尖葉假龍膽來源的Gen-miR-5在制備防治心肌肥大的藥物中的應用制造技術

本發(fā)明專利技術公開了尖葉假龍膽來源的Gen

【技術實現步驟摘要】
尖葉假龍膽來源的Gen
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miR
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5在制備防治心肌肥大的藥物中的應用


[0001]本專利技術屬于中藥生物
，涉及尖葉假龍膽來源的Gen
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5在制備防治心肌肥大的藥物中的應用。

技術介紹

[0002]尖葉假龍膽(Gentianellaacuta，G.acuta)又名“阿古特
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其其格”，歸屬“地格達”類蒙藥，具有清熱解毒的功效，也是目前作為假龍膽屬唯一一種具有心臟保護作用的藥用植物。蒙古族和鄂溫克族獵民長期用G.acuta泡水代茶飲治療心絞痛等疾病，療效極為顯著。
[0003]近年研究表明，中藥來源小RNA可以通過脂質湯劑體和本草體的形式實現穩(wěn)定遞送，并依賴SDIT1蛋白介導胃部吸收，進入哺乳動物體內發(fā)揮靶向調控作用
[10]，不僅可以調節(jié)人體脂肪代謝，防治腫瘤的發(fā)生，甚至能夠抑制甲型流感病毒的復制和COVID
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19的發(fā)生發(fā)展。自此開啟了中藥來源miRNAs跨物種調節(jié)治療疾病的熱點研究。在前期研究中，我們發(fā)現了丹參中特異性存在的Sal
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1和Sal
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3可以跨物種調控OTUD7B/KLF4/NMHCⅡA通路影響血管平滑肌細胞(VSMC)表型轉換，從而抑制細胞的遷移和粘附，有效改善了血管內膜增生(ZL 201910501245.5)；此外，丹參來源Sal
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58可以通過調控KLF3/NEDD4L/PFKP軸誘導自噬并減輕VSMC炎癥反應(ZL 201910500914.7)。以上結果提示，中藥來源miRNAs也與已知的有效成分一樣具有治療疾病的作用，且作用效果顯著。
[0004]申請人前期實驗已證實，G.acuta來源Gen
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1通過靶向HAX1/HMG20A/Smads軸，減輕心臟成纖維細胞的炎癥反應，抑制心肌纖維化的發(fā)生(CN202210634779.7)。而G.acuta來源Gen
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5對心肌肥大的藥物作用目前尚無報道。
[0005]心臟作為一個高耗能的復雜器官，心肌細胞嚴重依賴線粒體氧化代謝作為其能量和營養(yǎng)供應的來源，在心肌肥大導致心力衰竭的患者中，常伴有心肌細胞線粒體嵴斷裂，線粒體膜電位發(fā)生改變，線粒體分裂增加，導致細胞呼吸下降，ATP合成減少。提示心肌細胞線粒體結構損傷和心肌肥大密切相關。因此，維持胞內線粒體結構完整性對心肌細胞的正常運行是至關重要的，線粒體過度分裂是心肌肥大的核心事件。然而，線粒體動力學(線粒體融合/分裂)失衡誘發(fā)的心肌肥大中的模式和作用機制仍不清楚。

技術實現思路

[0006]本專利技術的目的是針對現有技術的上述不足，提供尖葉假龍膽來源的Gen
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5在制備防治心肌肥大的藥物中的應用。
[0007]本專利技術的目的可通過以下技術方案實現：
[0008]SEQ ID NO.1所示的Gen
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5在制備治療心肌肥大的藥物中的應用。
[0009]作為本專利技術的一種優(yōu)選，所述的Gen
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5在其3'末端核苷酸上存在2
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methylated結構的修飾。
[0010]作為本專利技術的一種優(yōu)選，所述的Gen
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5來源于尖葉假龍膽(Gentianella acuta)或直接化學合成。
[0011]作為本專利技術的一種優(yōu)選，所述Gen
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5在用于制備治療心肌肥大導致心力衰竭的藥物中的用途。
[0012]含有SEQ ID NO.1所示的Gen
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5的組合物，所述的Gen
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5在其3'末端核苷酸上存在2
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methylated結構的修飾。
[0013]作為本專利技術的一種優(yōu)選，所述的組合物還含有藥用輔料。
[0014]作為本專利技術的一種優(yōu)選，所述的組合物被制備成脂質體、納米粒、片劑、膠囊劑或注射劑。
[0015]有益效果：
[0016]本專利技術經對尖葉假龍膽進行二代高通量測序，篩選并鑒定了特異性存在于尖葉假龍膽中的miRNA，將尖葉假龍膽的有效成分單一化并合成、動物模型和體外實驗研究抗心肌細胞線粒體分裂的作用機制的研究，發(fā)現尖葉假龍膽來源的Gen
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5在抑制線粒體分裂過程中發(fā)揮抗心肌肥大的作用。本專利技術采用了生物化學、分子生物學、組織病理學等方法，研制出具有維持線粒體穩(wěn)態(tài)作用的Gen
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5，為臨床治療心血管重塑提供一種高效、低毒的新型藥物奠定基礎，為研發(fā)中藥治療心血管重塑提供體內藥效學及作用機制及理論實驗依據，為科技成果轉化創(chuàng)造條件。
附圖說明
[0017]圖1尖葉假龍膽RNA建庫測序流程
[0018]圖2尖葉假龍膽來源Gen
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miR
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5二級結構
[0019]圖3尖葉假龍膽來源miRNAs分類
[0020]圖4尖葉假龍膽特有的miRNAs表達豐度
[0021]圖5 qPCR檢測H9c2心肌細胞和尖葉假龍膽中miRNAs的表達水平
[0022]圖6尖葉假龍膽miRNA生物信息分析流程
[0023]圖7尖葉假龍膽miRNA KEGG pathway富集分析
[0024]圖8尖葉假龍膽miRNA GO富集分析
[0025]圖9 Gen
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5在組織中的表達水平
[0026]圖10.Gen
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5轉染心肌細胞，經高碘酸鈉處理，qPCR檢測Gen
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5在細胞中的表達水平
[0027]圖11整體心臟組織形態(tài)觀察
[0028]圖12 H&E、Masson、WGA染色觀察心臟組織形態(tài)
[0029]圖13超聲心動圖測量心功能相關參數
[0030]圖14 Western Blot檢測心肌肥大相關分子β
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MHC、ANP、BNP表達水平
[0031]圖15鬼筆環(huán)肽染色觀察心肌細胞表面積變化
[0032]圖16 Western Blot檢測H9c2細胞中線粒體動力學相關分子MFN1、MFN2、DRP1表達水平
[0033]圖17 MitoTracker染色觀察線粒體形態(tài)學變化
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【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.SEQ ID NO.1所示的Gen
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5在制備治療心肌肥大的藥物中的應用。2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的Gen
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5在其3'末端核苷酸上存在2
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methylated結構的修飾。3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于所述的Gen
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5來源于尖葉假龍膽(Gentianellaacuta)或直接化學合成。4.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于所述Ge...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：楊高山，李愛英，宋秋航，劉衛(wèi)哲，葛鴻瑤，
申請(專利權)人：河北中醫(yī)學院，
類型：發(fā)明
國別省市：