本發(fā)明專利技術(shù)公開了RACK1在膽管癌預(yù)后及轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)和治療中的應(yīng)用。本發(fā)明專利技術(shù)通過(guò)檢測(cè)膽管癌和癌旁RACK1蛋白的表達(dá),隨訪患者預(yù)后,判斷出膽管癌對(duì)患者預(yù)后及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響。通過(guò)體外功能實(shí)驗(yàn)研究了RACK1在膽管癌增殖和轉(zhuǎn)移中的生物學(xué)功能;隨后,通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)一步驗(yàn)證上述現(xiàn)象;機(jī)制研究表明,RACK1通過(guò)EMT途徑調(diào)控膽管癌的生物學(xué)行為。因此,本發(fā)明專利技術(shù)驗(yàn)證了RACK1在膽管癌的侵襲轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用,是調(diào)控膽管癌細(xì)胞遷移侵襲的重要調(diào)節(jié)因子,有望成為膽管癌預(yù)后與轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)及治療的潛在分子靶點(diǎn),RACK1作為膽管癌預(yù)后及轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)和治療靶標(biāo)具有良好的臨床應(yīng)用前景。的臨床應(yīng)用前景。的臨床應(yīng)用前景。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
RACK1在膽管癌預(yù)后及轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)和治療中的應(yīng)用
[0001]本專利技術(shù)涉及RACK1在膽管癌預(yù)后及轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)和治療中的應(yīng)用,屬于生物醫(yī)藥
技術(shù)介紹
[0002]膽管腫瘤是一種惡性程度極高的腫瘤,在近幾十年內(nèi)發(fā)病率和死亡率不斷上升。膽管腫瘤早期癥狀隱匿,易出現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,僅不足三分之一的初診患者具有手術(shù)指征,同時(shí)腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是患者術(shù)后死亡的主要原因。相對(duì)于胃腸道其它腫瘤近10年來(lái)取得的進(jìn)展,膽管腫瘤尚未取得令人滿意的效果,復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍然缺乏有效的治療方法。因此,迫切需要進(jìn)一步研究膽管癌的發(fā)病機(jī)制以及與腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移有關(guān)的分子機(jī)制。
[0003]活化蛋白激酶C受體1(Receptor for activated C
?
kinase 1,RACK1)作為細(xì)胞內(nèi)具有多種功能的構(gòu)架蛋白,可調(diào)控多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程。腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移是一個(gè)發(fā)展的過(guò)程,如細(xì)胞極性改變、失去正常的細(xì)胞間連接、粘附和侵襲等。RACK1是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的必要蛋白,是核細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)中樞,錨定在特定亞細(xì)胞位置,并在調(diào)節(jié)蛋白生物活性方面起著重要作用。
[0004]上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial
?
mesenchymal transition,EMT)使腫瘤細(xì)胞失去上皮特征,表現(xiàn)出間質(zhì)表型,獲得較高的侵襲與轉(zhuǎn)移、降解細(xì)胞外基質(zhì)的能力。多項(xiàng)研究表明,RACK1可以通過(guò)增強(qiáng)EMT促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。但是,目前RACK1在膽道腫瘤中的作用尚不清楚。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
[0005]本專利技術(shù)的目的是:為了解決目前針對(duì)膽道腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍然缺乏有效的預(yù)測(cè)和治療手段的技術(shù)問(wèn)題,本專利技術(shù)提供RACK1在膽管癌預(yù)后及轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)和治療中的應(yīng)用。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)上述目的,本專利技術(shù)所采取的技術(shù)方案是提供RACK1作為靶點(diǎn)在制備膽管癌預(yù)后及轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)試劑或試劑盒中的應(yīng)用。
[0007]優(yōu)選地,所述試劑或試劑盒至少包括通過(guò)RT
?
qPCR檢測(cè)RACK1基因表達(dá)量的試劑,和/或通過(guò)免疫組化檢測(cè)RACK1蛋白表達(dá)量的試劑,和/或通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè)RACK1蛋白表達(dá)量的試劑。
[0008]本專利技術(shù)還提供了促進(jìn)RACK1基因或蛋白表達(dá)的試劑在制備治療膽管癌的藥物中的應(yīng)用。
[0009]優(yōu)選地,所述藥物的有效成分為促進(jìn)RACK1基因或蛋白表達(dá)的試劑。
[0010]與現(xiàn)有技術(shù)相比,本專利技術(shù)的有益效果在于:
[0011]本專利技術(shù)首次發(fā)現(xiàn)在膽管癌中,RACK1表達(dá)與患者預(yù)后及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),是一種預(yù)測(cè)靶點(diǎn),同時(shí)首次證實(shí)RACK1通過(guò)EMT途徑調(diào)控膽管癌的侵襲轉(zhuǎn)移;該基因的應(yīng)用為膽管癌提供一種新的預(yù)測(cè)和治療靶點(diǎn),為后續(xù)抗膽管癌藥物的開發(fā)和分子機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ),具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
附圖說(shuō)明
[0012]圖1展示了RACK1在膽管癌中高表達(dá)且RACK1高表達(dá)與膽管癌良好預(yù)后密切相關(guān);其中,A為2例人膽管癌腫瘤組織與鄰近正常組織間RACK1差異表達(dá)的典型圖;B為使用組合表達(dá)評(píng)分系統(tǒng)來(lái)評(píng)估膽管癌組織中RACK1的免疫組化染色強(qiáng)度,兩組間表達(dá)差異的堆積圖;RACK1在腫瘤組織及配對(duì)的相鄰正常組織表達(dá)組成差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;C為使用組合表達(dá)評(píng)分系統(tǒng)來(lái)評(píng)估膽管癌組織中RACK1的免疫組化染色強(qiáng)度,RACK1在腫瘤組織中的表達(dá)高于配對(duì)的相鄰正常組織;D為生存曲線提示高表達(dá)RACK1的患者預(yù)后高于低表達(dá)組;E為免疫組化組合表達(dá)評(píng)分系統(tǒng)中RACK1不同表達(dá)的典型圖片;
[0013]圖2展示了RACK1表達(dá)與膽管癌腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化密切相關(guān);其中,A為伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組RACK1組合表達(dá)評(píng)分低于非轉(zhuǎn)移組;B為RACK1高表達(dá)組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率低于低表達(dá)組;C為免疫組化方法證實(shí)分化級(jí)別越高,RACK1表達(dá)越高;D為GSE76311中膽管癌腫瘤組織中RACK1轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)高于癌旁組織;E為GSE107943中膽管癌腫瘤組織中RACK1轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)高于癌旁組織;F為TCGA中膽管癌腫瘤組織中RACK1轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)高于癌旁組織;G為TCGA中伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的膽管癌中RACK1轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)低于無(wú)轉(zhuǎn)移組;
[0014]圖3展示了RACK1通過(guò)EMT參與膽管癌細(xì)胞的遷移與侵襲,敲減RACK1后,膽管癌細(xì)胞的遷移與侵襲能力明顯增強(qiáng);其中,A為在膽管癌細(xì)胞RBE及9810上構(gòu)建敲減RACK1的轉(zhuǎn)染效率圖;B為通過(guò)免疫印跡法檢測(cè)差異表達(dá)RACK1的膽管癌細(xì)胞RBE及9810中各EMT途徑關(guān)鍵基因(E
?
cad、Vimentin、ZO
?
1、claudin)的蛋白表達(dá)水平;C為Transwell實(shí)驗(yàn)證實(shí)敲減RACK1能顯著促進(jìn)膽管癌細(xì)胞遷移能力;D為劃痕實(shí)驗(yàn)證實(shí)敲減RACK1能顯著促進(jìn)膽管癌細(xì)胞遷移能力;
[0015]圖4展示了RACK1通過(guò)EMT參與膽管癌細(xì)胞的遷移與侵襲,過(guò)表達(dá)RACK1后,膽管癌細(xì)胞的遷移與侵襲能力明顯受到抑制;其中,A為通過(guò)免疫印跡法檢測(cè)差異表達(dá)RACK1的膽管癌細(xì)胞RBE及9810中各EMT途徑關(guān)鍵基因(E
?
cad、Vimentin、ZO
?
1、claudin)的蛋白表達(dá)水平;B為Transwell實(shí)驗(yàn)證實(shí)過(guò)表達(dá)RACK1能顯著降低膽管癌細(xì)胞遷移能力;C為劃痕實(shí)驗(yàn)證實(shí)過(guò)表達(dá)RACK1能顯著降低膽管癌細(xì)胞遷移能力;
[0016]圖5展示了RACK1的敲減或過(guò)表達(dá)均對(duì)膽管癌細(xì)胞的活力與增殖能力無(wú)顯著改變;其中,A為集落形成實(shí)驗(yàn)證實(shí)敲低RACK1對(duì)膽管癌細(xì)胞RBE及9810的增殖能力無(wú)顯著影響;B為CCK
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8實(shí)驗(yàn)證實(shí)敲低RACK1對(duì)膽管癌細(xì)胞RBE及9810的活力無(wú)顯著影響;C為通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)證實(shí)敲低RACK1對(duì)膽管癌細(xì)胞RBE及9810的凋亡無(wú)顯著影響;
[0017]以上附圖中,***表示經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,兩組間具有顯著性差異,P值小于0.001;**表示經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,兩組間具有顯著性差異,P值小于0.01,*表示經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,兩組間具有顯著性差異,P值小于0.05;ns表示兩組間無(wú)顯著差異。
具體實(shí)施方式
[0018]為使本專利技術(shù)更明顯易懂,茲以優(yōu)選實(shí)施例,并配合附圖作詳細(xì)說(shuō)明如下。
[0019]實(shí)施例1
[0020]RACK1在膽管癌中高表達(dá),但高表達(dá)與膽管癌良好預(yù)后、低轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(圖1
?
2)
[0021]本實(shí)施例首先通過(guò)在188對(duì)膽管癌組織芯片中檢測(cè)RACK1的蛋白表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)在癌與癌旁組織中表達(dá)存在差異,RACK1的免疫組化染色強(qiáng)度在癌組織中顯著高于配對(duì)的癌
旁組織,如圖1A~C所示。結(jié)合隨訪數(shù)據(jù)及臨床病理信息分析,發(fā)現(xiàn)高表達(dá)RACK1的膽管癌患者預(yù)后好于低表達(dá)RACK1(圖1D),免疫組化組合表達(dá)評(píng)分系統(tǒng)中RACK1具有不同的表達(dá)水平(圖1E);更細(xì)化分析表明,RACK1表達(dá)與膽管癌腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化密切相關(guān),高表達(dá)RACK1的膽管癌患者其預(yù)后優(yōu)于低表達(dá)組,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率低本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
【技術(shù)特征摘要】
1.RACK1作為靶點(diǎn)在制備膽管癌預(yù)后及轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)試劑或試劑盒中的應(yīng)用。2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用,其特征在于,所述試劑或試劑盒至少包括通過(guò)RT
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qPCR檢測(cè)RACK1基因表...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員:沈盛,阮元元,高志慧,鄭博豪,劉厚寶,
申請(qǐng)(專利權(quán))人:復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院,
類型:發(fā)明
國(guó)別省市:
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