高產糖的黑醋酸菌的篩選方法技術

本發明專利技術屬于黑醋酸菌生產技術領域，具體涉及高產糖的黑醋酸菌的篩選方法。本發明專利技術所述篩選方法，是對黑醋酸菌進行離子注入，其中，離子注入的瞬時光通量為10~15，離子注入的離子總量為2000~4000；離子注入過程中，真空度5.0E

【技術實現步驟摘要】
高產糖的黑醋酸菌的篩選方法


[0001]本專利技術屬于黑醋酸菌生產
，具體涉及高產糖的黑醋酸菌的篩選方法。

技術介紹

[0002]黑醋酸菌，醋酸單胞菌屬，是橢圓形短桿菌，有鞭毛，不生芽孢，為好氣性氧化型細菌，革蘭氏染色陰性，液體表面培養，可以形成菌膜二攀附與瓶壁上，振搖即可破碎，適用于偏酸性條件下生長，能將葡萄糖、酒精氧化成酸，將山梨醇氧化為山梨糖。利用黑醋酸菌的這一特性，應用于工業生產一步發酵過程中，將山梨醇氧化為山梨糖。
[0003]因此生產上要求黑醋酸菌具備較高的產糖效率，通常會對黑醋酸菌進行篩選，得到高產糖的菌種，通常是通過重復多次篩選，使用含有碳酸鈣的選擇培養基，利用黑醋酸菌的融鈣性質，對黑醋酸菌進行篩選，但該篩選方法效率低，一方面，重復多次篩選的用時較長，另一方面，使用選擇培養基篩選需依靠人為主觀評價融鈣圈特征，進行選擇，多次篩選則必然導致主觀因素過多，影響最終的篩選結果，無法得到最佳產糖效率的菌種，并且不同時間篩選的菌種產糖效率不穩定。

技術實現思路

[0004]為了解決上述技術問題，本專利技術提供了高產糖的黑醋酸菌的篩選方法，對黑醋酸菌進行離子注入，縮短了菌種篩選的時間，得到高產糖的黑醋酸菌。
[0005]本專利技術通過以下技術方案實現：本專利技術所述的高產糖的黑醋酸菌篩選方法，是對黑醋酸菌進行離子注入。
[0006]離子注入的瞬時光通量為10~15，優選15。
[0007]離子注入的離子總量為2000~4000，優選4000。
[0008]離子注入過程中，真空度5.0E
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2~9.0E
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3，燈絲電流15~30A、燈絲電壓15~25V，磁場電流3~5A，陽極電壓130~150V，陽極電流2~5A；優選，真空度1.0E
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2，燈絲電流30A，燈絲電壓17V，磁場電流4~5A。
[0009]所述高產糖的黑醋酸菌的篩選方法，具體包括以下步驟：（1）將原菌種進行擴大培養，得到菌液；（2）將菌液用無菌水稀釋后得到菌懸液，將菌懸液涂布于平板培養基上，形成菌膜；（3）將平板培養基置于離子注入機中，進行離子注入；（4）離子注入結束后，使用無菌水將菌膜洗脫，涂布于分離培養基進行培養，菌落周圍形成融鈣圈；（5）根據菌落和融鈣圈的形態進行篩選，得到所述高產糖的黑醋酸菌。
[0010]步驟（2）中，稀釋菌液采用梯度稀釋1000倍，三次稀釋，每次稀釋十倍。
[0011]步驟（3）中，離子注入參數設置原則，先確定瞬時光通量與離子總量，由于一次離子注入操作過程中，鎢合金燈絲通電后，通過陽極電壓產生熱量，經過磁場給予其初速度，
通過加速由內孔將電離的離子注入至小靶室，但是，隨著燈絲溫度的變化，電阻發生變化，所需能量也隨之變化，所以需要調整其他參數來保證瞬時光通量的穩定，因此，瞬時光通量的穩定是通過在離子注入過程中動態調整其他參數來維持的，其他參數為燈絲電流、燈絲電壓、磁場電流、陽極電壓、陽極電流；通常維持燈絲電流和燈絲電壓不變，調整磁場電流、陽極電壓和陽極電流。
[0012]步驟（4）中，分離培養基的組成成分為山梨醇10%、酵母膏0.7%、碳酸鈣1%、瓊脂2.5%，其余為水，pH為5.2~5.4。
[0013]步驟（5）中，篩選原則是：融鈣圈清晰、規則、大，菌體飽滿、規則、有光澤度；得到所述高產糖的黑醋酸菌后，可對其進行擴大培養，保藏或用于生產。
[0014]與現有技術相比，本專利技術具有以下有益效果：1.本專利技術通過對于黑醋酸菌進行離子注入，縮短了菌種篩選的時間。本專利技術方法僅包括擴大培養、離子注入、分離培養三部分即可得到高產糖的黑醋酸菌，相較于傳統的篩選方法，不需要多次重復的篩選過程，極大縮短了篩選時間。
[0015]2.本專利技術限定了最佳的瞬時光通量，可有效剔除活性較差的菌體，最大程度的篩選得到活性強的菌體，同時，限定了最佳的離子總量，隨著對離子總量的計量不斷增多，留存的菌體活性增強，也不會因離子過量對菌體造成損傷，從而得到高產糖的黑醋酸菌。
[0016]3.本專利技術通過控制離子注入的參數設置，減少了人為因素的干擾，因此，不同時間篩選的菌種產糖效率較為穩定。
[0017]4.本專利技術方法篩選高產糖的黑醋酸菌，黑醋酸菌未發生基因突變、形態變異等情況，可針對黑醋酸菌進行定期的菌種鑒定，保證黑醋酸菌的遺傳穩定性。
附圖說明
[0018]圖1、離子注入光束的現場圖；圖2、黑醋酸菌離子注入后的分離培養基。
具體實施方式
[0019]下面結合實施例對本專利技術作進一步描述。實施例中用到的所有原料除特殊說明外，均為市購。
[0020]實施例1本專利技術所述高產糖的黑醋酸菌的篩選方法，包括以下步驟：1、將原菌種進行擴大培養，得到菌液；S1、取原菌種斜面，用接種環挑取少量菌苔，以劃線法接入平板培養基上，32℃恒溫培養48小時；平板培養基是由10%山梨醇、0.7%酵母膏、1%碳酸鈣、2.5%瓊脂加水配制為pH為5.2的固體培養基；S2、用接種環從平板培養基上取一環菌苔，接入液體培養基內，32℃搖床培養20h，檢測得到山梨糖含量達到131mg/mL；液體培養基的配制方法：18%山梨醇、0.5%酵母膏、0.5%碳酸鈣加水，用冰醋酸調節pH至5.2，每個三角瓶裝液150mL，121℃消毒滅菌。
[0021]2、將菌液用無菌水稀釋后得到菌懸液，將菌懸液涂布于平板培養基上，形成菌膜；S1、取3只裝有9mL無菌水的試管，吸取1mL菌液加入第一只無菌水試管內，震蕩均
勻后，吸取1mL加入第二只無菌試管內，震蕩均勻，重復操作吸取1mL加入第三只無菌試管內，震蕩均勻，即可完成稀釋；S2、取第三只無菌試管內0.1mL菌懸液，涂布于平板培養基上，形成菌膜；3、將平板培養基置于離子注入機中，進行離子注入，如圖1；S1、將形成菌膜的平板培養基放入靶室，去除培養皿蓋，對靶室進行抽真空至真空度為1.0E
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2；打開隔板，進行離子注入；S2、離子注入機調節瞬時光通量穩定在15，設置燈絲電流30A、燈絲電壓17V，人工動態調整磁場電流4~5A，陽極電壓130~150V，陽極電流2~5A。
[0022]S3、觀察離子注入機離子總量的計量，當達到4000時，停止離子注入。
[0023]4、離子注入結束后，使用1mL無菌水將菌膜洗脫，均勻涂布于分離培養基進行培養，32℃培養48小時，培養基長出菌落，且菌落周圍形成融鈣圈；分離培養基的制備同步驟1所述平板培養基。
[0024]5、根據菌落和融鈣圈的形態進行篩選，得到所述高產糖的黑醋酸菌；篩選原則是：融鈣圈清晰、規則、大，菌體飽滿、規則、有光澤度，如圖2；得到所述高產糖的黑醋酸菌后，進行步驟1中S2操作，進行培養，檢測得到山梨糖含量達到154mg/mL。
[0025]實施例2本專利技術所述高產糖的黑醋酸菌的篩選方法，具體步驟參考實施例1，不同的是離子注入參數：瞬時光通量13，離子總量4000，真空度為1.0E...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種高產糖的黑醋酸菌篩選方法，其特征在于：所述方法是對黑醋酸菌進行離子注入。2.根據權利要求1所述的黑醋酸菌篩選方法，其特征在于：離子注入的瞬時光通量為10~15。3.根據權利要求2所述的黑醋酸菌篩選方法，其特征在于：離子注入的離子總量為2000~4000。4.根據權利要求3所述的黑醋酸菌篩選方法，其特征在于：離子注入過程中，真空度5.0E
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2~9.0E
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3，燈絲電流15~30A、燈絲電壓15~25V，磁場電流3~5A，陽極電壓130~150V，陽極電流2~5A。5.根據權利要求4所述的黑醋酸菌篩選方法，其特征在于：所述高產糖的黑醋酸菌的篩選方法，具體包括以下步驟：（1）將原菌種進行擴大培養，得到菌液；（2）將菌液用...

【專利技術屬性】
技術研發人員：馮帥，馮根玲，馮春曉，
申請(專利權)人：魯維制藥集團有限公司，
類型：發明
國別省市：