本發明專利技術提供了一種毛囊干細胞的增殖方法，涉及毛囊干細胞培養技術領域，旨在解決毛囊干細胞存量較少，且獲取難度較大的問題，采用的技術方案是，在無菌室中，從人體后腦部表皮中提取毛囊干細胞，獲得毛囊干細胞懸液；制備無血清培養基；向毛囊干細胞懸液中添加無血清培養基，進行初步培養，獲得原代毛囊干細胞；將原代毛囊干細胞接種與培養瓶中，添加無血清培養基進行增殖培養；利用獲取的皮膚樣本獲取毛囊干細胞，能夠保證獲取具有活性的毛囊干細胞，便于后續對毛囊干細胞的增殖培養；通過進行干細胞采集、分離培養、培養擴增等環節，對毛囊原基進行增殖，從而達到毛囊干細胞的制備，毛囊干細胞獲取難度降低，存量增多。存量增多。
【技術實現步驟摘要】
一種毛囊干細胞的增殖方法
[0001]本專利技術涉及毛囊干細胞培養
，具體為一種毛囊干細胞的增殖方法。
技術介紹
[0002]毛囊干細胞是在人的毛囊外根鞘隆突部中的一種。毛囊干細胞屬于成體干細胞，在體內處于靜止狀態，在體外培養作用下表現出驚人的增殖能力。研究發現，毛囊干細胞具有多向分化潛能，它可以分化成表皮、毛囊、皮脂腺，參與皮膚創傷愈合的過程。
[0003]毛囊干細胞是毛囊中的，和其它成體干細胞一樣，具有慢周期性、未分化性、自我更新和體外增殖能力強等特點。毛囊干細胞分化經毛囊干細胞、短暫增殖細胞有絲分裂后分化細胞三個階段。毛囊干細胞在光鏡下呈立方形，細胞體積小，核漿比率大，表面光滑，皺褶少，又被稱為非鋸齒形細胞，細胞體積的增大與增殖能力呈負相關。超微結構顯示細胞表面有少許微絨毛，細胞核存在許多卷曲，染色質彌散分布，這些形態特征均表現出原始細胞的特性。
[0004]毛囊干細胞最重要的特點之一就是慢周期性，而且可以有無限多次細胞周期。當暴露于帶有核素活其他標記的核苷酸時，細胞在DNA合成的過程中攝取標記核苷酸而將標記整合到DNA中。由于干細胞的細胞周期長，這樣的標記可以維持相當長一段時間。正是由于干細胞的這一特點，有人便將它稱為標記滯留細胞。
[0005]細胞增殖是生物體的重要生命特征，細胞以分裂的方式進行增殖。單細胞生物，以細胞分裂的方式產生新的個體。多細胞生物，以細胞分裂的方式產生新的細胞，用來補充體內衰老或死亡的細胞。
[0006]多細胞生物可以由一個受精卵，經過細胞的分裂和分化，最終發育成一個新的多細胞個體。必須強調指出，通過細胞分裂，可以將復制的遺傳物質，平均地分配到兩個子細胞中去。可見，細胞增殖是生物體生長、發育、繁殖和遺傳的基礎。
[0007]目前毛囊干細胞存量較少，且獲取難度較大，培養質量有待提高，需要對其進行進一步培養，以滿足實際應用需求；因此，亟需一種毛囊干細胞的增殖方法來解決上述問題。
技術實現思路
[0008]鑒于現有技術中所存在的問題，本專利技術公開了一種毛囊干細胞的增殖方法，采用的技術方案是，包括以下步驟：步驟1，在無菌室中，從人體后腦部表皮中提取毛囊干細胞，獲得毛囊干細胞懸液；步驟2，制備無血清培養基；步驟3，向毛囊干細胞懸液中添加無血清培養基，進行初步培養，獲得原代毛囊干細胞；步驟4，將原代毛囊干細胞接種與培養瓶中，添加無血清培養基進行增殖培養，利用獲取的皮膚樣本獲取毛囊干細胞，能夠保證獲取具有活性的毛囊干細胞，便于后續對毛囊干細胞的增殖培養。
[0009]作為本專利技術的一種優選技術方案，所述步驟1中，提取毛囊干細胞，獲得毛囊干細胞懸液還包括以下步驟：步驟a，將皮膚樣本表面臟物清理后，將皮膚樣本消毒清洗；步驟b，將皮膚樣本切塊，加入PBS消化處理，直到組織塊變軟；步驟c，將消化后的混合物離心處理，取出上清液，獲得毛囊干細胞懸液。
[0010]作為本專利技術的一種優選技術方案，所述步驟a中，皮膚樣本采用75％酒精消毒后使用濃鹽緩沖液清洗，通過對皮膚樣本的表面進行清理消毒，避免皮膚樣本中存在其他雜菌或臟物影響對毛囊干細胞的獲取。
[0011]作為本專利技術的一種優選技術方案，所述步驟b中，采用含有胰酶和膽紅素的PBS，放入37℃的恒溫水浴中消化1
?
2小時，通過進行干細胞采集、分離培養、培養擴增等環節，對毛囊原基進行增殖，從而達到毛囊干細胞的制備，毛囊干細胞獲取難度降低，存量增多。
[0012]作為本專利技術的一種優選技術方案，所述步驟c中，混合物離心處理中采用800
?
1200r/min離心分離。
[0013]作為本專利技術的一種優選技術方案，所述步驟2中，無血清培養基包括DMEM培養基為35
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45mL、胰島素為1
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10μg/mL，EGF為1
?
100ng/mL，FGF
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2為1
?
100ng/mL、B27補充劑為0.1
?
0.4μg/mL的、N2補充劑為20
?
40ng/mL、羥基乙醇為25
?
50μL、體積百分含量14
?
16％的胎牛血清。
[0014]作為本專利技術的一種優選技術方案，所述無血清培養基包括DMEM培養基為38mL、胰島素為4μg/mL，EGF為40ng/mL，FGF
?
2為60ng/mL、B27補充劑為0.2μg/mL的、N2補充劑為28ng/mL、羥基乙醇為33μL、體積百分含量15％的胎牛血清。
[0015]B27補充劑：是一種無血清培養基添加劑，含有多種細胞生長和分化所需的營養物質，如維生素、氨基酸、脂質等。
[0016]N2補充劑：是一種無血清培養基添加劑，含有多種細胞生長和分化所需的營養物質，如維生素、氨基酸、脂質等。
[0017]FGF
?
2：是一種生長因子，能促進細胞增殖和分化，對毛囊干細胞的生長和分化有促進作用。
[0018]EGF：是一種生長因子，能促進細胞增殖和分化，對毛囊干細胞的生長和分化有促進作用。
[0019]作為本專利技術的一種優選技術方案，所述步驟3中，將毛囊干細胞懸液放入37℃、5％CO2飽和濕度環境中培養4
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8小時，進行半量換液，清除未貼壁細胞；當半量換液重復進行2
?
3次后，獲得高純度的原代毛囊干細胞，本技術方案中所記載的增殖方法，操作環節簡便，制備成本可控，并且毛囊干細胞培養質量高，需求滿足度提高，推廣價值相應提升。
[0020]本專利技術的有益效果：本專利技術通過利用獲取的皮膚樣本獲取毛囊干細胞，能夠保證獲取具有活性的毛囊干細胞，便于后續對毛囊干細胞的增殖培養；通過對皮膚樣本的表面進行清理消毒，避免皮膚樣本中存在其他雜菌或臟物影響對毛囊干細胞的獲取；通過進行干細胞采集、分離培養、培養擴增等環節，對毛囊原基進行增殖，從而達到毛囊干細胞的制備，毛囊干細胞獲取難度降低，存量增多。
[0021]進一步的，本技術方案中所記載的增殖方法，操作環節簡便，制備成本可控，并且毛囊干細胞培養質量高，需求滿足度提高，推廣價值相應提升。
具體實施方式
[0022]實施例1
[0023]本專利技術公開了一種毛囊干細胞的增殖方法，采用的技術方案是，包括以下步驟：步驟1，在無菌室中，從人體后腦部表皮中提取毛囊干細胞，獲得毛囊干細胞懸液；提取毛囊干細胞，獲得毛囊干細胞懸液還包括以下步驟：步驟a，將皮膚樣本表面臟物清理后，將皮膚樣本消毒清洗；所述步驟a中，皮膚樣本采用75％酒精消毒后使用濃鹽緩沖液清洗；步驟b，將皮膚樣本切塊，加入PBS消化處理，直到組織塊變軟；所述步驟b中，采用含有胰酶和膽紅素的PBS，放入37℃的恒溫水浴中消化1小時；步驟c，將消化后的混合物離心處理，取出上清液，獲得毛囊干細胞懸液；所述步驟c中，混合物離心處理中采用800r/min離心分離；獲取的皮膚樣本獲取毛本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.一種毛囊干細胞的增殖方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟1，在無菌室中，從人體后腦部表皮中提取毛囊干細胞，獲得毛囊干細胞懸液；步驟2，制備無血清培養基；步驟3，向毛囊干細胞懸液中添加無血清培養基，進行初步培養，獲得原代毛囊干細胞；步驟4，將原代毛囊干細胞接種與培養瓶中，添加無血清培養基進行增殖培養。2.根據權利要求1所述的一種毛囊干細胞的增殖方法，其特征在于：所述步驟1中，提取毛囊干細胞，獲得毛囊干細胞懸液還包括以下步驟：步驟a，將皮膚樣本表面臟物清理后，將皮膚樣本消毒清洗；步驟b，將皮膚樣本切塊，加入PBS消化處理，直到組織塊變軟；步驟c，將消化后的混合物離心處理，取出上清液，獲得毛囊干細胞懸液。3.根據權利要求2所述的一種毛囊干細胞的增殖方法，其特征在于：所述步驟a中，皮膚樣本采用75％酒精消毒后使用濃鹽緩沖液清洗。4.根據權利要求2所述的一種毛囊干細胞的增殖方法，其特征在于：所述步驟b中，采用含有胰酶和膽紅素的PBS，放入37℃的恒溫水浴中消化1
?
2小時。5.根據權利要求2所述的一種毛囊干細胞的增殖方法，其特征在于：所述步驟c中，混合物離心處理中采用800
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1200r/min離心分離。6.根據權利要求1所述的一種毛囊干細胞的增殖方法，其特征在于：所述步驟2中，無血清...
【專利技術屬性】
技術研發人員：宋偉，
申請(專利權)人：大連思芙雅生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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