含乳酸菌奶粉中維生素B3的檢測方法技術

本發明專利技術公開了一種含乳酸菌奶粉中維生素B3的檢測方法，該檢測方法包括：樣品預處理得到試樣溶液；調節試樣溶液pH至1.7

【技術實現步驟摘要】
含乳酸菌奶粉中維生素B3的檢測方法


[0001]本專利技術屬于食品檢測
，具體地說，尤其涉及一種含乳酸菌奶粉中維生素B3的檢測方法。

技術介紹

[0002]維生素B3(Niacin)又稱維生素PP、尼克酸，有煙酸(Nicotinic acid)和煙酰胺(Nicotinamide)兩種形式，它們的結構中都存在吡啶環，分別與羧基和甲酰胺基相結合。但通常人們把維生素B3也稱作煙酸，這很容易造成混淆，因此在實際工作中應注意區分。煙酰胺是維生素B3最常用的強化形式，具有與煙酸相同的生理活性。正常情況下該類維生素很穩定。
[0003]維生素B3在食品中廣泛存在，對維持人體皮膚、消化和神經系統正常功能起關鍵作用，對嬰幼兒的生長和發育尤為重要，也是許多類別食品中的重要檢測指標。
[0004]維生素B3的檢測方法主要有比色法、微生物法和高效液相色譜法。GB 5009.89
?
2016《食品安全國家標準食品中煙酸和煙酰胺的測定》中規定了微生物法和高效液相色譜法，其中微生物法檢測的是以煙酸為維生素B3當量的煙酸和煙酰胺的總和，但因操作步驟復雜、精密度差、效率低，應用較為局限；而高效液相色譜法分別檢測煙酸和煙酰胺的含量，再折算成以煙酸表示的維生素B3總量，這種方法操作步驟簡便、精密度高、效率高，通常被實驗室作為首選檢測方法。
[0005]需要檢測維生素B3的食品類別有很多，有些食品既強化了維生素B3，又強化了乳酸菌，比如嬰幼兒配方食品、調制乳粉等。因此針對不同基質的食品在檢測維生素B3的方法也存在一定差異，標準檢測方法可能并不適用。

技術實現思路

[0006]本專利技術的目的在于提供一種含乳酸菌奶粉中維生素B3的檢測方法，以彌補現有技術的不足。
[0007]為達到上述目的，本專利技術是通過以下技術方案實現的：
[0008]一種含乳酸菌奶粉中維生素B3的檢測方法，其特征在于，該檢測方法包括以下步驟：
[0009](1)樣品預處理得到試樣溶液；
[0010](2)調節試樣溶液pH至1.7
±
0.1，靜置后，再將其pH調至4.5
±
0.1，再進行煙酸/煙酰胺的充分提取，得到試樣測定液；
[0011](3)將試樣測定液進行HPLC檢測。
[0012]進一步的，所述步驟(1)中，取混合均勻固體試樣加水混合均勻，再進行超聲波振蕩以充分溶解，靜置并冷卻至室溫，得到試樣溶液。
[0013]更進一步的，所述步驟(1)具體為：稱取混合均勻固體試樣約5.0g，加入25mL45℃～50℃的水混合均勻，稱取混合均勻液體試樣約20.0g于150mL錐形瓶中，置于超聲波振蕩
器中振蕩約10min以上充分溶解，靜置5min～10min，并冷卻至室溫，得到試樣溶液。
[0014]進一步的，所述步驟(2)中，調節試樣溶液pH至1.7
±
0.1，放置后，再調節試樣溶液的pH至4.5
±
0.1，再進行充分提取，冷卻、過濾后，即為試樣測定液。
[0015]更進一步的，所述步驟(2)中，所述步驟(2)具體為：使用5.0mol/L鹽酸溶液和0.1mol/L鹽酸溶液調節樣品溶液pH至1.7
±
0.1，放置約2min后，再用5.0mol/L氫氧化鈉溶液和0.1mol/L氫氧化鈉溶液調節試樣溶液的pH至4.5
±
0.1，置于50℃水浴超聲波振蕩器中振蕩10min以上充分提取，冷卻至室溫后轉至100mL容量瓶中，用水反復沖洗錐形瓶，洗液合并于100mL容量瓶中，用水定容至刻度后混勻，經濾紙過濾；濾液再經0.45μm微孔濾膜加壓過濾，用樣品瓶收集，即為試樣測定液。
[0016]進一步的，所述步驟(3)中：色譜條件：色譜柱：C18色譜柱；柱溫：25℃
±
0.5℃；DAD檢測器：檢測波長為261nm；流動相：甲醇70mL、異丙醇20mL、庚烷磺酸鈉溶液：1g庚烷磺酸鈉，加入910mL水溶解并混勻；用高氯酸調pH至2.1
±
0.1，經0.45μm有機微孔濾膜過濾；流速：1.0mL/min；進樣量：20μL。
[0017]與現有技術相比，本專利技術的優點和有益效果是：
[0018]本專利技術對應用GB 5009.89
?
2016高效液相色譜法檢測含乳酸菌的奶粉中維生素B3含量時，煙酰胺轉化為煙酸的問題進行了研究。本專利技術通過單因素試驗分別考察了試樣測定液靜置時間、溶液酸水解前靜置時間以及酸水解pH值對結果的影響。結果：煙酰胺向煙酸的轉化發生在樣品溶解后、酸水解之前的靜置步驟，但調節pH值至標準規定的1.7進行酸水解以后，轉化作用被完全抑制。結論：如果要檢測含乳酸菌樣品中煙酸或煙酰胺的含量，需要在樣品溶解時立即將pH值調整到1.7，以抑制煙酰胺向煙酸的轉化。
[0019]本專利技術通過具體實驗研究提出了一種含乳酸菌奶粉中維生素B3含量的檢測方法，檢測方法簡單、測定結果精度高，為國標檢測方法提供了補充。
附圖說明
[0020]圖1是試制樣品A與試制樣品B煙酸和煙酰胺檢測色譜圖。
[0021]圖2是煙酰胺酶催化的脫氨基作用示意圖。
[0022]圖3是試制樣品A試樣測定液靜置不同時間后煙酸和煙酰胺檢測色譜圖。
[0023]圖4是試制樣品A溶液靜置不同時間后煙酸和煙酰胺檢測色譜圖。
[0024]圖5是試制樣品A溶液靜置過程中煙酰胺向煙酸的轉化圖。
[0025]圖6是試制樣品A不同酸水解pH值的煙酸和煙酰胺檢測色譜圖。
[0026]圖7是酸溶解試制樣品A的煙酸和煙酰胺檢測檢測色譜圖。
具體實施方式
[0027]下面結合實施例對本專利技術所述的技術方案作進一步地描述說明。
[0028]以下實施例需要的試劑與儀器：
[0029]1、試劑
[0030]煙酸(C6H5NO2)標準品:純度99.5％，德國默克公司；煙酰胺(C6H6N2O)標準品:純度99.6％，德國默克公司；鹽酸(HCl):優級純,國藥集團化學試劑有限公司。氫氧化鈉(NaOH):優級純,國藥集團化學試劑有限公司。高氯酸(HClO4):質量分數為70
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72％,優級純,天津市
科密歐化學試劑有限公司。甲醇(CH3OH):色譜純,德國默克公司。異丙醇(C3H8O):色譜純,德國默克公司。庚烷磺酸鈉(C7H
15
NaO3S):色譜純,J.T.Baker。水為符合GB/T 6682
[14]規定的一級水。
[0031]2、儀器與設備
[0032]高效液相色譜儀：Agilent 1260帶二極管陣列檢測器(即DAD檢測器)。GENESYS 150紫外可見分光光度計：賽默飛世爾科技。MS205DU電子天平：感量0.1mg，梅特勒
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托利多儀器(上海)有限公司。XT5018P
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GP18恒溫水浴：本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種含乳酸菌奶粉中維生素B3的檢測方法，其特征在于，該檢測方法包括以下步驟：（1）樣品預處理得到試樣溶液；（2）調節試樣溶液pH至1.7
±
0.1，靜置后，再將其pH調至4.5
±
0.1，再進行煙酸/煙酰胺的充分提取，得到試樣測定液；（3）將試樣測定液進行HPLC檢測。2.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟（1）中，取混合均勻固體試樣加水混合均勻，再進行超聲波振蕩以充分溶解，靜置并冷卻至室溫，得到試樣溶液。3.如權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟（1）具體為：稱取混合均勻固體試樣，加入45℃~50℃的水混合均勻，稱取混合均勻液體試樣，置于超聲波振蕩器中振蕩約充分溶解，靜置，并冷卻至室溫，得到試樣溶液。4.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟（2）中，調節試樣溶液pH至1.7
±
0.1，放置后，再調節試樣溶液的pH至4.5
±
0.1，再進行充分提取，冷卻、過濾后，即為試樣測定液。5.如權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張鳳艷，姜勇，袁煥君，張豪，張磊，趙丹，楊姍姍，英瑜，
申請(專利權)人：青島市食品藥品檢驗研究院青島市藥品不良反應監測中心，青島市實驗動物和動物實驗中心，
類型：發明
國別省市：