絨山羊４Ｅ－ＢＰ１基因ｃＤＮＡ編碼區核苷酸序列制造技術

本發明專利技術涉及從體外培養的絨山羊胎兒成纖維細胞分離的編碼４Ｅ－ＢＰ１蛋白的ｃＤＮＡ的核苷酸序列和與它對應的氨基酸序列。本發明專利技術通過比對已知的牛、馬、人、小鼠、黑猩猩、豬的４Ｅ－ＢＰ１基因ｃＤＮＡ的核苷酸序列，找到保守區，然后根據牛４Ｅ－ＢＰ１基因ｃＤＮＡ序列（ＧｅｎＢａｎｋ登錄號ＮＭ＿００１０７７８９３），在不打亂氨基酸編碼序列的前提下設計出了一對用于ＲＴ－ＰＣＲ擴增絨山羊４Ｅ－ＢＰ１基因ｃＤＮＡ編碼區片段的簡并引物并用這對引物通過ＲＴ－ＰＣＲ方法擴增出了特異性片段，測序后得到了絨山羊４Ｅ－ＢＰ１基因ｃＤＮＡ的編碼區的２３２ｂｐ的核苷酸序列和與它的前２３１ｂｐ核苷酸序列對應的氨基酸序列。獲得的這２３２ｂｐ的核苷酸序列可進一步用于絨山羊４Ｅ－ＢＰ１基因全長ｃＤＮＡ的克隆及用于通過ＲＴ－ＰＣＲ或雜交的方法檢測４Ｅ－ＢＰ１基因的組織表達特異性，也可用于重組表達得到蛋白后制備檢測４Ｅ－ＢＰ１的抗體。

【技術實現步驟摘要】

【技術保護點】
本專利技術涉及一段從體外培養的絨山羊胎兒成纖維細胞分離的編碼４Ｅ－ＢＰ１蛋白的ｃＤＮＡ，更具體地說涉及編碼４Ｅ－ＢＰ１蛋白質的ｃＤＮＡ編碼區核苷酸序列和與它對應的氨基酸序列。目前應用ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆基因并獲得相應的核苷酸序列是獲得基因（ｃＤＮＡ）核苷酸序列的常用方法。本項專利技術設計了一對引物并應用這對引物通過ＲＴ－ＰＣＲ方法擴增出了絨山羊４Ｅ－ＢＰ１基因ｃＤＮＡ的編碼區特異性片段，經過測序后得到這一片段的２３２ｂｐ的核苷酸序列，其特征是在還沒有絨山羊４Ｅ－ＢＰ１基因核苷酸序列的情況下，通過比較已知的牛、馬、人、小鼠、黑猩猩、豬的４Ｅ－ＢＰ１基因的核苷酸序列，找到保守區，然后根據牛４Ｅ－ＢＰ１基因ｃＤＮＡ序列（ＮＭ＿００１０７７８９３），在不打亂氨基酸編碼序列的前提下設計ＰＣＲ簡并引物，進而通過ＲＴ－ＰＣＲ方法擴增出了絨山羊４Ｅ－ＢＰ１基因ｃＤＮＡ的編碼區片段，測序后得到了２３２ｂｐ的核苷酸序列和與它的前２３１ｂｐ的核苷酸序列對應的氨基酸序列，這一絨山羊４Ｅ－ＢＰ１基因ｃＤＮＡ編碼區片段的核苷酸序列和與它的前２３１ｂｐ的核苷酸序列對應的氨基酸序列在國內外是首次獲得。　　基于上述說明的本專利技術的技術特征，本專利技術的獨立權利要求表述為：一種自絨山羊分離的多核苷酸序列和與它對應的氨基酸序列，是下列序列之一：１）序列表中ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１的ｃＤＮＡ序列；２）與序列表中ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１的ｃＤＮＡ序列的前２３１ｂｐ的核苷酸序列對應的標注為ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２的氨基酸序列。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：王志鋼，劉東軍，旭日干，
申請(專利權)人：王志鋼，劉東軍，旭日干，
類型：發明
國別省市：15[中國|內蒙]