一種檢測地美硝唑的試紙條及其制備方法和應用技術

本發明專利技術提供一種檢測地美硝唑的試紙條及其制備方法和應用，該試紙條包括樣品吸收墊

【技術實現步驟摘要】
一種檢測地美硝唑的試紙條及其制備方法和應用


[0001]本專利技術涉及地美硝唑的檢測，具體涉及一種用于檢測地美硝唑的膠體金試紙條，其特別適用于禽蛋中地美硝唑殘留的檢測
。

技術介紹

[0002]地美硝唑是硝基咪唑類藥物，對滴蟲
、
原蟲病和厭氧菌有良好的預防和治療作用，同時還具有抗結核
、
抗病毒
、
抗病毒腫瘤等作用，常作為獸藥用于畜禽類疾病的預防和治療
。
但是，地美硝唑作為藥物在動物體內會有一定的殘留，會引起人體致突變和致癌等副作用，對人體的健康造成影響
。
[0003]目前已報道的檢測地美硝唑的方法主要是液相色譜法
、
液相色譜
?
質譜
/
質譜法等儀器方法
。
這些方法均須在實驗室條件下操作，樣品前處理繁瑣費時，還需配備昂貴的儀器設備，檢測成本較高
、
耗時長
、
操作復雜，在實際應用過程中有很大的限制性，難以滿足大量樣品和現場樣品快速檢測的需要
。
因此，開發一種簡單快速
、
適用于禽蛋中地美硝唑殘留的膠體金試紙條，可滿足大量樣品現場篩選和監控
。

技術實現思路

[0004]本專利技術的目的在于克服現有的檢測地美硝唑的方法存在的對設備依賴性高，并且不能夠實現對大批量樣品的快速檢測的特點，提供一種操作簡單
、
靈敏度高
、
檢測速度快r/>、
成本低
、
不受檢測設備限制的試紙條及其制備方法和應用，以實現對大批量的地美硝唑樣品進行快速檢測和現場監控
。
[0005]為了實現本專利技術的目的，本專利技術提供了一種檢測地美硝唑的試紙條，該試紙條包括樣品吸收墊
、
結合物釋放墊
、
反應膜
、
吸水墊和底板；所述反應膜上具有包被有地美硝唑半抗原
?
載體蛋白偶聯物的檢測線和包被有羊抗鼠抗抗體的質控線；所述結合物釋放墊上噴涂有地美硝唑單克隆抗體
?
膠體金標記物
。
[0006]所述地美硝唑單克隆抗體是以地美硝唑半抗原
?
載體蛋白偶聯物作為免疫原制備獲得
。
[0007]所述地美硝唑半抗原
?
載體蛋白偶聯物由地美硝唑半抗原與載體蛋白偶聯得到，所述載體蛋白為牛血清白蛋白
、
卵清蛋白
、
血藍蛋白
、
甲狀腺蛋白或人血清白蛋白；
[0008]所述地美硝唑半抗原的合成方法為：取
1.96g 1
?
(2
?
疊氮乙基
)
?2?
甲基
?5?
硝基
?
1H
?
咪唑加
20mL N,N
?
二甲基甲酰胺溶解，加入
0.36g
無水硫酸銅和
0.51g
抗壞血酸鈉充分攪拌后，加入
2.56g
炔丙基
?
琥珀酰亞胺酯微波輻照
1min
，停止反應；加
200mL
水充分攪拌，以乙酸乙酯為溶劑萃取三次，每次
100mL
，合并有機相蒸干，上硅膠柱，用體積比為
5:1
的石油醚
?
乙酸乙酯混合溶液洗脫分離，得到地美硝唑半抗原，其分子結構式為：
[0009][0010]所述樣品吸收墊
、
結合物釋放墊
、
反應膜
、
吸水墊依次粘貼在底板上，所述結合物釋放墊
1/3
～
1/2
被覆蓋于樣品吸收墊下
。
[0011]所述底板可為
PVC
底板或其他硬質不吸水的材料；所述樣品吸收墊可為吸濾紙或濾油紙；所述結合物釋放墊可為玻璃棉或聚酯材料；所述吸水墊為吸水紙；所述反應膜可為硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜
。
[0012]本專利技術還提供了一種制備上述試紙條的方法，其包括以下步驟：
[0013]1)
制備噴涂有地美硝唑單克隆抗體
?
膠體金標記物的結合物釋放墊；
[0014]2)
制備具有包被有地美硝唑半抗原
?
載體蛋白偶聯物的檢測線和包被有羊抗鼠抗抗體的質控線的反應膜；
[0015]3)
將
1)
和
2)
制備好的結合物釋放墊
、
反應膜與樣品吸收墊
、
吸水墊和底板組裝成試紙條
。
[0016]具體地說，步驟包括：
[0017]1)
以1?
(2
?
疊氮乙基
)
?2?
甲基
?5?
硝基
?
1H
?
咪唑為起始原料，與炔丙基
?
琥珀酰亞胺酯，經疊氮化物與末端炔基加成反應，制備地美硝唑半抗原；
[0018]2)
將地美硝唑半抗原與載體蛋白偶聯，制備地美硝唑半抗原
?
載體蛋白偶聯物；
[0019]3)
用地美硝唑半抗原
?
載體蛋白偶聯物免疫小鼠，將小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞通過融合
、
篩選，得到分泌地美硝唑單克隆抗體的雜交瘤細胞株；
[0020]4)
提取小鼠
IgG
免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗體；
[0021]5)
分別將地美硝唑半抗原
?
載體蛋白偶聯物和羊抗鼠抗抗體包被于反應膜的檢測線
(T)
和質控線
(C)
上；
[0022]6)
用檸檬酸三鈉與氯金酸反應制備膠體金；
[0023]7)
將制備的地美硝唑單克隆抗體加入到制備的膠體金中，得到地美硝唑單克隆抗體
?
膠體金標記物；
[0024]8)
將地美硝唑單克隆抗體
?
膠體金標記物噴涂在結合物釋放墊上，
37℃
烘干
2h
后取出，置于干燥環境中保存備用；
[0025]9)
將樣品吸收墊用含1％牛血清白蛋白
、pH
為
7.2
的
0.02mol/L
磷酸鹽緩沖液浸泡
2h
，
37℃
烘干
2h
備用；
[0026]10)
在底板上按順序粘貼上樣品吸收墊
、
結合物釋放墊
、
反應膜
、
吸水墊，結合物釋放墊從起始端有
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【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.
一種檢測地美硝唑的試紙條，包括樣品吸收墊
、
結合物釋放墊
、
反應膜
、
吸水墊和底板，所述反應膜上具有包被有地美硝唑半抗原
?
載體蛋白偶聯物的檢測線和包被有羊抗鼠抗抗體的質控線，所述結合物釋放墊上噴涂有地美硝唑單克隆抗體
?
膠體金標記物；所述地美硝唑單克隆抗體是以地美硝唑半抗原
?
載體蛋白偶聯物作為免疫原制備獲得；所述地美硝唑半抗原
?
載體蛋白偶聯物由地美硝唑半抗原與載體蛋白偶聯得到，所述載體蛋白為牛血清白蛋白
、
卵清蛋白
、
血藍蛋白
、
甲狀腺蛋白或人血清白蛋白，其特征在于，所述地美硝唑半抗原的合成方法為：取
1.96g 1
?
(2
?
疊氮乙基
)
?2?
甲基
?5?
硝基
?
1H
?
咪唑加
20mL N,N
?
二甲基甲酰胺溶解，加入
0.36g
無水硫酸銅和
0.51g
抗壞血酸鈉充分攪拌后，加入
2.56g
炔丙基
?
琥珀酰亞胺酯微波輻照
1min
，停止反應；加
200mL
水充分攪拌，以乙酸乙酯為溶劑萃取三次，每次
100mL

【專利技術屬性】
技術研發人員：萬宇平，田洪蕓，崔海霞，吳希文，姚佳，羅旭軻，魏力杰，李曉芳，
申請(專利權)人：北京勤邦科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：