【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種唾液酸寡糖的富集方法及檢測(cè)方法
[0001]本專利技術(shù)涉及一種唾液酸寡糖的富集方法及檢測(cè)方法。
技術(shù)介紹
[0002]唾液酸糖鏈組成復(fù)雜、結(jié)構(gòu)多樣、豐度動(dòng)態(tài)范圍大，低豐度糖鏈通常達(dá)不到一些分析方法的檢出限。其次，糖鏈為多羥基結(jié)構(gòu)，親水性強(qiáng)，唾液酸位于N
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糖鏈末端，帶有負(fù)電荷，在質(zhì)譜中離子化效率低，檢測(cè)靈敏度不高。此外，從糖蛋白上酶切糖鏈的過程不可避免地會(huì)引入鹽，并使得糖鏈和肽段及蛋白等分子共存，干擾糖鏈在質(zhì)譜中的檢測(cè)。
[0003]為解決上述難題，在利用質(zhì)譜對(duì)糖鏈進(jìn)行分析前，可對(duì)其進(jìn)行純化和富集，以減少雜質(zhì)對(duì)糖鏈質(zhì)譜分析的干擾和提高質(zhì)譜對(duì)糖鏈的檢測(cè)靈敏度，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)糖鏈的準(zhǔn)確定性分析。
[0004]現(xiàn)有已公開的針對(duì)唾液酸寡糖進(jìn)行富集的方法包含氟化學(xué)標(biāo)簽法和葡萄糖苷
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希夫堿改性硅膠動(dòng)態(tài)吸附法以及其他一些根據(jù)親水相互作用原理的材料在對(duì)N
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糖進(jìn)行富集時(shí)可實(shí)現(xiàn)對(duì)唾液酸寡糖的部分富集。但這些方法存在操作復(fù)雜，富集效果不佳等缺點(diǎn)，有必要提供一種材料制備簡(jiǎn)單，反應(yīng)條件溫和，且提高檢測(cè)靈敏度的方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
[0005]本專利技術(shù)要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)唾液酸糖鏈檢測(cè)存在檢測(cè)靈敏度低、且雜質(zhì)干擾的缺陷，提供一種唾液酸寡糖的富集方法及檢測(cè)方法。本專利技術(shù)的富集方法材料制備簡(jiǎn)單，能夠有效富集樣本中的唾液酸寡糖。
[0006]本專利技術(shù)是通過下述技術(shù)方案來解決上述技術(shù)問題：
[0007]本專利技術(shù)提供一種唾液...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
【技術(shù)特征摘要】
1.一種唾液酸寡糖的富集方法，其特征在于，其包括如下步驟：將唾液酸寡糖粗品經(jīng)過改性脫脂棉進(jìn)行固相萃取；其中，所述改性脫脂棉的制備方法包括如下步驟：將脫脂棉與含環(huán)氧基團(tuán)的銨基陽離子化試劑在堿性條件下進(jìn)行水熱反應(yīng)，然后調(diào)節(jié)pH至中性，制得所述改性脫脂棉。2.如權(quán)利要求1所述的唾液酸寡糖的富集方法，其特征在于，所述含環(huán)氧基團(tuán)的銨基陽離子化試劑為2，3
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環(huán)氧丙基三甲基氯化銨；和/或，所述水熱反應(yīng)的溫度為60～70℃，例如62.5～67.5℃，較佳地，所述水熱反應(yīng)的溫度為65℃；和/或，所述水熱反應(yīng)的時(shí)間為7～9h，例如7.5～8.5h，再例如8h；較佳地，所述水熱反應(yīng)為在65℃下攪拌8h進(jìn)行；和/或，所述堿性條件采用堿性物質(zhì)進(jìn)行調(diào)節(jié)，所述堿性物質(zhì)為氫氧化鈉；較佳地，相對(duì)于2.5g脫脂棉而言，所述氫氧化鈉的用量為4～6g，例如為4.5～5.5g，更佳地，氫氧化鈉的用量為5g；和/或，所述改性脫脂棉的制備方法中，在調(diào)節(jié)pH至中性之后，還包括干燥的步驟。3.如權(quán)利要求1所述的唾液酸寡糖的富集方法，其特征在于，所述唾液酸寡糖粗品為包含唾液酸寡糖的樣品，所述含唾液酸寡糖的樣品通過糖蛋白樣品經(jīng)過切糖實(shí)驗(yàn)得到；較佳地，所述糖蛋白樣品包括唾液酸糖肽、胎球蛋白或雞蛋黃；較佳地，所述切糖實(shí)驗(yàn)包括如下步驟：將糖蛋白樣品經(jīng)過酶解、蛋白沉淀、離心取上清液。4.如權(quán)利要求3所述的唾液酸寡糖的富集方法，其特征在于，所述酶解所采用的酶為PNGase F糖苷酶；和/或，所述酶解的反應(yīng)溫度為40～70℃，例如為45～55℃，較佳地，所述酶解的反應(yīng)溫度為50℃；和/或，所述酶解的反應(yīng)時(shí)間為8～12分鐘，例如為9～11分鐘，較佳地為10分鐘；較佳地，所述酶解為在40～60℃下反應(yīng)8～12分鐘，例如為在45～55℃下反應(yīng)9～11分鐘，更佳地，在50℃下反應(yīng)10分鐘；和/或，在所述蛋白沉淀的步驟中，采用有機(jī)溶劑進(jìn)行蛋白沉淀，所述有機(jī)溶劑為乙腈和冰乙醇；和/或，在所述離心的步驟中，離心參數(shù)設(shè)為轉(zhuǎn)速5000～20000g下離心1～15分鐘，例如15000g離心5分鐘；和/或，在切糖實(shí)驗(yàn)后，還包括如下步驟：將切糖實(shí)驗(yàn)得到的唾液酸寡糖樣品干燥、復(fù)溶于溶劑后得到唾液酸寡糖粗品；所述溶劑較佳地為乙腈，所述乙腈例如為80％乙腈水溶液。5.如權(quán)利要求1所述的唾液酸寡糖的富集方法，其特征在于，所述經(jīng)過改性脫脂棉較佳地包括如下步驟：將唾液酸寡糖粗品上樣至裝填有所述改性脫脂棉的固相萃取柱中；其中，較佳地，所述固相萃取柱為槍頭柱；對(duì)于200μL的槍頭柱而言，較佳地，所述改性脫脂棉裝填的質(zhì)量為4.5～5.5mg，例如為4.8～5.2mg；其中，較佳地，所述唾液酸寡糖粗品的上樣體積為10μL以上，例如15或20μL；其中，在上樣之前，還對(duì)所述固相萃取柱進(jìn)行清洗；例如，依次采用超純水、純乙腈、80％ACN水溶液進(jìn)
行清洗。6.如權(quán)利要求1所述的唾液酸寡糖的富集方法，其特征在于，所述固相萃取包括如下步驟：將上樣后的所述固相萃取柱進(jìn)行離心，清洗，洗脫。7.如權(quán)利要求6所述的唾液酸寡糖的富集方法，其特征在于，所述離心的步驟中，離心梯度設(shè)為50g離心2min，550g離心2min，2000g離心1min，循環(huán)3次；和/或，所述清洗的步驟包括如下操作：使用水和80％乙腈在2000g離心1min；和/或，所述洗脫使用的洗脫液為0.1％TFA(三氟乙酸)、50mM NH4H...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：吳婷，馬騰洲，李娟，朱麗佳，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：上海海關(guān)工業(yè)品與原材料檢測(cè)技術(shù)中心，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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