前列腺前體樣細胞、細胞制劑及其制備方法和應用技術

本發明專利技術提供了一種前列腺前體樣細胞、細胞制劑及其制備方法和應用，包括以下步驟：S0：提供前列腺原代細胞；S1：對所述S0中的前列腺原代細胞使用重編程培養基進行退分化培養以獲得表達陽性標志物CD90、CD73、CD44和SOX9中至少一種的前列腺前體樣細胞，其中，所述重編程培養基包括基礎培養基、抑制劑和生長因子；本發明專利技術前列腺前體樣細胞能夠在體外實現持續培養，又能夠不表達MHC二類分子，在移植前列腺前體樣細胞后不需要服用抗排藥，可以減少對人身體的傷害。體的傷害。體的傷害。

【技術實現步驟摘要】
前列腺前體樣細胞、細胞制劑及其制備方法和應用
[0001]本申請要求2022年05月10日提交的申請號為2022105036786，專利技術名稱為“生物制劑、細胞衍生物及制備方法和應用”的中國專利申請的優先權。上述申請的內容以引用方式被包含于此。


[0002]本專利技術涉及生物技術
，尤其涉及一種前列腺前體樣細胞、細胞制劑及其制備方法和應用。

技術介紹

[0003]慢性前列腺炎癥/慢性盆腔疼痛綜合征(Chronic prostatitis/Chronic pelvic pain syndrome，CP/CPPS)和前列腺增生(Benign prostatic hyperplasia，BPH)屬于男科疾病，對患者生活質量造成的影響巨大。慢性前列腺炎癥治療主要分藥品治療和非藥物治療，主要包括：1，抗生素，是臨床上治療慢性前列腺炎主要方式；2，α受體阻滯劑，消除排尿時前列腺內尿液返流，減少慢性前列腺炎的發生幾率；3，高頻透熱治療。目前治療前列腺增生的一線藥物是α受體阻劑和5α還原酶抑制劑。但是疾病產生的機制以及有效的治療方式，相關研究一直進展緩慢，其中很重要的一個原因是前列腺正常細胞無法在體外長期培養，造成研究工作無法持續開展。因此，有必要開發新型的前列腺前體樣細胞及細胞制劑以使前列腺前體樣細胞的持續培養。

技術實現思路

[0004]本專利技術的目的在于提供一種前列腺前體樣細胞、細胞制劑及其制備方法和應用，能夠使得肝內膽管前體樣細胞能夠連續傳代，同時，在移植前列腺前體樣細胞后不需要服用抗排藥，可以減少對人身體的傷害。
[0005]為實現上述目的，本專利技術提供了一種前列腺前體樣細胞的制備方法，包括以下步驟：
[0006]S0：提供前列腺原代細胞；
[0007]前列腺原代細胞獲得過程如下：
[0008]提供成熟的前列腺組織；使用無菌PBS緩沖液對成熟的前列腺組織進行清洗和滅菌處理后，使用由Ⅰ型膠原酶、無菌PBS緩沖液和中性蛋白酶消化液組成的3毫升細胞消化液在37攝氏度下對組織消化90分鐘，從而獲取原代細胞懸液。接著，使用70微米的無菌篩網對所述原代細胞懸液在無菌PBS緩沖液的輔助下進行篩網分選，收集濾液并去除粘液和未消化的組織，以完成篩網分選。然后，將得到的濾液離心并去除上清后，向得到的沉淀物內加入紅細胞溶解平衡液進行重懸后再次離心并重復上述過程直至再次離心后在細胞沉淀中觀察不到紅細胞為止，以完成紅細胞裂解去除，從而得到前列腺原代細胞。
[0009]值得注意的是，在前列腺原代細胞制備過程，Ⅰ型膠原酶占無菌PBS緩沖液的體積百分比為1％，中性蛋白酶占無菌PBS緩沖液的體積百分比為5％。每次離心的速率均為
1000g，離心時間均為3分鐘。
[0010]S1：對所述S0中的前列腺原代細胞使用重編程培養基進行退分化培養以獲得表達陽性標志物CD90、CD73、CD44和SOX9中至少一種的前列腺前體樣細胞，其中，所述重編程培養基包括基礎培養基、抑制劑和生長因子。
[0011]可選的，還包括：
[0012]S2：將所述前列腺原代細胞放入重編程培養基中進行退分化培養，直至所述前列腺前體樣細胞的融合度不低于80％，使用胰酶消化液對所述前列腺前體樣細胞進行消化處理，以得到前列腺前體樣細胞。
[0013]可選的，所述重編程培養基還包括Wnt信號通路激動劑、營養補充劑和緩沖液。
[0014]可選的，所述抑制劑包括抑制TGF
?
β信號通路的ROCK激酶抑制劑和A83
?
01抑制劑。
[0015]可選的，以占所述基礎培養基的含量計，所述ROCK激酶抑制劑的含量為5
?
20μM，所述A83
?
01抑制劑的含量為1
?
5μM。
[0016]可選的，所述生長因子包括EGF、bFGF、Noggin和R
?
spondin1。
[0017]可選的，以占所述基礎培養基的含量計，EGF的含量為10
?
50ng/mL，所述bFGF的含量為10
?
50ng/m，所述Noggin的含量為1
?
10ng/mL，所述R
?
spondin1的含量為10
?
30ng/mL。
[0018]可選的，所述前列腺前體樣細胞不表達CD34、CD45、HLA
?
DR、HLA
?
DP和HLA
?
DQ。
[0019]本專利技術還提供了一種所述的前列腺前體樣細胞的應用，所述前列腺前體樣細胞用于制備治療前列腺炎或前列腺增生的前列腺前體樣細胞制劑，使用所述前列腺前體樣細胞制劑干預體內動物模型后考察對前列腺炎的影響。
[0020]可選的，所述動物模型包括藥物誘導的前列腺炎或前列腺增生模型。
[0021]本專利技術還提供了一種前列腺前體樣細胞制劑，包括所述的表達陽性標志物CD90、CD73、CD44和SOX9中至少一種的前列腺前體樣細胞，以及藥學上可接受的載體。
[0022]本專利技術還提供了一種前列腺前體樣細胞制劑的應用，使用所述的前列腺前體樣細胞制劑干預體內動物模型。
[0023]本專利技術的有益效果在于：
[0024]本專利技術通過重編程培養基培養得到表達陽性標志物CD90、CD73、CD44和SOX9中至少一種的前列腺前體樣細胞，不表達MHC二類分子，因此在移植前列腺前體樣細胞后不需要服用抗排藥，可以減少對人身體的傷害，該前列腺前體樣細胞能夠在體外實現持續培養。
附圖說明
[0025]圖1為本專利技術提供的前列腺前體樣細胞的光學顯微下的形態示意圖；
[0026]圖2為本專利技術中前列腺前體樣細胞分別經過重編程培養基和基礎培養基擴增培養后其中的基底細胞標志物含量對照圖；
[0027]圖3為本專利技術中前列腺前體樣細胞分別經過重編程培養基和基礎培養基擴增培養后其中的腔細胞標志物含量對照圖；
[0028]圖4為本專利技術中前列腺前體樣細胞分別經過重編程培養基和基礎培養基擴增培養后其中的干細胞標志物含量對照圖；
[0029]圖5為本專利技術中前列腺前體樣細胞分別經過重編程培養基和基礎培養基擴增培養后其中的前列腺特異性標志物含量對照圖；
[0030]圖6為本專利技術實施例的前列腺前體樣細胞的基因表達標志物CD44的情況示意圖；
[0031]圖7為本專利技術實施例的前列腺前體樣細胞的基因表達標志物CD73的情況示意圖；
[0032]圖8為本專利技術實施例的前列腺前體樣細胞的基因表達標志物HLA
?
DRPQ的情況示意圖；
[0033]圖9為本專利技術實施例的前列腺前體樣細胞的基因表達標志物SOX9的情況示意圖；
[0034]圖10為本專利技術實施例的前列腺前體樣細胞的基因表達標志物CD90的情況示意圖；
[0035]圖11為本專利技術實施例的前列腺前體樣細胞的基因表達本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種前列腺前體樣細胞的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：S0：提供前列腺原代細胞；S1：對所述S0中的前列腺原代細胞使用重編程培養基進行退分化培養以獲得表達陽性標志物CD90、CD73、CD44和SOX9中至少一種的前列腺前體樣細胞，其中，所述重編程培養基包括基礎培養基、抑制劑和生長因子。2.根據權利要求1所述的前列腺前體樣細胞的制備方法，其特征在于，還包括：S2：將所述前列腺原代細胞放入重編程培養基中進行退分化培養，直至所述前列腺前體樣細胞的融合度不低于80％，使用胰酶消化液對所述前列腺前體樣細胞進行消化處理，以得到前列腺前體樣細胞。3.根據權利要求2所述的前列腺前體樣細胞的制備方法，其特征在于，所述重編程培養基還包括Wnt信號通路激動劑、營養補充劑和緩沖液。4.根據權利要求1所述的前列腺前體樣細胞的制備方法，其特征在于，所述抑制劑包括抑制TGF
?
β信號通路的ROCK激酶抑制劑和A83
?
01抑制劑。5.根據權利要求4所述的前列腺前體樣細胞的制備方法，其特征在于，以占所述基礎培養基的含量計，所述ROCK激酶抑制劑的含量為5
?
20μM，所述A83
?
01抑制劑的含量為1
?
5μM。6.根據權利要求1所述的前列腺前體樣細胞的制備方法，其特征在于，所述生長因子包括EGF、bFGF、Noggin和R
?
spondin1。7.根據權利要求6所述的前列腺前體樣細胞的制備方法，其特征在于，以占所述基礎...

【專利技術屬性】
技術研發人員：周伸奧，張琴，
申請(專利權)人：上海賽立維生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：