健腦補腎制劑的含量測定方法技術

本發明專利技術提供了一種健腦補腎制劑的含量測定方法，包括：供試品加入甲醇和乙酸的混合溶液１０－５０ｍｌ進行前處理得到供試品溶液；制備對照品溶液；采用ＨＰＬＣ進行測定；按照外標方法進行計算，即得該健腦補腎制劑中甘草酸的含量；該方法準確、便捷。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術提供一種中藥制劑的含量測定方法，尤其是健腦補腎制劑的含量 測定方法。
技術介紹
目前臨床應用的健腦補腎中成藥的劑型主要以口服液或者傳統丸劑的形式提供藥用。己有的健腦補腎口服液(健腦補腎口服液為中藥成方制劑第16冊收 載，標準號WS3-B-2209-96)的質量標準中只是對人參藥材進行了簡單的鑒別， 這種鑒別也只是簡單的定性制劑中是否含有人參，而含量多少則無法確定，除 此以外，沒有對任何成分進行含量和限度測定。健腦補腎制劑成分復雜，多達25味不同藥材，有很多成分從本領域技術人 員公知的常識角度是可以檢測的，例如，乙醇回流提取的5味藥材中的人參可 以采用比色法、薄層掃描法、高效液相色譜法法、GLC法測定人參皂苷或人參 皂苷元的含量；鹿茸可以采用紫外分光光度法測定鹿茸酸性多糖的含量，或者 采用高效液相色譜法測定堿基的含量；肉桂可以采用容量法及高效液相色譜法 測定其中的桂皮醛及肉桂酸的含量；砂仁采用氣相色譜法測定揮發性成分的含 量，或者重量法測定揮發油的含量等等。針對水提的20味藥材的提取物，理論上可以檢測的包括牛蒡子，采用用高 效液相色譜法或者TLCS法測定牛蒡甙及甙元含量；金銀花采用高效液相色譜 法測定綠原酸、咖啡酸含量；連翹采用高效液相色譜法測定連翹甙和連翹脂素， 或者薄層掃描法測定齊墩果酸以及熊果酸；酸棗仁采用薄層層析法測定白樺脂酸的含量，或者采用紫外分光光度法測定酸棗皂甙的含量；當歸采用高效液相 色譜法測定阿魏酸的含量；茯苓采用高效液相色譜法測定去氫茯苓多糖的含量， 或者比色法測定茯苳多糖的含量；白芍采用高效液相色譜法測定芍藥苷含量；白術采用gc法測定蒼術酮、高效液相色譜法測定蒼術醇苷m、 gc—ms法測定蒼術酮、脫水羥基蒼術內酯、蒼術內酯、羥基蒼術內酯等等。這些雖然都是本領域技術人員公知或者從現有文獻中可以査閱到的，但是 在實際應用中確完全不同，并不是簡單的理論套用就可以輕而易舉的實現。有 些根本不用實驗，采用現有的理論推理計算即可以被輕而易舉的否定，例如川 牛膝藥材中齊墩果酸、熊果酸，健腦補腎制劑中的川牛膝采用的水提取工藝， 而齊墩果酸和熊果酸均為脂溶性物質，水溶液中溶解度很低，在水提工藝中， 其轉移率不足10%左右，再加上川牛膝藥材中齊墩果酸和熊果酸本身含量就偏 低，只有不足0.1%，所以在健腦補腎制劑成品中含量極低幾乎無法有效檢測。 還有如連翹藥材中連翹苷，在健腦補腎制劑中連翹藥材所占處方量很小，藥材 轉移率即使按照100%折算，根據藥典的方法，其取樣量需要7g，這么大的取樣 量，在實際操作中很難實現，因此測定該成分根本沒有實際意義。靳維榮、高國敬等人在2006年02期《時珍國醫國藥 >>中曾發表過采用高 效液相色譜(HPLC)法測定健腦補腎丸中綠原酸含量的方法，用以控制健腦補腎 丸的質量；本專利技術人重現了該方法，具體如下 測定方法采用高效液相色譜法色譜條件色譜柱C18柱；檢測波長327nm;流動相乙腈-0.4%磷酸(13:87)。對照品以及溶液的制備綠原酸購買自由中國藥品生物制品檢定所，純度 為供含量測定用；取綠原酸對照品適量，用50%甲醇制成適當濃度對照品溶液。供試品制備方法稱取健腦補腎制劑適量，精密加入50y。甲醇50ml，稱重， 超聲處理30分鐘，稱重，用50%甲醇補足損失的量，過濾，進樣測定。結果綠原酸出峰時間較靠前，沒有達到完全基線分離。調整流動相比例為乙腈-0.4%磷酸(10:90)，仍然沒有改變出峰時間。本領域技術人員公知用于含量測定的色譜峰如果出峰時間過早，勢必會 造成其與溶劑峰重合從而無法準確量取色譜峰的峰面積，直接導致含量測定結果不準確；雖然文獻中聲明該方法簡便，快速準確，靈敏度高，適用于健腦補 腎丸的質量控制，但是本專利技術人在具體實施上述文獻內容中發現色譜圖中綠 原酸跟其他雜峰雖然到達了分離，但綠原酸峰拖尾嚴重無法實現自動積分，根 本不適用于含量測定，即使是對流動相進行很大的調整也無法改善脫尾，這也 從另一方面反應了該色譜條件的不成熟。另外，實驗中還發現，綠原酸對照品 溶液在室溫下1小時以后就開始分解導致含量下降明顯，3小時后幾乎下降50 %，即使是采用棕色瓶低溫放置也很難避免對照品溶液的分解。由于測定中藥 成分的色譜圖保留時間相對較長，所以一般檢測時間都很長，這種不穩定極不 利于含量測定的準確性，實際操作性差。人參作為健腦補腎制劑中的君藥，是該制劑進行含量控制的首選；本專利技術 人在實驗中也試圖對健腦補腎中的人參進行含量測定，并作了如下工作測定方法采用高效液相色譜法色譜條件色譜柱C18柱(150x4.6 mm， 5[xm);檢測波長選擇203nm 作為檢測波長；流動相乙腈一0.1%磷酸(19 : 400)。對照品以及溶液的制備人參皂苷Rgl購買自由中國藥品生物制品檢定所， 純度為供含量測定用；取人參皂苷Rgl對照品適量，用甲醇制成適當濃度的對 照品溶液，供試品溶液的制備稱取健腦補腎制劑內容物適量，研細，加甲醇適量，用索氏提取器回流提 取，提取液蒸干，殘渣用20ml甲醇溶解，轉移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇 提取數次，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次10ml，棄去氨試液， 正丁醇液水浴蒸干，殘渣作為供試品準備物；實驗方法l、將上述供試品準備物用3ml水溶解，通過大孔吸附樹脂柱上，用水100ml沖洗，棄去水液，再用30。/。乙醇40ml沖洗，棄去30%乙醇洗脫液， 繼用70%乙醇70ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇溶解，定容至5ml， 過0.45um微孔濾膜，20ul進樣，結果人參皂苷Rgl跟其他雜峰得不到有效分離。實驗方法2、將上述供試品準備物用70%乙醇少量溶解，加在中性氧化鋁-大孔吸附樹脂柱(上層中性氧化鋁為填料，下層為大孔吸附樹脂填料)上，用 70W乙醇70ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇溶解，并定容至5ml，過 0.45um微孔濾膜，吸20ul進樣，結果人參皂苷跟其他雜峰也得不到有效分離。從上述實驗的結果可以知道，采用普通的單泵的高效液相色譜儀器很難實 現對人參皂苷Rgl與其他成分的有效分離， 一般要求采用帶有雙泵或者四元泵 的儀器，通過梯度洗脫才能實現其與其他成分的有效分離，即使這樣也無法準 確測定它的真實含量，分析原因人參皂苷Rgl紫外吸收在末端，響應值低，檢 測靈敏度極低，數據不準確。本專利技術人還對其他藥材含有的測定成分進行了含量測定方法學考察，都或 多或少的存在問題，例如，肉桂藥材中含有桂皮醛和肉桂酸2種可以測定的成 分，但是由于肉桂酸的含量偏低，即使是質量上好的肉桂藥材中，其肉桂酸的 含量也不高于0.1%，通過制劑的各種提取手段后發現，其在制劑成品中含量極 低幾乎無法有效檢測；桂皮醛的色譜峰雖然與其他雜峰分離較好，但是由于采 用乙酸乙酯提取而無法直接進樣(對色譜柱損害過大)，需要揮干乙酸乙酯；在 實驗中發現，如果采用水浴揮干，在水浴蒸干過程中發現桂皮醛損失很大，如 果采用低溫揮干，需要時間至少12小時，而且也有損失，這種需要長時間操作 的檢測方法，不但不利于生產過程中的質量控制，測定的準確性也很差。本發 明人曾試圖采用其他溶劑提取(如乙醇、甲醇等)，但是發現雜質干擾大，都無 法實現準確定量的測定。山藥藥本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種健腦補腎制劑的含量測定方法，其為測定該健腦補腎制劑中的甘草酸的含量，該含量測定方法包括：　（１）供試品的前處理，包括取健腦補腎制劑，取健腦補腎制劑的量折合含有中藥甘草的生藥材約為０．１７ｇ－０．３４ｇ，加入甲醇和乙酸的混合溶液１０ －５０ｍｌ處理至少１０分鐘，濾過，得到供試品溶液；　（２）對照品溶液的制備，稱取對照品，加流動相溶解并稀釋，該對照品濃度以甘草酸計算為０．００２－５ｍｇ／ｍｌ，即得，所述對照品選自甘草酸銨、甘草酸單銨、甘草酸雙銨或甘草苷；所述的流動相 為選自甲醇或乙腈的酸溶液；　（３）采用ＨＰＬＣ進行測定，該ＨＰＬＣ的色譜條件包括，流動相為甲醇或乙腈的酸溶液；填充劑選自十八烷基硅烷鍵合硅膠、辛烷基硅烷鍵合硅膠、苯基硅烷鍵合硅膠；檢測波長為２２０－４５０ｎｍ；　（４）吸取對照品 溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀測定，按照外標方法進行計算，即得甘草酸的含量。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：姚俊華，
申請(專利權)人：姚俊華，
類型：發明
國別省市：32[中國|江蘇]