天麻組織培養方法技術

本發明專利技術涉及植物組織培養方法，特指一種天麻高效組織培養方法。從田間取回正在生長的天麻，用自來水沖洗，去除泥土，用７０％醫用酒精棉球擦一遍。其特征在于用飽和的漂白粉消毒１５分鐘，再用０．１％的ＨｇＣｌ＃－［２］消毒１０分鐘，再用無菌水沖洗４～６次，在超凈工作臺上用解剖刀將莖尖切成長０．５～１．０ｃｍ左右的小塊，接種到含有天冬氨酸及谷氨酸或谷氨酸鈉二者之一的培養基中，置于２５±２°培養箱中暗培養。其根據天麻的營養原理，尤其是使用了谷氨酸或味精以及天冬氨酸，代償了蜜環菌的功能，從而使試管培養“大天麻”得以實現。具有設備簡單，成本低和易操作等優點。（*該技術在2023年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及植物組織培養方法，特指一種天麻高效組織培養方法。天麻自身缺乏同化外界元素和獲得礦質營養的能力。外界礦質營養大部分靠蜜環菌(Armillariella mellea)獲得。蜜環菌可以提供天麻全生育期的生長發育的營養。通過同位素示蹤及放射自顯影，可以看出，天麻自身能夠吸收葡萄糖、氮、磷、鉀等營養。常規天麻的栽培需要接上蜜環菌的菌材；沒有菌材，天麻不可能生長，甚至腐爛。天麻與菌材伴生可使天麻正常地生長發育。天麻吸收礦質營養的關鍵就是蜜環菌的“泵”作用。大部分金屬元素的獲得主要靠蜜環菌的“泵”作用，只有少數金屬元素可被天麻細胞直接吸收。因而天麻的工廠化生產存在很多困難。植物生理學通訊，1996，32(3)，劉能俊“天麻的離體培養”；中草藥，2001，32(5)，蔡永萍等“天麻的組織培養及快速繁殖”，雖然也成功地實現了試管天麻的增殖，但是她們培養出的天麻僅是數量的增加，天麻的重量和體積增大的效果有限，個體重量一般不超過10g，不能算完整意義上的天麻組織培養。實現本專利技術目的的方法為從田間取回正在生長的天麻，用自來水沖洗，去除泥土，用70％醫用酒精棉球擦一遍。其特征在于用飽和的漂白粉消毒15分鐘，再用0.1％的HgCl2消毒10分鐘，再用無菌水沖洗4～6次，在超凈工作臺上用解剖刀將莖尖切成長0.5～1.0cm左右的小塊，接種到含有天冬氨酸及谷氨酸或谷氨酸鈉二者之一的培養基中，置于25±2℃培養箱中暗培養。其中較佳的技術方案為培養基為1/2MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.05mg/L+Glu 10～1000mg/L+Asp 5～200mg/L，含3％蔗糖，0.8％瓊脂，pH值為5.5～6.0。其中NAA為奈乙酸；6-BA為6-芐基腺嘌呤；Glu為谷氨酸，Asp為天冬氨酸；或培養基為1/2MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.05mg/L+Glu-Na 10～1000mg/L+Asp 5～200mg/L。其中Glu-Na為谷氨酸鈉。從田間取回正在生長的天麻為小白麻。小白麻培養20-30天左右形成新米麻。分離小米麻無菌轉接到培養基中，20-30天后小米麻開始生長，50-60天后可長成3-5cm的小白麻，150天后可長成10-20g的大白麻，實現了天麻的完全組織培養。上述MS培養基的成分按常規為硝酸銨1650mg/L，硝酸鉀1900mg/L，硫酸鎂(MgSO4·7H2O)370mg/L，磷酸二氫鉀(KH2PO4)170mg/L，氯化鈣(CaCl2·2H2O)440mg/L，硫酸錳(MnSO4·4H2O)22.3mg/L，硫酸鋅(ZnSO4·7H2O)8.6mg/L，硼酸(H3BO3)6.2mg/L，碘化鉀(KI)0.83mg/L，鉬酸鈉(Na2MoO4·2H2O)0.25mg/L，硫酸銅(CuSO4·5H2O)0.025mg/L，氯化鈷(CoCl2·6H2O)0.025mg/L，硫酸鐵(FeSO4·7H2O)27.8mg/L，Na2EDTA37.3mg/L，甘氨酸0.025mg/L，鹽酸硫胺素0.4mg/L，鹽酸吡哆素0.5mg/L，煙酸0.5mg/L，肌醇100mg/L。本專利技術利用蜜環菌起“泵”作用的物質是帶負電荷的氨基酸，且主要是天冬氨酸和谷氨酸的原理，通過提供含這些成分的培養液，使天麻自身可從外界環境獲得營養，促進其生長增殖，實現天麻的完全組織培養。本專利技術的優點目前還沒有人成功地培養出“大天麻”。它根據天麻的營養原理，尤其是使用了谷氨酸或味精以及天冬氨酸，代償了蜜環菌的功能，從而使試管培養“大天麻”得以實現。本專利技術具有設備簡單，成本低和易操作等優點。實施例1 培養基1為1/2MS+6-BA2mg/L+NAA 0.05mg/L+Glu 10mg/L+Asp 5mg/L。白麻培養28天形成新米麻。分離小米麻無菌轉接到培養基1中，27天后小米麻開始生長，55天后可長成3-5cm的小白麻，150天后可長成10-15g的大白麻。實施例2 培養基2為1/2MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.05mg/L+Glu 100mg/L+Asp 5mg/L。白麻培養23天形成新米麻。分離小米麻無菌轉接到培養基2中，22天后小米麻開始生長，51天后可長成3-5cm的小白麻，150天后可長成10-20g的大白麻。實施例3 培養基3為1/2MS+6 BA 2mg/L+NAA 0.05mg/L+Glu 1000mg/L+Asp 5mg/L。白麻培養22天形成新米麻。分離小米麻無菌轉接到培養基3中，22天后小米麻開始生長，53天后可長成3-5cm的小白麻，150天后可長成10-18g的大白麻。實施例4 培養基4為1/2MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.05mg/L+Glu 100mg/L+Asp 20mg/L。白麻培養21天形成新米麻。分離小米麻無菌轉接到培養基4中，21天后小米麻開始生長，51天后可長成3-5cm的小白麻，150天后可長成10-20g的大白麻。實施例5 培養基5為1/2MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.05mg/L+Glu 100mg/L+Asp 500mg/L。白麻培養21天形成新米麻。分離小米麻無菌轉接到培養基5中，21天后小米麻開始生長，51天后可長成3-5cm的小白麻，150天后可長成10-20g的大白麻。實施例6 培養基6為1/2MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.05mg/L+Glu 1000mg/L+Asp 20mg/L。白麻培養26天形成新米麻。分離小米麻無菌轉接到培養基6中，25天后小米麻開始生長，56天后可長成3-5cm的小白麻，150天后可長成10-20g的大白麻。實施例7 培養基7為1/2MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.05mg/L+Glu-Na 150mg/L+Asp 20mg/L。白麻培養23天形成新米麻。分離小米麻無菌轉接到培養基7中，23天后小米麻開始生長，49天后可長成3-5cm的小白麻，150天后可長成10-20g的大白麻。實施例8 培養基8為1/2MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.05mg/L+Glu-Na 1000mg/L+Asp20mg/L。白麻培養22天形成新米麻。分離小米麻無菌轉接到培養基9中，22天后小米麻開始生長，50天后可長成3-5cm的小白麻，150天后可長成10-20g的大白麻。實施例9 培養基9為1/2MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.05mg/L+Glu-Na 10mg/L+Asp 20mg/L。白麻培養26天形成新米麻。分離小米麻無菌轉接到培養基9中，29天后小米麻開始生長，59天后可長成3-5cm的小白麻，150天后可長成10-12g的大白麻。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
天麻高效組織培養方法，從田間取回正在生長的天麻，用自來水沖洗，去除泥土，用７０％醫用酒精棉球擦一遍，其特征在于用飽和的漂白粉消毒１５分鐘，再用０．１％的ＨｇＣｌ↓［２］消毒１０分鐘，再用無菌水沖洗４～６次，在超凈工作臺上用解剖刀將莖尖切成長０．５～１．０ｃｍ左右的小塊，接種到含有天冬氨酸及谷氨酸或谷氨酸鈉二者之一的培養基中，置于２５±２□培養箱中暗培養。

【技術特征摘要】
1.天麻高效組織培養方法，從田間取回正在生長的天麻，用自來水沖洗，去除泥土，用70％醫用酒精棉球擦一遍，其特征在于用飽和的漂白粉消毒15分鐘，再用0.1％的HgCl2消毒10分鐘，再用無菌水沖洗4～6次，在超凈工作臺上用解剖刀將莖尖切成長0.5～1.0cm左右的小塊，接種到含有天冬氨酸及谷氨酸或谷氨酸鈉二者之一的培養基中，置于25±2□培養箱中暗培養。2.根據權利要求1所述的天麻高效組織培養方法，其特征在于所述的培養基為1/2MS+6-...

【專利技術屬性】
技術研發人員：吳沿友，劉能俊，李萍萍，
申請(專利權)人：江蘇大學，
類型：發明
國別省市：32[中國|江蘇]