本發明專利技術涉及干細胞生物學領域，公開了一種促進人多能干細胞造血分化的方法：人多能干細胞在培養基中進行造血分化，所述培養基的滲透壓在200mOSM/L以上。本發明專利技術通過提高造血分化的培養基的滲透壓，促進hPSCs造血分化獲得CD43+造血前體細胞的效率，有效促進造血分化。有效促進造血分化。有效促進造血分化。
【技術實現步驟摘要】
一種促進人多能干細胞造血分化的方法及其培養基
[0001]本專利技術涉及干細胞生物學領域，具體涉及一種促進人多能干細胞造血分化的方法及其培養基。
技術介紹
[0002]從人多能干細胞(pluripotent stem cells，hPSCs)，包括胚胎干細胞(human embryonic stem cells；hESCs)和人誘導性多能干細胞(human induced pluripotent stem cells，hiPSCs)，人多能性干細胞能夠在體外具有長期培養保持自我更新能力，并且具有多向分化的潛能，包括分化為幾乎所有功能性的血液細胞。
[0003]造血前體細胞(hematopoietic progenitor cells，HPCs)是具有自我更新能力并能分化為各種血細胞的前體細胞，可以分化為各譜系血液細胞，包括T細胞、NK細胞、B細胞等淋巴細胞和紅細胞、巨噬細胞、粒細胞、血小板等髓系細胞的血液祖細胞。在臨床中，造血前體細胞以及各種成熟的血液細胞可服務于臨床上的造血干細胞移植和血細胞輸注治療的重大戰略需求，因而具有十分廣闊的臨床應用前景。而如何獲得足夠多的造血干細胞一直以來是困擾研究人員和醫務人員的難題。
[0004]造血前體細胞的表面標記分子為CD34+或者CD43+或者CD45+。其中，CD43是所有人多能干細胞造血分化獲得的血液細胞的標記分子。人多能干細胞定向分化成造血前體細胞，為獲得臨床上治療用造血前體細胞，尤其是CD34+/CD43+造血前體細胞提供了可能性。
[0005]人多能干細胞定向誘導活血造血前體細胞等血液細胞的過程稱之為造血分化，目前人多能干細胞定向造血分化獲得HPCs主要的手段是通過在造血分化過程中優化分化方法，如與基質細胞共培養、EB法、單層法；或者通過在造血分化過程中，添加細胞因子或者小分子化合物，以特異促進造血分化。然而這些方法效率普遍偏低，大大的限制了采用人多能干細胞體外造血分化的臨床應用。
[0006]基于以上現有分化技術中存在的問題，亟需尋找一種提高造血分化獲得HPCs的效率的方法。
技術實現思路
[0007]本專利技術的目的在于提供一種促進人多能干細胞造血分化的方法，可以提高造血分化的效率。
[0008]本專利技術的另一目的在于提供一種促進人多能干細胞造血分化的培養基。
[0009]為達到上述目的，本專利技術采用以下技術方案：
[0010]一種促進人多能干細胞造血分化的方法，人多能干細胞在培養基中進行造血分化，所述培養基的滲透壓在200mOSM/L以上。
[0011]進一步地，所述培養基的滲透壓在300mOSM/L以上。
[0012]進一步地，所述培養基的滲透壓在320mOSM/L以上。
[0013]進一步地，所述培養基的滲透壓在340mOSM/L以上。
[0014]進一步地，所述培養基的滲透壓在360mOSM/L以上。
[0015]進一步地，該方法包括以下步驟：
[0016]S1、形成擬胚體；
[0017]S2、擬胚體定向造血分化獲得造血前體細胞。
[0018]進一步地，所述步驟S1包括：將人多能干細胞制備成單細胞懸液，然后接種到培養容器中，在添加有抗凋亡抑制劑的情況下，靜置以形成擬胚體。
[0019]進一步地，所述步驟S2包括：
[0020]S21、將擬胚體靜置，使之自然沉降，然后去除原有培養基，并加入培養基重懸擬胚體，再轉移到培養器皿中，使擬胚體貼壁分化培養；
[0021]S22、去除原有培養基，加入新鮮的培養基進行誘導分化，直至獲得造血前體細胞。
[0022]一種促進人多能干細胞造血分化的培養基，所述培養基的滲透壓在200mOSM/L以上。
[0023]進一步地，所述培養基的滲透壓在300mOSM/L以上。
[0024]進一步地，所述培養基的滲透壓在320mOSM/L以上。
[0025]進一步地，所述培養基的滲透壓在340mOSM/L以上。
[0026]進一步地，所述培養基的滲透壓在360mOSM/L以上。
[0027]進一步地，所述培養基包括基礎培養基、細胞因子和調節滲透壓的物質，所述基礎培養基選自F12培養基、IMDM培養基、DMEM/F12培養基、1640培養基、SFM培養基。
[0028]進一步地，所述培養基包括基礎培養基、細胞因子和調節滲透壓的物質，所述基礎培養基為DMEM/F12培養基或者與DMEM/F12培養基具有同等或類似成分的培養基。
[0029]DMEM/F12培養基為商業化培養基，其成分可以參考：https://www.thermofisher.cn/cn/zh/home/technical
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resources/media
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formulation.54.html，實驗時可以根據實際需要，調整其中某些成分的種類和用量，比如不使用L
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脯氨酸、降低L
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亮氨酸的用量等，這視為與DMEM/F12培養基具有同等或類似成分的培養基。與DMEM/F12培養基具有同等或類似成分的培養基是指與DMEM/F12培養基的成分至少有60％相同的培養基，尤其是指與DMEM/F12培養基的成分至少有80％相同的培養基，特別是指與DMEM/F12培養基的成分至少有90％相同的培養基。
[0030]進一步地，所述調節滲透壓的物質為NaCl、CaCl2、KCl、Na2SO4、MgSO4、蔗糖、甘露醇、葡甲胺中的至少一種。
[0031]在造血分化的過程中，根據分化過程的不同階段，添加不同細胞因子，如Day0的基礎培養基加入細胞因子BMP4和VEGF，Day2～12的基礎培養基加入細胞因子VEGF、bFGF、IL3、IL6、SCF、FLT3
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L。細胞因子對培養基的滲透壓的影響很小，可以忽略不計。
[0032]本專利技術的人多能干細胞，指的是商品化人胚胎干細胞和人誘導性多能干細胞。
[0033]本專利技術具有以下有益效果：
[0034]現有造血分化體系，普遍忽略了培養基滲透壓對造血分化的影響，所采用培養基的滲透壓較低，本專利技術通過提高造血分化的培養基的滲透壓，促進hPSCs造血分化獲得CD43+造血前體細胞的效率，有效促進造血分化。本專利技術的培養基成分簡單，在商業化培養上僅需添加調節滲透壓的物質和細胞因子等，即可用于造血分化，無需加入血清等物質。
附圖說明
[0035]圖1為實施例1不同滲透壓下CD43+細胞得率的柱形圖。
具體實施方式
[0036]下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規方法和條件，或按照商品說明書選擇。本專利技術所用試劑和原料均通過市售可得。
[0037]實施例1
[0038]一種促進人多能干細胞造血分化的方法，包括以下步驟：
[0039]S1、形成擬胚體；
[0040]S2、擬胚體定向永久造血分化獲本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.一種促進人多能干細胞造血分化的方法，其特征在于，人多能干細胞在培養基中進行造血分化，所述培養基的滲透壓在200mOSM/L以上。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：S1、形成擬胚體；S2、擬胚體定向造血分化獲得造血前體細胞。3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟S1包括：將人多能干細胞制備成單細胞懸液，然后接種到培養容器中，在添加有抗凋亡抑制劑的情況下，靜置以形成擬胚體；所述步驟S2包括：S21、將擬胚體靜置，使之自然沉降，然后去除原有培養基，并加入培養基重懸擬胚體，再轉移到培養器皿中，使擬胚體貼壁分化培養；S22、去除原有培養基，加入新鮮的培養基進行誘導分化，直至獲得造血前體細胞。4.一種促進人多能干細胞造血分化的培養基，其特征在于，所述培養基的滲透壓在200mOSM/L以上。5.根據權利要求4所述的培養基，其特征在于，所述培養基的滲透壓在3...
【專利技術屬性】
技術研發人員：請求不公布姓名，
申請(專利權)人：深圳市濟因生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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