一種長鏈非編碼RNAPGM5-AS1及檢測方法和應用技術

本發明專利技術屬于分子生物學技術領域，公開了一種長鏈非編碼RNAPGM5

【技術實現步驟摘要】
一種長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1及檢測方法和應用


[0001]本專利技術屬于分子生物學
，尤其是一種長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1(LncRNA PGM5
?
AS1)及檢測方法和用于膀胱癌診斷分子標志物的用途。

技術介紹

[0002]膀胱癌，也稱為泌尿系統腫瘤，是全球第九大常見癌癥，且發病率呈穩步上升趨勢。90％的膀胱癌癥病例據報道是由膀胱中的尿路上皮細胞失控增殖引起的。雖然當前在膀胱癌預防、早期診斷和治療方面有許多突破，但全世界膀胱癌癥死亡率仍在全球癌癥死亡中占極大比例。因此，確定盡早發現膀胱癌風險因素并識別預防和診斷顯得極為迫切。另外，目前臨床上，膀胱癌的檢測仍缺乏高靈敏度和高特異性的早期診斷指標。
[0003]據報道，長度超過200個核苷酸的長非編碼RNA(lncRNA)參與了多種癌癥的進展，盡管它們不能編碼蛋白質，lncRNAs可以通過剪接調控、表觀遺傳沉默或海綿狀miRNAs來調節基因表達。在膀胱癌中發現lncRNA SNHG18可抑制膀胱癌細胞的生長和侵襲，并與膀胱癌的不良預后密切相關。Hu等人證明lncRNA LNPPS在膀胱癌中下調并通過PDCD5/p53依賴的信號通路調節細胞凋亡。lncRNAPGM5
?
AS1(PGM5反義RNA 1)是lncRNA家族的一員，已被證明是多種癌癥的腫瘤促進劑，如膀胱、宮頸和乳腺癌癥。

技術實現思路

[0004]本專利技術的目的在于克服現有技術中的不足之處，提供一種長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1及檢測方法和用于膀胱癌診斷分子標志物的用途。
[0005]本專利技術解決其技術問題所采用的技術方案是：
[0006]一種長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1，所述長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1的核酸序列如SEQ ID No.1所示，該長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1為膀胱癌相關差異表達基因，且能夠作為膀胱癌診斷標志物。
[0007]進一步地，所述長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1在膀胱癌中與在健康組織中的表達水平差異在20倍以上，p<0.0001。
[0008]如上所述的長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1在作為和/或制備膀胱癌診斷標志物中的應用。
[0009]一種檢測膀胱癌組織中如上所述的長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1表達水平的檢測方法，所述檢測方法為熒光定量聚合酶鏈式反應qRT
?
PCR，該檢測方法所需材料包括：
[0010]1)用于擴增LncRNA PGM5
?
AS1的特異性引物對；
[0011]2)標準DNA模板；
[0012]3)PCR反應液。
[0013]LncRNA PGM5
?
AS1的檢測方法為熒光定量PCR法。
[0014]進一步地，所述擴增LncRNA PGM5
?
AS1的特異性引物對包括上游引物和下游引物，其
[0015]中上游引物序列為SEQ ID No.2(5
′?
GACTATGTTGTGAGCCTGCG
?3′
)，下游引物序列為SEQ ID No.3(5
′?
AAAAGGGGAGGGGCAATACA
?3′
)。
[0016]進一步地，所述熒光定量聚合酶鏈式反應qRT
?
PCR的熒光定量體系為20μl：
[0017]2×
SYBR GREEN Mix 10μl，上游引物0.5μl，下游引物0.5μl，cDNA 2μl，ddH 2O 7μl；PCR循環為：50℃2min，95℃2min，95℃30sec，58℃30sec，72℃30sec，循環數為40。
[0018]一種膀胱癌組織中如上所述的長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1表達水平的檢測試劑盒，所述檢測試劑盒包括：
[0019]1)用于擴增LncRNA PGM5
?
AS1的特異性引物對；
[0020]2)標準DNA模板；
[0021]3)PCR反應液。
[0022]進一步地，所述擴增LncRNA PGM5
?
AS1的特異性引物對包括上游引物和下游引物，其
[0023]中上游引物序列為SEQ ID No.2(5
′?
GACTATGTTGTGAGCCTGCG
?3′
)，下游引物序列為SEQ ID No.3(5
′?
AAAAGGGGAGGGGCAATACA
?3′
)。
[0024]進一步地，所述檢測試劑盒包括：
[0025]2×
SYBR GREEN Mix 10μl，上游引物0.5μl，下游引物0.5μl，cDNA2μl，ddH2O補足到20μl；PCR循環為：50℃2min，95℃2min，95℃30sec，58℃30sec，72℃30sec，循環數為40。
[0026]本專利技術取得的優點和積極效果為：
[0027]1、本專利技術長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1可用作膀胱癌診斷分子標記物，達到膀胱癌早診斷、早治療的用途。長鏈非編碼RNA調控機制是腫瘤發病機理研究中的一個新領域，LncRNA PGM5
?
AS1在膀胱癌組織和健康組織中均有表達，且在癌組織中的表達水平均顯著低于健康組織，差異具有統計學意義，提示LncRNA PGM5
?
AS1作為膀胱癌診斷分子標志物的可行性及臨床應用價值。LncRNAPGM5
?
AS1在膀胱癌中的檢測結果如下：膀胱癌中，差異在20倍以上，p<0.0001。
[0028]2、本專利技術針對目前臨床上，膀胱癌的檢測仍缺乏高靈敏度和高特異性的早期診斷指標，由此提供了LncRNA PGM5
?
AS1用于作為膀胱癌診斷標志物的用途。前期研究中，專利申請人采用全基因組表達譜芯片篩選技術發現了大量的膀胱癌相關差異表達基因，經PCR方法檢測發現，與癌旁組織比較，所有膀胱癌組織中LncRNA PGM5
?
AS1表達水平顯著增高。
[0029]3、本專利技術運用PCR法進行LncRNAPGM5
?
AS1不需要增加其他的試劑，通用市面上常用的試劑盒，可直接用于PCR實驗室檢測，可有效地降低使用成本。
附圖說明
[0030]圖1為本專利技術中長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1在膀胱癌組織及健康人組織中的表達水平比較圖。
具體實施方式
[0031]下面結合實施例，對本專利技術進一步說明，下屬實施例是敘本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1，其特征在于：所述長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1的核酸序列如SEQ ID No.1所示，該長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1為膀胱癌相關差異表達基因，且能夠作為膀胱癌診斷標志物。2.根據權利要求1或2所述的長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1，其特征在于：所述長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1在膀胱癌中與在健康組織中的表達水平差異在20倍以上，p<0.0001。3.如權利要求1所述的長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1在作為和/或制備膀胱癌診斷標志物中的應用。4.一種檢測膀胱癌組織中如權利要求1或2所述的長鏈非編碼RNA PGM5
?
AS1表達水平的檢測方法，其特征在于：所述檢測方法為熒光定量聚合酶鏈式反應qRT
?
PCR，該檢測方法所需材料包括：1)用于擴增LncRNA PGM5
?
AS1的特異性引物對；2)標準DNA模板；3)PCR反應液；LncRNA PGM5
?
AS1的檢測方法為熒光定量PCR法。5.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征在于：所述擴增LncRNA PGM5
?
AS1的特異性引物對包括上游引物和下游引物，其中上游引物序列為SEQ ID ...

【專利技術屬性】
技術研發人員：胡良昌，賈正虎，武曉麗，馬駿，孫倩，
申請(專利權)人：天津尤金生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：