基于單鏈DNA金納米簇的熒光傳感法檢測(cè)維生素B1的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了基于單鏈DNA金納米簇的熒光傳感法檢測(cè)維生素B1的方法，將單鏈A30

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
基于單鏈DNA金納米簇的熒光傳感法檢測(cè)維生素B1的方法


[0001]本專利技術(shù)涉及一種維生素B1檢測(cè)方法，具體涉及一種基于單鏈DNA金納米簇的熒光傳感法檢測(cè)維生素B1的方法。屬于生物檢測(cè)


技術(shù)介紹

[0002]維生素B1(Vitamin B1，VB1)，也稱硫胺素，它通過一個(gè)亞甲基連接一個(gè)氨基嘧啶環(huán)和一個(gè)噻唑環(huán)，兩個(gè)環(huán)上分別含有甲基和羥乙基的側(cè)鏈。眾所周知，VB1在乳制品中是一種必需的水溶性維生素和天然營養(yǎng)物，平均每日攝入量為0.5～1mg。它在生命系統(tǒng)中碳水化合物、氨基酸和脂質(zhì)的代謝過程中起著至關(guān)重要的作用。此外，作為一種生物和藥學(xué)上重要的化合物，VB1是維持心臟、神經(jīng)和心血管系統(tǒng)正常功能的必需化合物。缺乏VB1會(huì)對(duì)人類造成許多有害的影響，最值得注意的是，缺乏VB1會(huì)導(dǎo)致腳氣病Wernicke
?
Korsakoff綜合征。因此，臨床上VB1主要用于治療腳氣病和各種多發(fā)性神經(jīng)炎。
[0003]目前，已開發(fā)出多種方法來測(cè)定VB1，如薄層色譜法、毛細(xì)管電泳法(CE)、高效液相色譜法(HPLC)、分光光度法和熒光光譜法等。然而，復(fù)雜的儀器以及樣品預(yù)處理常常限制了這些方法的應(yīng)用，有些方法的測(cè)試也表現(xiàn)出了線性范圍窄以及易受共存離子干擾的限制。因此，開發(fā)一種簡便靈敏、低成本、高效率、有選擇性的檢測(cè)VB1的方法仍然很有意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

[0004]本專利技術(shù)的目的是為克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種基于單鏈DNA金納米簇的熒光傳感法檢測(cè)維生素B1的方法，利用單鏈A30
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ssDNA為模板合成的金納米簇作為熒光探針，基于VB1可以誘導(dǎo)熒光金納米簇?zé)晒忖纾瑯?gòu)建一種檢測(cè)VB1的熒光傳感方法。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用下述技術(shù)方案：
[0006]1、一種熒光探針的制備方法，先將DNA溶液、檸檬酸鈉溶液、氯金酸溶液以及超純水混合均勻，得到混合液，加熱孵育，得到熒光金納米簇溶液，即為所述的熒光探針；其中，所述DNA溶液是將單鏈A30
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ssDNA溶于超純水而得，單鏈A30
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ssDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]5′?
AAA AAAAAAAAAAAAAAAAAA AAAAAAAAA
?3′
，如SEQ ID NO.1所示，HPLC純化。
[0008]優(yōu)選的，DNA溶液、檸檬酸鈉溶液、氯金酸溶液、超純水的體積比為5：5：3：37，DNA溶液、檸檬酸鈉溶液、氯金酸溶液的濃度分別為2μmol/L、50mmol/L(pH＝6.0)、1mmol/L。
[0009]優(yōu)選的，加熱孵育的工藝條件為：90℃孵育30分鐘。
[0010]2、一種熒光探針，是通過前述制備方法得到的。
[0011]3、上述一種熒光探針在維生素B1定量檢測(cè)中的應(yīng)用。
[0012]4、上述一種熒光探針在維生素B1定量檢測(cè)中的應(yīng)用。
[0013]5、基于單鏈DNA金納米簇的熒光傳感法檢測(cè)維生素B1的方法，向盛有前述熒光探針的離心管中加入VB1溶液，混合孵育，利用熒光分光光度計(jì)測(cè)定VB1溶液加入前后的熒光強(qiáng)度，進(jìn)而確定溶液中VB1的含量。
[0014]優(yōu)選的，還向離心管中加入pH＝6.5的PB緩沖液(磷酸緩沖液)，VB1溶液、熒光探針、PB緩沖液的體積比為3：1：1，VB1溶液的濃度在0.01到1μmol/L的范圍內(nèi)。
[0015]優(yōu)選的，混合孵育的工藝條件為：室溫(25℃)孵育10分鐘。
[0016]優(yōu)選的，金納米簇的熒光強(qiáng)度降低值與VB1的濃度呈線性關(guān)系，線性回歸方程為y＝437.16x+18.034，其中，x為VB1濃度，y為熒光強(qiáng)度降低值，線性回歸系數(shù)R2為0.9935，檢出限為3nmol/L。
[0017]本專利技術(shù)的有益效果：
[0018]本專利技術(shù)將單鏈A30
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ssDNA為模板的金納米簇作為熒光探針，免標(biāo)記、快速、高靈敏度、高特異性定量檢測(cè)復(fù)雜體系中VB1含量。具體來說，以單鏈A30
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ssDNA模板合成的金納米簇作為熒光探針，通過熒光強(qiáng)度變化特異性檢測(cè)溶液中VB1含量。該方法簡單、快速，檢測(cè)線性范圍寬，檢出限低，具有較好的檢測(cè)靈敏度和特異性，在食品、藥品等方面具有很好的應(yīng)用前景。具體如下：
[0019](1)合成的金納米簇具有穩(wěn)定的光學(xué)性質(zhì)，合成方法簡單、快速，成本低，合成材料熒光性能好。
[0020](2)利用合成的具有獨(dú)特光學(xué)性能的金納米簇作為熒光探針，高特異性傳感檢測(cè)VB1的含量，操作簡單、快速，可以直接實(shí)現(xiàn)對(duì)VB1的特異性檢測(cè)。
[0021]金納米簇作為一種新型的功能性納米顆粒，由于其合成簡單、光穩(wěn)定性好以及在水溶液中具有良好的分散性，使其作為熒光探針在生物傳感領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。本專利技術(shù)采用金納米簇作為熒光探針，實(shí)現(xiàn)對(duì)溶液中VB1含量進(jìn)行免標(biāo)記、快速定量檢測(cè)。
[0022]熒光金屬納米分析方法具有操作簡單、速度快、靈敏度高、選擇性好等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)引起了研究人員的廣泛研究興趣。
[0023](3)利用金納米簇體系中加入VB1后，金納米簇的熒光強(qiáng)度下降，該方法可以實(shí)現(xiàn)對(duì)VB1的定量檢測(cè)，檢測(cè)線性范圍寬，檢出限低。
[0024](4)本專利技術(shù)可以方便地對(duì)藥品樣品中的VB1含量進(jìn)行檢測(cè)。
附圖說明
[0025]圖1是金納米簇的制備示意圖。
[0026]圖2是以單鏈A30
?
ssDNA為模板合成的金納米簇的熒光激發(fā)光譜和發(fā)射光譜圖，表明最大激發(fā)波長為290nm，最大發(fā)射波長為475nm。
[0027]圖3是熒光金納米簇?zé)晒夤庾V圖。
[0028]圖4是金納米簇檢測(cè)VB1反應(yīng)體系的緩沖溶液不同pH值的優(yōu)化圖，緩沖液的pH值分別為：6.0、6.5、7.0、7.5、8.0。
[0029]圖5是金納米簇檢測(cè)VB1反應(yīng)體系加入VB1不同孵育時(shí)間的優(yōu)化圖，孵育時(shí)間分別為：5、10、15、20、25min。
[0030]圖6是金納米簇檢測(cè)溶液中的VB1的線性圖，線性范圍0.01～1μmol/L，檢出限為3nmol/L；其中，A為不同濃度VB1的發(fā)射光譜圖，VB1的濃度分別為：0，0.01，0.03，0.05，0.08，0.25，0.4，0.6，0.8，1，2，4，5μmol/L；B為475nm處熒光強(qiáng)度與VB1濃度的校正曲線圖。
[0031]圖7是金納米簇檢測(cè)溶液中的VB1的特異性分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。
具體實(shí)施方式
[0032]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本專利技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步的闡述，應(yīng)該說明的是，下述說明僅是為了解釋本專利技術(shù)，并不對(duì)其內(nèi)容進(jìn)行限定。
[0033]本專利技術(shù)所用試劑均為分析純，所用試劑及生產(chǎn)廠家如下：維生素、檸檬酸三鈉二水合物、HAuCl4·
3H2O(分析純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；磷酸緩沖液(PB，Phosphate Buffer)用于實(shí)驗(yàn)的全部過程本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
1.一種熒光探針的制備方法，其特征在于，先將DNA溶液、檸檬酸鈉溶液、氯金酸溶液以及超純水混合均勻，得到混合液，加熱孵育，得到熒光金納米簇溶液，即為所述的熒光探針；其中，所述DNA溶液是將單鏈A30
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ssDNA溶于超純水而得，單鏈A30
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ssDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，DNA溶液、檸檬酸鈉溶液、氯金酸溶液、超純水的體積比為5：5：3：37，DNA溶液、檸檬酸鈉溶液、氯金酸溶液的濃度分別為2μmol/L、50mmol/L、1mmol/L。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，加熱孵育的工藝條件為：90℃孵育30分鐘。4.一種熒光探針，其特征在于，是通過權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述制備方法得到的。5.權(quán)利要求4所述一種熒光探針在維生...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：易姿，周金沙，邱志鵬，鐘菲菲，汪輝，楊麗霞，曾希珂，黃小貝，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：長沙市食品藥品檢驗(yàn)所，
類型：發(fā)明
國別省市：