一種新型冠狀病毒的嵌合蛋白及其得到的疫苗制造技術

本發明專利技術屬于生物醫藥領域，具體涉及新型冠狀病毒的嵌合抗原制備及其應用，通過嵌合德爾塔(Delta)和奧密克戎(Omicron)變異株的蛋白序列，得到的二價苗能夠顯著提高Omicron株蛋白的表達，有效緩解Fc脫落的問題，從而得到更優異的，更光譜的免疫效果，為二價疫苗產業化提供了基礎。提供了基礎。

【技術實現步驟摘要】
一種新型冠狀病毒的嵌合蛋白及其得到的疫苗


[0001]本專利技術屬于生物醫藥領域，具體涉及新型冠狀病毒的嵌合蛋白及其得到的疫苗。

技術介紹

[0002]新型冠狀病毒肺炎(也稱COVID
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19)是由新型冠狀病毒(也稱新冠病毒，SARS
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CoV
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2)感染導致的一種急性呼吸道傳染病。新冠病毒屬于冠狀病毒科β
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冠狀病毒屬，具有囊膜，是正鏈RNA病毒。新冠病毒表面的刺突(S)蛋白負責病毒的受體識別和膜融合，S蛋白上存在受體結合結構域(RBD)是一個重要的疫苗靶點，它激發中和抗體的產生，具有免疫聚焦的優勢。本司以前申請過關于新冠病毒原型株以及原型株和突變型的混合二價疫苗。具體見專利CN202011454175.1和CN202110659137.8。同時很多同行其他公司也申請了不同抗原形式的疫苗。比如，CN115724999A
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串聯式雜合三聚體新冠疫苗，將野生型和多個突變體類型進行抗原串聯構建。
[0003]目前新冠病毒變異株不斷出現和流行，其中有些會逃逸現有疫苗的免疫反應，引起突破性感染。特別是德爾塔(Delta)和奧密克戎(Omicron)變異株成為了優勢流行毒株。Omicron變異株的S蛋白突變位點多達幾十處，對新冠病毒中和抗體藥物和疫苗激活的體液免疫反應都有嚴重的免疫逃逸。奧密克戎BA.5變異株已成為主要流行的變異株，BA.2變體，基因測序分析認為，該變體有67個核苷酸變異位點，在蛋白質水平上有49個氨基酸突變位點和9個氨基酸缺失。從病毒學特征來看，BA.5變異株比BA.2變異株具有更強的復制和傳播能力。研究還表明，BA.5變異株可以在2分鐘左右進入宿主細胞，20
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30分鐘左右在上呼吸道呈現指數復制，12
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24小時后在感染細胞中釋放成熟的病毒顆粒，也就是我們通常說的開始排毒，并通過飛沫、氣溶膠等方式進行傳播。然而，有研究報道，以Omicron序列開發的疫苗激活的免疫反應雖然對Omicron變異株較強，但是對原型毒株以及其它毒株的交叉反應很弱，不適應當前原型株和多種變異株共存，且流行變異株仍在較快變化的情況，同時Omicron株蛋白表達量低，單價表達量在0.1mg/L。連接Fc標簽進行純化時，Fc標簽很容易脫落，蛋白非常不好表達純化，進而影響了疫苗的制備。
[0004]因此，需要研發一款針對當前的全球流行株均具有較強保護效果，可以誘導廣譜的免疫反應的疫苗，這對于新冠疫情的防控可以起到至關重要的作用，同時還要提高Omicron株蛋白表達量低等問題。

技術實現思路

[0005]CHO細胞表達平臺串聯表達了Omicron BA.5和Delta的RBD
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SD1(簡稱O5D)，Omicron BA.2和Delta的RBD
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SD1(簡稱O2D)，C端融合有人抗體IgG1 Fc片段，形成RBD
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SD1
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RBD
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SD1
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hFc的串聯形式。采用融合hFc的抗原表達方式，可以使抗原形成類似抗體的Y型二聚體結構，增加抗原免疫原性。其中，本專利技術的嵌合形式解決了Omicron的RBD
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SD1連接Fc，在表達時Fc脫落的問題，同時還可以提高Omicron的RBD
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SD1的表達量，從0.1mg/L提升到1mg/L。本專利技術得到的嵌合二價疫苗能有效針對多種病毒的引起免疫反應，達到保護目的，
具有明顯的應用優勢。
[0006]本專利技術首先提供一種新型冠狀病毒的嵌合蛋白，其包括新冠病毒Omicron變異株的RBD
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SD1序列與Delta變異株的RBD
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SD1序列直接串聯起來，在其C端連接加上Fc。
[0007]一個具體實施方式中，所述新冠病毒Omicron變異株是OmicronBA.2或OmicronBA.5。
[0008]更具體地，所述OmicronBA.2的RBD
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SD1的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示、OmicronBA.5的RBD
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SD1的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示，所述Delta變異株的RBD
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SD1的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示。
[0009]優選地，在其N端還連接有信號肽；所述Fc的氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示。更優選地，所述信號肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示。
[0010]本專利技術還提供編碼所述的嵌合蛋白的核酸。在一個具體實施方式中，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2。
[0011]本專利技術進一步提供含有所述的核酸的表達盒，其還包括啟動子和終止子序列。
[0012]以及含有所述的核酸，或所述的表達盒的重組表達載體。
[0013]本專利技術還提供含有所述的表達盒的重組表達載體的重組細胞。例如，其是哺乳動物細胞、昆蟲細胞、酵母細胞或細菌細胞。
[0014]本專利技術也提供基于所述的嵌合蛋白的疫苗。進一步的，還含有佐劑，例如氫氧化鋁佐劑。
[0015]本專利技術通過研究發現針對括新冠病毒Omicron變異株(尤其是新冠病毒Omicron變異株是OmicronBA.2或OmicronBA.5)的RBD序列與Delta變異株的RBD串聯的嵌合抗原中，如果增加SD1序列，對于其C端連接的Fc就不易脫落，同旦表達情況也表現非常優異，如此體現出本專利技術具有明顯的優勢。通過SDS
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PAGE分的，其表達背景清晰，單獨Omicron表達時表量在0.1mg/L，通過構建嵌合抗原，其表達量可以提到1mg/L，表達優勢也十分顯著。
[0016]說明書附圖
[0017]圖1、OmicronBA.2
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Delta構建質粒圖。
[0018]圖2、OmicronBA.5
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Delta構建質粒圖。
[0019]圖3A、實施例3的Omicron BA.2
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Delta嵌合(O)RBD
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SD1
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(D)RBD
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SD1
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hFc(O2D)的電泳圖。
[0020]圖3B、實施例3的Omicron BA.5
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Delta嵌合(O)RBD
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SD1
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(D)RBD
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SD1
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hFc(O5D)的電泳圖。
具體實施方式
[0021]下面通過本專利技術的具體實施例進一步闡述本專利技術，以期更好的理解本專利技術，但并不構成對本專利技術的限制。
[0022]實施例一、Omicron
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Delta嵌合(O)RBD
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SD1
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(D)R本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種新型冠狀病毒的嵌合蛋白，其特征在于，其包括新冠病毒Omicron變異株的RBD
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SD1序列與Delta變異株的 RBD
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SD1序列直接串聯起來，在其C端連接加上Fc。2.如權利要求1所述的嵌合蛋白，其特征在于，所述新冠病毒Omicron變異株是OmicronBA.2或OmicronBA.5。3.如權利要求2所述的嵌合蛋白，其特征在于，所述OmicronBA.2的RBD
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SD1的氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示、OmicronBA.5的RBD
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SD1的氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示，所述Delta變異株的 RBD
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SD1的氨基酸序列如S...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張愛晶，張海江，宋曉婉，王艷，伍樹明，宋嘉，楊秀芬，劉鵬，郭建立，銀飛，王建英，劉永江，
申請(專利權)人：北京康樂衛士生物技術股份有限公司，
類型：發明
國別省市：