本申請提供了一種外泌體核酸釋放劑，包括以下組分：金屬離子螯合劑、緩沖液、極性有機溶劑、表面活性劑、核酸酶抑制劑、qPCR保護劑、qPCR增強劑；釋放劑中還包含有前處理劑。本申請具有以下優點：所提供的外泌體核酸釋放劑及其在制備血液外泌體核酸檢測試劑盒中的應用，能夠直接裂解釋放樣本外泌體中的核酸，釋放出來的核酸可直接加入到PCR體系中擴增檢測，更利于指尖血、血清、血漿、鼻咽拭子、口咽拭子樣本的核酸提取。其技術優勢為：成本低；操作簡單，大幅減少檢測時間；對人員無要求，減少了人員操作對檢測結果的影響；不易受環境或操作步驟污染，也不存在樣本污染環境的風險；不易受膽紅素等物質抑制qPCR正常擴增的影響。膽紅素等物質抑制qPCR正常擴增的影響。
【技術實現步驟摘要】
一種外泌體核酸釋放劑在制備血液外泌體核酸檢測試劑盒中的應用
[0001]本申請涉及分子檢測
，具體涉及一種外泌體核酸釋放劑及其在制備血液外泌體核酸檢測試劑盒中的應用。
技術介紹
[0002]核酸分子檢測在疾病的檢測篩查方面具有不可比擬的優勢，應用廣泛，如近期的新型冠狀病毒疫情，核酸檢測在感染人群以及無癥狀人群的篩查檢測工作中起到了關鍵性的作用，對疫情控制意義重大。
[0003]同時核酸提取是核酸檢測中必不可少的環節，核酸提取與純化一般會經過樣本的裂解
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洗滌
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洗脫等步驟，目前市面上主要的核酸提取試劑有柱提法和磁珠法。柱提法和磁珠法提取的核酸具有純度高的優點，但同時存在操作繁瑣、使用受監管的有機試劑以及需要用到相應的提取儀器導致成本高的缺陷。對于樣本量本就較少且保存運輸困難的樣本而言非常不適用。
[0004]總之，目前樣本外泌體核酸提取至少存在以下幾類缺點：(1)成本高。(2)需要對樣本進行額外的核酸提取，操作過程較復雜，臨床上增加了從收集樣本到出結果的時間。(3)對試驗人員有較高的專業技能要求，檢測結果的好壞與試驗人員的操作過程有很大關系。(4)易受環境或操作步驟的污染。(5)易受膽紅素、裂解液等物質的影響，抑制qPCR的正常擴增。
[0005]申請內容
[0006]針對上述存在的技術局限性，本申請提出了一種外泌體核酸釋放劑及其在制備血液外泌體核酸檢測試劑盒中的應用；其克服了
技術介紹
中提到的不足和缺陷。
[0007]為實現上述目的，本申請采用了以下技術方案：
[0008]本申請的申請點是提供了一種外泌體核酸釋放劑，包括有以下組分：金屬離子螯合劑、緩沖液、極性有機溶劑、表面活性劑、核酸酶抑制劑、qPCR保護劑、qPCR增強劑；所述qPCR保護劑為BSA和/或甘油。
[0009]可選地，上述的一種外泌體核酸釋放劑，所述金屬離子螯合劑包括EDTA
?
2Na、EGTA、檸檬酸中的一種或多種；所述緩沖液包括Tris
?
HCl緩沖液、磷酸鈉緩沖液、醋酸鈉緩沖液中的一種或多種；所述極性有機溶劑包括二甲基亞砜、乙醇、六甲基磷酰胺、四甲基乙二胺、異戊醇中的一種或多種；所述表面活性劑包括莎梵婷、十二烷基磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉、十二烷基硫酸三乙醇胺、十二烷基二苯醚二磺酸鈉、曲拉通、吐溫
?
20中的一種或多種；所述核酸酶抑制劑為鹽酸胍和/或異硫氰酸胍；所述qPCR增強劑為硫酸銨。
[0010]可選地，上述的一種外泌體核酸釋放劑，所述金屬離子螯合劑為檸檬酸；所述緩沖液為Tris
?
HCl緩沖液；所述極性有機溶劑為二甲基亞砜；所述表面活性劑為莎梵婷；所述核酸酶抑制劑為異硫氰酸胍；所述qPCR保護劑為BSA和甘油。
[0011]可選地，上述的一種外泌體核酸釋放劑，所述金屬離子螯合劑的含量濃度為0.2
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10mol/L，優選為6mol/L；所述緩沖液的含量濃度為0.2
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10mol/L，優選為5mol/L；所述極性有機溶劑的含量濃度以體積百分含量計為10％
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40％，優選為25％；所述表面活性劑的含量濃度以體積百分含量計為0.2％
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5％，優選為2.5％；所述核酸酶抑制劑的含量濃度為0.1
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5mol/L，優選為2mol/L；所述qPCR保護劑BSA的含量濃度為5
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20μg/μL，優選為15μg/μL；所述qPCR保護劑甘油的含量濃度以體積百分含量計為5％
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25％，優選為15％；所述qPCR增強劑的含量濃度為1
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10μg/μL，優選為5μg/μL。
[0012]可選地，上述的一種外泌體核酸釋放劑，所述外泌體核酸釋放劑中還包含有前處理劑；所述前處理劑包括有化學沉淀劑、凝集素、重懸劑；所述化學沉淀劑為海藻酸鈉和/或氯化鈣。
[0013]可選地，上述的一種外泌體核酸釋放劑，所述前處理劑中的凝集素為刀豆球蛋白A和/或馬鈴薯凝集素，重懸劑為乙二胺四乙酸。
[0014]可選地，上述的一種外泌體核酸釋放劑，所述化學沉淀劑為海藻酸鈉和氯化鈣；所述凝集素為刀豆球蛋白A；所述重懸劑為乙二胺四乙酸。
[0015]可選地，上述的一種外泌體核酸釋放劑，所述化學沉淀劑海藻酸鈉的含量為10
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50μg/ml，優選為30μg/ml；所述化學沉淀劑氯化鈣的含量為0.2
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5mol/L，優選為1mol/L；所述凝集素的含量為1
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50μg/mL，優選為10μg/ml；所述重懸劑的含量為20
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70mmol/L，優選為50mmol/L。
[0016]本申請的第二個申請點是提供了一種外泌體核酸釋放劑在制備血液外泌體核酸檢測試劑盒中的應用，所述血液為指尖血；所述外泌體核酸釋放劑的使用方法為：室溫條件下將待處理樣本與外泌體核酸釋放劑裝入無RNA酶離心管中，體積比為1：1.5，振蕩混勻20
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30秒，靜置10分鐘，再次振蕩混勻20
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30秒，瞬時離心后，取上清，即為釋放后的外泌體核酸溶液。
[0017]本申請的第三個申請點是提供了一種外泌體核酸檢測試劑盒，所述試劑盒中包括有上述的外泌體核酸釋放劑。
[0018]與現有技術相對比，本申請具有以下優點：
[0019]本申請提供了一種簡單、高效、快速的一種外泌體核酸釋放劑及其在制備血液外泌體核酸檢測試劑盒中的應用，能夠直接裂解釋放樣本外泌體中的核酸。在本申請外泌體核酸釋放劑的作用下，細胞膜被迅速破壞，使sncRNAs釋放出來，釋放出來的sncRNAs即可加入到PCR體系中擴增檢測。本申請外泌體核酸釋放劑可用于指尖血、血清、血漿、鼻咽拭子、口咽拭子樣本的核酸提取。其技術優勢包括但不限于以下幾個方面：
[0020](1)成本低；
[0021](2)操作簡單，大幅減少全流程檢測時間；
[0022](3)對試驗人員無特殊專業技能要求，檢測結果的好壞與人員操作無較大關系；
[0023](4)不易受環境或操作步驟污染同時也不存在樣本污染環境的風險；
[0024](5)不易受膽紅素等物質抑制qPCR正常擴增的影響。
具體實施方式
[0025]為使本申請的目的、技術方案和優點更加清楚明了，下面對本申請進行進一步詳細說明。但是應該理解，此處所描述僅僅用以解釋本申請，并不用于限制本申請的范圍。
[0026]除非另有定義，本文所使用的所有的技術術語和科學術語與屬于本申請的
的技術人員通常理解的含義相同，本文中在本申請的說明書中所使用的術語只是為了描述具體的實施例的目的，不是旨在限制本申請。本文中所使用的試劑和儀器均商購可得，所涉及的表征手段均可參閱現有技術中的相關描述，本文中不再贅述。
[0027]本申請中涉及的百分比含量本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.一種外泌體核酸釋放劑，其特征在于，包括有以下組分：金屬離子螯合劑、緩沖液、極性有機溶劑、表面活性劑、核酸酶抑制劑、qPCR保護劑、qPCR增強劑；所述qPCR保護劑為BSA和/或甘油。2.根據權利要求1所述的一種外泌體核酸釋放劑，其特征在于，所述金屬離子螯合劑包括EDTA
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2Na、EGTA、檸檬酸中的一種或多種；所述緩沖液包括Tris
?
HCl緩沖液、磷酸鈉緩沖液、醋酸鈉緩沖液中的一種或多種；所述極性有機溶劑包括二甲基亞砜、乙醇、六甲基磷酰胺、四甲基乙二胺、異戊醇中的一種或多種；所述表面活性劑包括莎梵婷、十二烷基磺酸鈉、十二烷基硫酸鈉、十二烷基硫酸三乙醇胺、十二烷基二苯醚二磺酸鈉、曲拉通、吐溫
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20中的一種或多種；所述核酸酶抑制劑為鹽酸胍和/或異硫氰酸胍；所述qPCR增強劑為硫酸銨。3.根據權利要求2所述的一種外泌體核酸釋放劑，其特征在于，所述金屬離子螯合劑為檸檬酸；所述緩沖液為Tris
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HCl緩沖液；所述極性有機溶劑為二甲基亞砜；所述表面活性劑為莎梵婷；所述核酸酶抑制劑為異硫氰酸胍；所述qPCR保護劑為BSA和甘油。4.根據權利要求1
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3任意一項所述的一種外泌體核酸釋放劑，其特征在于，所述金屬離子螯合劑的含量濃度為0.2
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10mol/L，優選為6mol/L；所述緩沖液的含量濃度為0.2
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10mol/L，優選為5mol/L；所述極性有機溶劑的含量濃度以體積百分含量計為10％
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40％，優選為25％；所述表面活性劑的含量濃度以體積百分含量計為0.2％
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5％，優選為2.5％；所述核酸酶抑制劑的含量濃度為0.1
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5mol/L，優選為2mol/L；所述qPCR保護劑BSA的含量濃度為5
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20μg/μ...
【專利技術屬性】
技術研發人員：蒯健，孫云，管丹萍，張天桂，
申請(專利權)人：江蘇命碼生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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