一種基因修飾的腫瘤細(xì)胞系制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種基因修飾的腫瘤細(xì)胞系，所述腫瘤細(xì)胞系在制備荷瘤非人動(dòng)物模型中的應(yīng)用，制備獲得的荷瘤非人動(dòng)物模型在篩選疫苗或者藥物中的用途或方法

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種基因修飾的腫瘤細(xì)胞系、人源化動(dòng)物腫瘤模型的構(gòu)建方法及其應(yīng)用
[0001]交叉引用
[0002]本專利技術(shù)要求在中國(guó)申請(qǐng)的，申請(qǐng)?zhí)枮椤?022108689483”，申請(qǐng)日為
2022
年
07
月
21
日，專利技術(shù)名稱為“一種基因修飾的腫瘤細(xì)胞系
、
人源化動(dòng)物腫瘤模型的構(gòu)建方法及其應(yīng)用”的申請(qǐng)作為優(yōu)先權(quán)，上述申請(qǐng)整體引入到本專利技術(shù)中，作為本專利技術(shù)的一部分
。


[0003]本專利技術(shù)屬于動(dòng)物基因工程領(lǐng)域，具體而言，涉及一種基因修飾的腫瘤細(xì)胞系
、
人源化動(dòng)物腫瘤模型的構(gòu)建方法及其在醫(yī)藥生物領(lǐng)域中的應(yīng)用
。

技術(shù)介紹

[0004]隨著傳染病等疾病逐漸被人們所控制，近年來(lái)，惡性腫瘤
(
癌癥
)
的發(fā)生率變相對(duì)顯得突出和增高了，因惡性腫瘤而死亡的人亦顯著增多
。
惡性腫瘤的治療通常包括手術(shù)治療
、
抗癌藥物治療
、
放射治療
、
生物治療和中西醫(yī)結(jié)合治療
。
[0005]生物治療中的免疫療法代表著成功治療癌癥的重大飛躍，在不同適應(yīng)癥下具有前所未有的長(zhǎng)期存活率
。
然而，許多患者仍然無(wú)法從這些免疫療法中受益，導(dǎo)致人們?cè)絹?lái)越關(guān)注確定可以延長(zhǎng)或改變患者反應(yīng)的新型免疫療法或組合
。
為此，對(duì)更具預(yù)測(cè)性的臨床前模型的需求不斷增加，以推動(dòng)合理的免疫治療藥物
//>組合開(kāi)發(fā)，并最大限度地減少臨床試驗(yàn)的失敗
。
小鼠動(dòng)物模型長(zhǎng)期以來(lái)一直是生物醫(yī)學(xué)研究的關(guān)鍵工具
。
用于評(píng)估免疫療法的小鼠模型的四種主要方法是：
(1)
具有完全免疫活性宿主的同基因的小鼠腫瘤模型；
(2)
基因工程小鼠模型；
(3)
化學(xué)誘導(dǎo)模型；
(4)
其他模型
。
雖然前三種方法被廣泛使用，但一個(gè)主要缺點(diǎn)是它們依賴于鼠類(lèi)免疫系統(tǒng)，然而鼠類(lèi)免疫系統(tǒng)并不能完全重現(xiàn)人類(lèi)免疫反應(yīng)
。
因此，非常需要重現(xiàn)功能性人類(lèi)免疫系統(tǒng)的臨床前模型
。
[0006]用于癌癥免疫療法研究的人源化小鼠模型包括三個(gè)要素：
(1)
免疫缺陷宿主小鼠；
(2)
人類(lèi)免疫細(xì)胞；
(3)
人類(lèi)腫瘤細(xì)胞
。
最近開(kāi)發(fā)了多種可以在體內(nèi)研究人體免疫系統(tǒng)的人源化小鼠
。
最常用的人源化小鼠模型是
Il2r
γ
null
小鼠品系，如
NOG(NOD/Shi
?
Prkdc
scid
Il2r
γ
tm1Sug
/Jic)
小鼠或
NSG(NOD/LtSz
?
Prkdc
scid
Il2r
γ
tm1Wjl
/J)
小鼠，移植人體組織
、
人造血細(xì)胞
(HSC)
或人外周血單核細(xì)胞
(PBMC)
重建人的免疫系統(tǒng)
。
其中最簡(jiǎn)單
、
最經(jīng)濟(jì)的方法是將人
PBMC
移植到免疫缺陷小鼠中
。
然而，在這些小鼠中存在嚴(yán)重的異種移植物抗宿主病
(xeno
?
GVHD)
，所有移植的
T
細(xì)胞都被
GVHD
激活，最后所有小鼠死于異種
GVHD
，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)窗口有限，這使得長(zhǎng)期且精確分析人免疫反應(yīng)變得困難
。
為了避免在
Hu
?
PBMC
小鼠中異種
GVHD
，基于
MHC
分子的遺傳操作開(kāi)發(fā)了不同的策略
。
將
PBMC
移植于敲出小鼠
I
類(lèi)和
II
類(lèi)
MHC
分子的
NSG
或
NOG
小鼠中，會(huì)降低和延長(zhǎng)異種
GvHD
產(chǎn)生
。
也有研究者發(fā)現(xiàn)，在移植前將
PBMC
中
CD4
+
T
細(xì)胞清除可有效減少
GVHD
的發(fā)生
。
[0007]在腫瘤免疫學(xué)研究中，人類(lèi)癌細(xì)胞，無(wú)論是腫瘤細(xì)胞系還是患者腫瘤細(xì)胞，都可被移植到上述人源化小鼠中，研究人類(lèi)免疫細(xì)胞和人類(lèi)腫瘤細(xì)胞之間的相互作用
。
雖然上述
人源化小鼠模型為在體內(nèi)研究人類(lèi)免疫細(xì)胞和人類(lèi)腫瘤細(xì)胞提供了獨(dú)特的機(jī)會(huì)，但由于缺乏抗原呈遞細(xì)胞，傳統(tǒng)模型僅限于評(píng)估非特異性
T
細(xì)胞相互作用
。
近年來(lái)，專職抗原呈遞細(xì)胞
——
樹(shù)突狀細(xì)胞
(DC)
疫苗在誘導(dǎo)癌癥患者的抗腫瘤免疫方面，具有很高的治療潛力
。
但少有基于人源化腫瘤細(xì)胞系或者小鼠模型評(píng)估接種
DC
的疫苗后免疫反應(yīng)的報(bào)告
。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

[0008]因此，本專利技術(shù)開(kāi)發(fā)了一種體外或體內(nèi)系統(tǒng)，提供一種基因修飾的腫瘤細(xì)胞系，所述腫瘤細(xì)胞系在制備荷瘤非人動(dòng)物模型中的應(yīng)用，制備獲得的荷瘤非人動(dòng)物模型在篩選疫苗或者藥物中的用途或方法，以及篩選得到的疫苗或者藥物
。
具體的，
[0009]本專利技術(shù)第一方面，提供一種基因修飾的腫瘤細(xì)胞系，所述基因修飾包括向腫瘤細(xì)胞系導(dǎo)入編碼人白細(xì)胞抗原
(human leucocyte antigen,HLA)
的核苷酸序列
。
[0010]優(yōu)選的，所述
HLA
基因包括
HLA
?
I
基因，
HLA
?
II
基因，或者
HLA
?
III
基因，更優(yōu)選的，所述
HLA
?
I
基因包括
HLA
?
A
，
HLA
?
B
，
HLA
?
C
；所述
HLA
?
II
基因包括
HLA
?
DR
，
HLA
?
DP
，
HLA
?
DQ
；進(jìn)一步優(yōu)選的，所述
HLA
基因包括
HLA
?
A*02:01。
[0011]優(yōu)選的，所述腫瘤細(xì)胞系來(lái)自于任一惡性腫瘤，更優(yōu)選的，所述惡性腫瘤包括生殖系統(tǒng)
、
呼吸系統(tǒng)
、
心血管系統(tǒng)
、
消化系本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
1.
一種基因修飾的腫瘤細(xì)胞系，其特征在于，所述基因修飾包括向腫瘤細(xì)胞系導(dǎo)入編碼人白細(xì)胞抗原
(human leucocyte antigen,HLA)
的
HLA
基因，優(yōu)選的，所述
HLA
基因包括
HLA
?
I
基因，
HLA
?
II
基因，或者
HLA
?
III
基因
。2.
根據(jù)權(quán)利要求1所述的腫瘤細(xì)胞系，其特征在于，所述腫瘤細(xì)胞系來(lái)自于任一惡性腫瘤，優(yōu)選的，所述惡性腫瘤包括生殖系統(tǒng)
、
呼吸系統(tǒng)
、
心血管系統(tǒng)
、
消化系統(tǒng)
、
泌尿系統(tǒng)
、
內(nèi)分泌系統(tǒng)
、
神經(jīng)系統(tǒng)
、
血液系統(tǒng)
、
骨骼肌肉系統(tǒng)等等的惡性腫瘤，更優(yōu)選的，所述惡性腫瘤包括生殖系統(tǒng)
、
消化系統(tǒng)
、
血液系統(tǒng)的惡性腫瘤，例如卵巢癌
、
宮頸癌
、
肝癌
、
急性白血病
。3.
根據(jù)權(quán)利要求1?2任一所述的腫瘤細(xì)胞系，其特征在于，所述基因修飾還包括向腫瘤細(xì)胞系導(dǎo)入編碼腫瘤相關(guān)抗原的核苷酸序列；其中，所述腫瘤相關(guān)抗原由所述腫瘤細(xì)胞系確定
。4.
一種權(quán)利要求1?3任一所述基因修飾的腫瘤細(xì)胞系的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括向腫瘤細(xì)胞系導(dǎo)入編碼人白細(xì)胞抗原
(human leucocyte antigen,HLA)
的
HLA
基因，優(yōu)選的，所述制備方法還包括向腫瘤細(xì)胞系導(dǎo)入編碼腫瘤相關(guān)抗原的核苷酸序列
。5.
一種荷瘤非人動(dòng)物模型的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：將權(quán)利要求1?3任一所述的腫瘤細(xì)胞系植入到非人動(dòng)物中

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：丁平，蔣金鳳，雷霆鈞，付婷婷，徐柳，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：四川康德賽醫(yī)療科技有限公司，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：