一種誘導性多能干細胞及其制備方法和應用技術

本發明專利技術公開了一種誘導性多能干細胞及其制備方法和應用。所述方法包括向體細胞導入重編程因子基因并提高FOS蛋白或其變體表達，進行培養，得到所述誘導性多能干細胞。本發明專利技術發現在體細胞中同時過表達OSKM四因子(OCT4(NM_002701)、SOX2(NM_003106)、KLF4(NM_004235)、c

【技術實現步驟摘要】
一種誘導性多能干細胞及其制備方法和應用


[0001]本專利技術屬于生物
，涉及一種誘導性多能干細胞及其制備方法和應用。

技術介紹

[0002]誘導性多能干細胞(Induced pluripotent stem cells，iPS細胞)，是指體細胞經導入多能遺傳基因或在其他誘導因子的作用下進行基因的重新編程，從而得到的具有多向分化潛能的干細胞。2006年8月，日本京都大學Yamanaka研究小組將Oct4、Sox2、Klf4及c
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Myc(OSKM)這4個基因轉入小鼠成纖維細胞，首次將體細胞直接重編程為胚胎干細胞樣的多潛能干細胞，標志著體細胞重編程為iPS細胞技術的誕生。2007年底，Yamanaka小組和Thomson小組先后成功將人成纖維細胞重編程為iPS細胞。這項研究對于人類干細胞領域的研究和應用起到了巨大的推動作用，它規避了胚胎干細胞(Embryonic Stem Cells，ESCs)異體移植免疫排斥的風險以及ESCs所帶來的倫理學問題等，使得iPS細胞在再生醫學領域展現出廣闊的應用前景。
[0003]盡管iPS細胞有著廣闊的應用前景，然而在整個iPS研究過程中，iPS轉化效率低以及易分化現象始終是研究中較大的障礙。在此前的常規轉化方法中，如CN109576226A公開一種所述方法包括如下步驟：(1)收集尿液，離心棄上清，洗滌沉淀，重懸細胞；(2)將步驟(1)所得重懸細胞接種于包被的培養皿中，過夜培養，之后換液培養，直到長出UDCs克隆，傳代培養；(3)吸棄傳代培養的培養基，胰酶消化，收集細胞計數，利用電轉染方法轉染質粒，加入到復蘇培養板中過夜培養，之后換液培養，篩選iPS克隆；其中，質粒包括pCXLE
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hOCT3/4
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shp53、pCXLE
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hSK和pCXLE
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hUL。iPS細胞重編程的效率較低，而且這一過程需要數周時間，一定程度限制了iPS細胞的廣泛應用。
[0004]綜上所述，如何提供一種高效的促進體細胞重編程的方法，是誘導性多能干細胞領域亟需解決問題之一。

技術實現思路

[0005]針對現有技術的不足和實際需求，本專利技術提供一種誘導性多能干細胞及其制備方法和應用，本專利技術在體細胞中同時過表達OSKM四因子基因(OCT4、SOX2、KLF4、c
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MYC)和FOS基因，利用其協同配合，能夠顯著提高誘導重編程效率，實現高效制備誘導性多能干細胞。
[0006]為達上述目的，本專利技術采用以下技術方案：
[0007]第一方面，本專利技術提供一種將體細胞重編程為誘導性多能干細胞的方法，所述方法包括：
[0008]向體細胞導入重編程因子基因并提高FOS蛋白或其變體表達，進行培養，得到所述誘導性多能干細胞。
[0009]本專利技術發現在體細胞中過表達重編程誘導因子以及提高FOS(NM_005252)蛋白表達，重編程誘導因子和FOS蛋白協同配合，能夠顯著提高誘導重編程效率，實現高效制備誘導性多能干細胞。
[0010]本專利技術中，FOS基因為原癌基因，基因ID為2353，該基因編碼的蛋白可以與JUN家族的蛋白二聚化，從而形成轉錄因子復合物AP
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1。因此，FOS蛋白被認為是細胞增殖、分化和轉化的調節因子，在某些情況下，FOS基因的表達也與凋亡細胞的死亡有關。
[0011]其中，FOS蛋白的氨基酸序列為：
[0012]MMFSGFNADYEASSSRCSSASPAGDSLSYYHSPADSFSSMGSPVNAQDFCTDLAVSSANFIPTVTAISTSPDLQWLVQPALVSSVAPSQTRAPHPFGVPAPSAGAYSRAGVVKTMTGGRAQSIGRRGKVEQLSPEEEEKRRIRRERNKMAAAKCRNRRRELTDTLQAETDQLEDEKSALQTEIANLLKEKEKLEFILAAHRPACKIPDDLGFPEEMSVASLDLTGGLPEVATPESEEAFTLPLLNDPEPKPSVEPVKSISSMELKTEPFDDFLFPASSRPSGSETARSVPDMDLSGSFYAADWEPLHSGSLGMGPMATELEPLCTPVVTCTPSCTAYTSSFVFTYPEADSFPSCAAAHRKGSSSNEPSSDSLSSPTLLAL。
[0013]FOS(NM_005252)基因核酸序列為：
[0014]ATGATGTTCTCGGGCTTCAACGCAGACTACGAGGCGTCATCCTCCCGCTGCAGCAGCGCGTCCCCGGCCGGGGATAGCCTCTCTTACTACCACTCACCCGCAGACTCCTTCTCCAGCATGGGCTCGCCTGTCAACGCGCAGGACTTCTGCACGGACCTGGCCGTCTCCAGTGCCAACTTCATTCCCACGGTCACTGCCATCTCGACCAGTCCGGACCTGCAGTGGCTGGTGCAGCCCGCCCTCGTCTCCTCCGTGGCCCCATCGCAGACCAGAGCCCCTCACCCTTTCGGAGTCCCCGCCCCCTCCGCTGGGGCTTACTCCAGGGCTGGCGTTGTGAAGACCATGACAGGAGGCCGAGCGCAGAGCATTGGCAGGAGGGGCAAGGTGGAACAGTTATCTCCAGAAGAAGAAGAGAAAAGGAGAATCCGAAGGGAAAGGAATAAGATGGCTGCAGCCAAATGCCGCAACCGGAGGAGGGAGCTGACTGATACACTCCAAGCGGAGACAGACCAACTAGAAGATGAGAAGTCTGCTTTGCAGACCGAGATTGCCAACCTGCTGAAGGAGAAGGAAAAACTAGAGTTCATCCTGGCAGCTCACCGACCTGCCTGCAAGATCCCTGATGACCTGGGCTTCCCAGAAGAGATGTCTGTGGCTTCCCTTGATCTGACTGGGGGCCTGCCAGAGGTTGCCACCCCGGAGTCTGAGGAGGCCTTCACCCTGCCTCTCCTCAATGACCCTGAGCCCAAGCCCTCAGTGGAACCTGTCAAGAGCATCAGCAGCATGGAGCTGAAGACCGAGCCCTTTGATGACTTCCTGTTCCCAGCATCATCCAGGCCCAGTGGCTCTGAGACAGCCCGCTCCGTGCCAGACATGGACCTATCTGGGTCCTTCTATGCAGCAGACTGGGAGCCTCTGCACAGTGGCTCCCTGGGGATGGGGCCCATGGCCACAGAGCTGGAGCCCCTGTGCACTCCGGTGGTCACCTGTACTCCCAGCTGCACTGCTTACACGTCTTCCTTCGTCTTCACCTACCCCGAGGCTGACTCCTTCCCCAGCTGTGCAGCTGC本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種將體細胞重編程為誘導性多能干細胞的方法，其特征在于，所述方法包括：向體細胞導入重編程因子基因并提高FOS蛋白或其變體表達，進行培養，得到所述誘導性多能干細胞。2.根據權利要求1所述的將體細胞重編程為誘導性多能干細胞的方法，其特征在于，所述變體至少有一個氨基酸發生突變，且氨基酸序列同源性至少為50％；優選地，所述體細胞包括尿液細胞、皮膚成纖維細胞或外周血單核細胞。3.根據權利要求1或2所述的將體細胞重編程為誘導性多能干細胞的方法，其特征在于，所述提高FOS蛋白或其變體表達的方法包括基因過表達、外源導入mRNA或者蛋白質中的任意一種；優選地，所述重編程因子包括Oct4、Sox2、Klf4、c
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Myc、LIN28、L
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MYC、N
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MYC或Mir302
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367簇中任意一種或至少兩種的組合。4.根據權利要求1
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3任一項所述的將體細胞重編程為誘導性多能干細胞的方法，其特征在于，所述方法包括：向體細胞中...

【專利技術屬性】
技術研發人員：請求不公布姓名，
申請(專利權)人：深圳市濟因生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：