DERL1基因啟動子區甲基化位點在食管癌診斷中的應用制造技術

本發明專利技術屬于生物醫藥技術領域，具體涉及DERL1基因啟動子區甲基化位點在食管癌診斷中的應用。通過檢測即食管癌組織和癌旁正常組織中DERL1基因啟動子區甲基化位點的表達水平或DERL1基因的表達水平，表明在食管鱗狀細胞癌組織中的平均甲基化水平低于癌旁正常組織，差異具有統計學意義；同時，DERL1蛋白在食管鱗癌中的表達明顯高于癌旁正常組織，差異具有統計學意義。因此，以食管癌中DERL1基因或DERL1基因啟動子區甲基化位點作為檢測標志物能夠用于診斷、輔助治療和預后評估食管癌。輔助治療和預后評估食管癌。輔助治療和預后評估食管癌。

【技術實現步驟摘要】
DERL1基因啟動子區甲基化位點在食管癌診斷中的應用


[0001]本專利技術屬于生物醫藥
，具體涉及DERL1基因啟動子區甲基化位點在食管癌診斷中的應用。

技術介紹

[0002]食管癌(Esophageal carcinoma，EC)是全球致死相關癌癥中居第六位的腫瘤。食管鱗狀細胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)又稱為食管鱗癌是食管癌中最常見的組織學亞型，特別是在東亞，非洲東部和南部高發。盡管對于食管癌的診斷和治療方法有所改善，但由于早期淋巴結轉移，食管鱗癌晚期患者的生存率仍然很低，其患者5年生存率仍較低。根據病因學和流行病學研究表明，食管癌的發生是多種因素共同發揮效應而導致的疾病。因此，當下尋找導致食管癌的致病因素和發病機制尤為重要。
[0003]食管癌的發生是由環境和遺傳因素共同作用引起的。DNA甲基化是人類基因組的主要表觀遺傳形式。在大多數類型的癌癥中，DNA甲基化通常存在異常。甲基化是基因組DNA中胞嘧啶的共價修飾，主要發生在脊椎動物的CpG二核苷酸中，并且通常與長期轉錄抑制相關。現有技術已發現在食管癌中，P16和RASSF1A基因的啟動子區域均存在高甲基化狀態，高甲基化抑制基因的表達，從而促進癌癥的發展。申請人前期研究發現，食管鱗癌組織中miR
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203和miR
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34a甲基化水平明顯高于癌旁正常組織，且它們的高甲基化和表達水平具有顯著相關性，經分析還發現其高甲基化水平與淋巴結轉移顯著相關，表明其高甲基化水平促進食管鱗癌的發展。還發現，PLCE1基因啟動子區低甲基化調控其蛋白高表達，并通過NFκB通路和VEGF
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C/Bcl
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2的表達促進食管鱗癌細胞的血管生成和增殖。因此，探索食管癌中基因的甲基化對于ESCC的早期診斷，精確預后和個體化治療具有重要意義。
[0004]DERL1(Derl
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like domain family member 1)是一種與內質網(endoplasmic reticμLum，ER)降解相關的蛋白，其參與ER中錯誤折疊的蛋白質的釋放過程，并將該蛋白質逆轉運到細胞質中。DERL1在非小細胞型肺癌、結腸癌和乳腺癌中過度表達，并發揮重要作用。研究表明，DERL1表達與腋窩淋巴結轉移之間有明顯關聯，表明DERL1可能參與侵襲性腫瘤生長或轉移，將DERL1過表達及干擾質粒轉入人乳腺癌ZR
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75
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1細胞，DERL1可能通過下調E
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cadherin促進上皮間充質轉化促進細胞遷移和侵襲。但并未見DERL1基因在食管癌中的用途并未有相關報道。

技術實現思路

[0005]本專利技術的目的在于提供DERL1基因啟動子區甲基化位點在食管癌診斷中的應用，為食管癌的診斷、輔助治療和預后評估提供了一種新的分子標志物，利用此分子標志物可簡單、準確地進行食管癌的特異性檢測。
[0006]本專利技術提供了DERL1基因和/或DERL1基因啟動子區甲基化位點作為檢測標志物在制備食管癌診斷、輔助治療和預后評估中的一項或多項產品中的應用。
[0007]優選的，所述DERL1基因啟動子區甲基化位點所在的甲基化區域的核苷酸序列如
SEQ ID No.1所示。
[0008]優選的，所述DERL1基因啟動子區甲基化位點包括CpG_1、CpG_2、CpG_3、CpG_4.5、CpG_6.7、CpG_8.9、CpG_14、CpG_15、CpG_16、CpG_17、CpG_18和CpG_19.20的一種或多種。
[0009]優選的，所述產品包括檢測DERL1基因啟動子區甲基化位點的甲基化水平的試劑和/或檢測DERL1基因表達量的試劑。
[0010]優選的，所述檢測DERL1基因啟動子區甲基化位點的甲基化水平的試劑包括EZ
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96 DNA Methylation
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Gold
TM
kit。
[0011]優選的，所述檢測DERL1基因表達量的試劑包括基因檢測試劑或免疫組化試劑。
[0012]本專利技術還提供了一種用于檢測DERL1基因啟動子區甲基化位點的引物對，所述引物對的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
[0013]本專利技術還提供了一種用于食管癌的診斷、輔助輔助治療和預后評估的試劑盒，所述試劑盒包括上述技術方案所述的引物對和PCR擴增試劑。
[0014]優選的，所述PCR擴增試劑包括Taq聚合酶、dNTPs和PCR緩沖液。
[0015]有益效果：
[0016]本專利技術提供了DERL1基因啟動子區甲基化位點作為檢測標志物在制備食管癌診斷、輔助治療和預后評估中的一項或多項產品中的應用。通過檢測食管癌組織和癌旁正常組織中DERL1基因啟動子區甲基化位點的表達水平，并進行統計學分析，表明在食管癌組織中的平均甲基化水平低于癌旁正常組織，差異具有統計學意義，DERL1基因啟動子區甲基化狀態對食管鱗癌組織具有特異性，因此，以食管癌中DERL1基因啟動子區甲基化位點作為新的分子標記能夠用于診斷、輔助治療和預后評估食管癌。
[0017]而且，本專利技術利用免疫組織化學方法檢測食管癌組織和癌旁正常組織中DERL1蛋白的表達情況，對食管癌組織和癌旁正常組織中DERL1蛋白的免疫組化評分進行統計學分析，發現DERL1蛋白在食管癌中的表達明顯高于癌旁正常組織，差異具有統計學意義；同時采用Kaplan
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Meier生存分析比較食管鱗癌中DERL1蛋白表達狀態與患者預后的關系，結果表明DERL1蛋白高表達的患者總體生存率較低(P<0.01)，差異具有統計學意義。受試者工作特征(Receiver Operating Characteristic,ROC)曲線分析，DERL1蛋白對于診斷食管鱗癌的敏感性和特異性為83.4％和90.1％，且AUC的值為0.923，說明診斷效果較好。因此，以食管癌中DERL1基因作為檢測標志物能夠用于診斷、輔助輔助治療和預后評估食管癌。
附圖說明
[0018]為了更清楚地說明本專利技術實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹。
[0019]圖1為實施例1中DERL1基因啟動子區引物擴增序列CpG位點圖示；
[0020]圖2為實施例1中DERL1基因PCR擴增產物電泳圖；
[0021]圖3為實施例1中MALDI
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TOF MS法甲基化檢測原理圖；
[0022]圖4為實施例1中為食管鱗癌和癌旁正常組織中DERL1基因啟動子區CpG差異性位點甲基化水平比較；
[0023]圖5為實施例1中DERL1基因啟動子區CpG單位甲基化狀態診斷食管鱗癌的敏感性
和特異性；
[0024]圖6為實施例1中食管鱗本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.DERL1基因和/或DERL1基因啟動子區甲基化位點作為檢測標志物在制備食管癌診斷、輔助治療和預后評估中的一項或多項產品中的應用。2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述DERL1基因啟動子區甲基化位點所在的甲基化區域的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述DERL1基因啟動子區甲基化位點包括CpG_1、CpG_2、CpG_3、CpG_4.5、CpG_6.7、CpG_8.9、CpG_14、CpG_15、CpG_16、CpG_17、CpG_18和CpG_19.20的一種或多種。4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述產品包括檢測DERL1基因啟動子區甲基化位點的甲基化水平的試劑和/或檢測DERL1基因表達量的試劑。5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述檢測DER...

【專利技術屬性】
技術研發人員：崔曉賓，周紫如，王文潔，陳云昭，孫淑妍，禹潔，李鋒，楊菊，孫夢菲，任偉，王濤，張樓乾，聶嶺，孟凡青，
申請(專利權)人：南京鼓樓醫院，
類型：發明
國別省市：