抗牙齦卟啉單胞菌卵黃免疫球蛋白疫苗的制備方法技術

本發明專利技術涉及抗牙齦卟啉單胞菌卵黃免疫球蛋白疫苗的制備方法。其包括以下操作步驟：（１）用牙齦卟啉單胞菌國際標準菌株培養分離取得牙齦卟啉單胞菌；（２）獲取牙齦卟啉單胞菌菌體蛋白；（３）以牙齦卟啉單胞菌全菌可溶性蛋白抗原與福氏不完全佐劑混勻成靜脈注射劑，對產蛋母雞雞翅下靜脈注射，收集所產雞蛋；（４）提取雞蛋中的抗牙齦卟啉單胞菌卵黃免疫球蛋白。本發明專利技術生產成本低，產出率高，一個雞蛋可以獲得１００毫克的卵黃免疫球蛋白；該方法操作簡便快捷，并具有耐熱、耐酸、穩定性好等優點。在溫度不高于７５℃和在ｐＨ４以上的酸性環境中，仍能很好地保持其生物學活性，常溫下可以儲存３個月左右，４℃可以保存６－１２個月而抗體活性不下降。

【技術實現步驟摘要】

【技術保護點】
抗牙齦卟啉單胞菌卵黃免疫球蛋白疫苗的制備方法，其特征在于包括以下操作步驟：（１）牙齦卟啉單胞菌的培養和鑒定用牙齦卟啉單胞菌國際標準菌株培養分離取得牙齦卟啉單胞菌備用；（２）獲取牙齦卟啉單胞菌菌體蛋白將分離出的牙齦卟啉單胞菌在牛腦心浸液（ＢＨＩ）羊血液體培養基中３７℃，８０％氮氣（Ｎ↓［２］）、１０％二氧化碳（ＣＯ↓［２］）、１０％氫氣（Ｈ２）增菌厭氧培養４８ｈ，收集細菌，超聲震碎至９０％細胞完全破碎，４０００ｒ／ｍｉｎ×１０ｍｉｎ離心，收集上清液，即為牙齦卟啉單胞菌全菌可溶性蛋白抗原，溫度４℃保存備用；（３）蛋雞免疫選５個月齡的未免疫的健康羅曼產蛋母雞，隔離飼養；以１ｍｇ／ｍｌ牙齦卟啉單胞菌全菌可溶性蛋白抗原１ｍｌ與福氏不完全佐劑１ｍｌ吹打混勻成油包水狀靜脈注射劑，對上述產蛋母雞雞翅下靜脈注射，每只雞注射量為０．５ｍｇ；每周注射免疫一次，共注射免疫４次；同時，收集每天產下的雞蛋，溫度４℃保存；（４）提純抗牙齦卟啉單胞菌卵黃免疫球蛋白（抗Ｐｇ－ＩｇＹ）用卵黃免疫球蛋白純化系統試劑盒（ＥＧＧｓｔｒａｃｔ↑［ＴＭ］ＩｇＹＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ，Ｐｒｏｍｅｇａ公司，美國）提純每天產下雞蛋的卵黃免疫球蛋白，所述試劑盒包括試劑盒Ａ液和試劑盒Ｂ液，具體操作如下：ａ、將蛋黃和蛋清分開，收集蛋黃，緩慢加入蛋黃３倍體積的試劑盒Ａ液，攪拌５ｍｉｎ，冷凍離心機４℃條件下離心１００００ｒ／ｍｉｎ×１５ｍｉｎ，收集上清液；ｂ、在上清液的中加入１／３體積的試劑盒Ｂ液，攪拌５ｍｉｎ，冷凍離心機４℃條件下離心１００００ｒ／ｍｉｎ×１５ｍｉｎ，棄上清液，用無菌ＰＨ值７．２的磷酸鹽緩沖液（ＰＢＳ）重懸沉淀處理，取得沉淀物；ｃ、在沉淀物中加入１／３體積的試劑盒Ｂ液，攪拌５ｍｉｎ，冷凍離心機４℃條件下離心１００００ｒ／ｍｉｎ×１５ｍｉｎ，棄上清，用無菌ＰＨ值７．２的磷酸鹽緩沖液（ＰＢＳ）重懸沉淀，獲得高純度的抗牙齦卟啉單胞菌卵黃免疫球蛋白，４℃保存；抗牙齦卟啉單胞菌卵黃免疫球蛋白的相對分子質量約為１８０，所含的２個亞單位即６５～７０的重鏈和２２～３０的輕鏈。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：徐燕，沈繼龍，姜大川，羅慶禮，
申請(專利權)人：安徽醫科大學，
類型：發明
國別省市：34[中國|安徽]