一種特異性結合制造技術

本發明專利技術涉及一種特異性結合

【技術實現步驟摘要】
一種特異性結合Trop2的抗體或其抗原結合片段及其制備方法和應用


[0001]本專利技術涉及嵌合抗原受體
，具體涉及一種特異性結合
Trop2
的抗體或其抗原結 合片段及其制備方法和應用
。

技術介紹

[0002]針對腫瘤，通過傳統的手術切除
、
化療
、
放射線治療，對正常組織有傷害，具有局限性， 效果有限
。
近年來出現的靶向療法在細胞分子水平上，針對已經明確的致癌位點來設計相應 的治療藥物，藥物進入體內會特異地選擇致癌位點來相結合發生作用，使腫瘤細胞特異性死 亡，不會傷及腫瘤周圍的正常組織細胞
。
[0003][0004]Trop2
是由
TACSTD2
基因編碼表達的細胞表面糖蛋白，全稱為人滋養細胞表面糖蛋白抗 原
2(Trophoblast Cell Surface Antigens 2)。Trop2
由疏水性前導肽
、
細胞外結構域
、
一個跨膜 結構域和一個胞質尾部組成，是單次跨膜糖蛋白，大小為
35.7KD
，是一類鈣離子通道信號轉 化器
。Trop2
蛋白
N
?
端為胞外域
(Trop2 EC)
，該胞外域通過一個單向跨膜螺旋
(TM)
與胞 內短尾
(Trop2 IC)
連接，從而固定于胞膜
。
其細胞質尾部有高度保守的磷脂酰肌醇
4,5
?
二磷 酸
(PIP2)
結合序列，表明
PIP2
在
Trop2
的信號轉導中起重要作用
。
除了
PIP2
結合基序外，它 還含有保守的酪氨酸和絲氨酸磷酸化位點
。
正常組織中
Trop2
不表達或者低表達，在乳腺癌
、 胃癌
、
結直腸癌
、
胰腺癌
、
前列腺癌
、
宮頸癌
、
頭頸癌和卵巢癌等多種惡性腫瘤中過表達， 可促進腫瘤的發生
、
侵襲
、
轉移和擴散等，在腫瘤生長過程中起著關鍵作用，所以
Trop2
被 認為是腫瘤免疫候選的一個靶點
。
[0005]嵌合抗原受體
(Chimeric Antigen Receptor
?
T cell
，
CAR
?
T)T
細胞是指經基因修飾后，能 以
MHC
非限制性方式識別特定目的抗原，并且持續活化擴增的
T
細胞
。2012
年國際細胞治 療協會年會中指出生物免疫細胞治療已經成為手術
、
放療
、
化療外的第四種治療腫瘤的手段， 是一種針對腫瘤細胞表面特異性抗原的新型免疫治療方法
。
大量研究表明，
CAR
?
T
細胞可以 有效的識別腫瘤抗原，引起特異性的抗腫瘤免疫應答，顯著改善患者的生存狀況
。
[0006]嵌合抗原受體
(CAR)
是
CAR
?
T
的核心部件，賦予
T
細胞
HLA
以非依賴的方式識別腫 瘤抗原的能力，這使得經過
CAR
改造的
T
細胞相較于天然
T
細胞表面受體
TCR
能夠識別更 廣泛的目標
。CAR
的基礎設計中包括一個腫瘤相關抗原
(tumor
?
associated antigen
，
TAA)
結 合區
(
通常來源于單克隆抗體抗原結合區域的
scFv
段
)
，一個胞外鉸鏈區，一個跨膜區和一 個胞內信號域
。
目標抗原的選擇對于
CAR
的特異性
、
有效性以及基因改造
T
細胞自身的安 全性來講都是關鍵的決定因素
。
[0007]單鏈抗體作為
CAR
中重要的組成部分，目前傳統上采用鼠源抗體，但由于鼠抗的異質性 會引起人抗鼠抗體反應
(Human anti
?
mouse antibody reaction
，
HAMA)
，因此會導致
CAR
?
T 在循環系統中被很快清除，失去療效
。
[0008]目前未見如本申請記載的具有良好治療效果和安全性的
Trop2
結合分子
、
基于所述
Trop2 結合分子的
CAR
修飾的免疫效應細胞的報道
。

技術實現思路

[0009]本專利技術提供一種
Trop2
結合分子，其包含抗
Trop2
抗體或其抗原結合片段，所述
Trop2 結合分子包括重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包括
SEQ ID NO:1
?
12
任一所示的重 鏈互補決定區
HCDR
，所述輕鏈可變區包括
SEQ ID NO:13
?
24
任一所示的輕鏈互補決定區 LCDR
，
[0010]在一個或多個實施方案中，所述重鏈可變區的
CDR
序列和輕鏈可變區的
CDR
序列選自 以下任一項：
[0011](1)
序列如
SEQ ID NO:1
所示的
HCDR1、
序列如
SEQ ID NO:2
所示的
HCDR2、
序列 如
SEQ ID NO:3
所示的
HCDR3
以及序列如
SEQ ID NO:13
所示的
LCDR1、
序列如 SEQ ID NO:14
所示的
LCDR2、
序列如
SEQ ID NO:15
所示的
LCDR3
；
[0012](2)
序列如
SEQ ID NO:4
所示的
HCDR1、
序列如
SEQ ID NO:5
所示的
HCDR2、
序列 如
SEQ ID NO:6
所示的
HCDR3
以及序列如
SEQ ID NO:16
所示的
LCDR1、
序列如 SEQ ID 本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.
一種
Trop2
結合分子，其特征在于，其包含抗
Trop2
抗體或其抗原結合片段，所述
Trop2
結合分子包括重鏈可變區和輕鏈可變區，所述重鏈可變區包括
SEQ ID NO:1
?
12
任一所示的重鏈互補決定區
HCDR
，所述輕鏈可變區包括
SEQ ID NO:13
?
24
任一所示的輕鏈互補決定區
LCDR
，優選地，所述重鏈可變區的
CDR
序列和輕鏈可變區的
CDR
序列選自以下任一項：
(1)
序列如
SEQ ID NO:1
所示的
HCDR1、
序列如
SEQ ID NO:2
所示的
HCDR2、
序列如
SEQ ID NO:3
所示的
HCDR3
以及序列如
SEQ ID NO:13
所示的
LCDR1、
序列如
SEQ ID NO:14
所示的
LCDR2、
序列如
SEQ ID NO:15
所示的
LCDR3
；
(2)
序列如
SEQ ID NO:4
所示的
HCDR1、
序列如
SEQ ID NO:5
所示的
HCDR2、
序列如
SEQ ID NO:6
所示的
HCDR3
以及序列如
SEQ ID NO:16
所示的
LCDR1、
序列如
SEQ ID NO:17
所示的
LCDR2、
序列如
SEQ ID NO:18
所示的
LCDR3
；
(3)
序列如
SEQ ID NO:7
所示的
HCDR1、
序列如
SEQ ID NO:8
所示的
HCDR2、
序列如
SEQ ID NO:9
所示的
HCDR3
以及序列如
SEQ ID NO:19
所示的
LCDR1、
序列如
SEQ ID NO:20
所示的
LCDR2、
序列如
SEQ ID NO:21
所示的
LCDR3
；
(4)
序列如
SEQ ID NO:10
所示的
HCDR1、
序列如
SEQ ID NO:11
所示的
HCDR2、
序列如
SEQ ID NO:12
所示的
HCDR3
以及序列如
SEQ ID NO:22
所示的
LCDR1、
序列如
SEQ ID NO:23
所示的
LCDR2、
序列如
SEQ ID NO:24
所示的
LCDR3
，優選地，所述重鏈可變區的氨基酸序列如
SEQ ID NO:25
?
28
中的任意一種所示，所述輕鏈可變區的氨基酸序列如
SEQ ID NO:29
?
32
中的任意一種所示，優選地，所述重鏈可變區和輕鏈可變區的序列選自以下任一項：
(1)
當所述重鏈可變區的氨基酸序列如
SEQ ID NO:25
所示時，所述輕鏈可變區的氨基酸序列如
SEQ ID NO:29
所示；
(2)
當所述重鏈可變區的氨基酸序列如
SEQ ID NO:26
所示時，所述輕鏈可變區的氨基酸序列如
SEQ ID NO:30
所示；
(3)
當所述重鏈可變區的氨基酸序列如
SEQ ID NO:27
所示時，所述輕鏈可變區的氨基酸序列如
SEQ ID NO:31
所示；
(4)
當所述重鏈可變區的氨基酸序列如
SEQ ID NO:28
所示時，所述輕鏈可變區的氨基酸序列如
SEQ ID NO:32
所示，優選地...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王彥，王海鷹，熊青卉，胡紅明，
申請(專利權)人：上海恒潤達生生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：