC層析。即實施例1表中FA06的構建方式的跑膠圖。
[0025]圖6、Q540_Fc HIC層析。即實施例1表中FA07的構建方式的跑膠圖。
具體實施方本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.用于制備帶狀皰疹病毒疫苗的嵌合抗原，其由gE蛋白胞外539區段和Fc片段串聯構成；或者由兩個串聯的gE蛋白胞外539區段和Fc片段串聯構成；或者由gE蛋白胞外539區段和胞外134區段以及Fc片段串聯構成；或者由gE蛋白胞外134區段和胞外539區段以及Fc片段串聯構成；其中，gE蛋白胞外134區段的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，gE蛋白胞外539區段的氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示。2.如權利要求1所述用于制備帶狀皰疹病毒疫苗的嵌合抗原，其特征在于，所述Fc片段是來源于人IgG Fc片段,更具體地，其氨基酸序列SEQ ID NO：16所示。3.如權利要求1所述用于制備帶狀皰疹病毒疫苗的嵌合抗原，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，SEQ ID NO：9所示，SEQ ID NO：11所示或SEQ I...

【專利技術屬性】
技術研發人員：郭建立，張海江，張愛晶，伍樹明，王艷，房紅磊，朱家彤，余蒙丹，楊秀芬，劉鵬，張堯，銀飛，王建英，劉永江，
申請(專利權)人：北京康樂衛士生物技術股份有限公司，
類型：發明
國別省市：