【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及微生物制劑，尤其涉及一種含益生菌的胃滯留緩釋片劑及其制備方法。
技術介紹
1、幽門螺桿菌(helicobacter?pylori，hp)是一種微厭氧、螺旋狀的革蘭氏陰性菌，常定植于人體胃部及十二指腸內。幽門螺桿菌感染可導致消化不良、胃炎、消化性潰瘍等一系列胃腸道疾病，是引發胃癌的重要因素，被世界衛生組織確定為第ι類致癌因子。幽門螺桿菌感染通常為終生感染，需要進行根除治療，否則難以自行消除。“三聯療法”和“四聯療法”是目前常規的幽門螺桿菌根除治療方法，然而隨著幽門螺桿菌的抗生素耐藥性在全球范圍內的逐漸增強，其根除成功率在不斷下降。而且，過量使用抗生素會引起腸道內菌群紊亂及其帶來的一系列不良反應。
2、益生菌是一種活性微生物，當攝入量足夠時，會對宿主產生健康益處。目前已有大量基礎研究和臨床研究聚焦于益生菌的不同健康功效，包括用于輔助幽門螺桿菌根除治療。益生菌通過增強胃黏膜屏障作用、分泌抗菌物質、競爭黏附位點干擾幽門螺桿菌定植及改善胃內炎癥等功能來提高幽門螺桿菌的根除率、降低抗生素療法帶來的不良反應及緩解癥狀。
3、專利申請cn114949202a公開了一種益生菌和蛋白質的組合物及其抗幽門螺桿菌的應用，該專利技術所述的組合物包括動物雙歧桿菌bb-12、嗜酸乳桿菌ncfm、蛋黃球蛋白粉及白藜蘆醇，該組合物具有較好的抑制幽門螺桿菌的能力，能夠顯著地清除人體內的幽門螺桿菌，減少胃癌的發生。
4、然而，現有技術中的具有抑制或清除幽門螺桿菌功效的益生菌產品的劑型大多為咀嚼片、粉劑，在胃排空的作用
技術實現思路
1、本專利技術提供一種含益生菌的胃滯留緩釋片劑及其制備方法。
2、本專利技術提供一種含益生菌的胃滯留緩釋片劑，所述片劑中，益生菌的活菌數與死菌數之比為(0.25～4)：1；所述益生菌和/或所述益生菌的代謝產物均具有抗幽門螺桿菌活性。
3、現有技術中的益生菌固體制劑大多僅關注活菌數的含量，通過盡可能地避免在加工過程中的活菌損失，保證較高的活菌數含量，以更好地發揮功效。然而，本專利技術在開發用于抗幽門螺桿菌的胃滯留緩釋片劑的過程中，意外地發現對于胃滯留緩釋片劑這種劑型，將益生菌的活菌數與死菌數控制在上述比例范圍內，有利于益生菌菌體及代謝產物在胃中以特定比例緩釋，活菌能夠提供具有抗幽門螺桿菌作用的胞外代謝產物以及與幽門螺桿菌共凝聚作用，死菌破裂后能夠提供具有抗幽門螺桿菌作用的胞內代謝產物(例如短鏈脂肪酸等)，未破裂的死菌可與幽門螺桿菌產生共凝聚作用，進而使得益生菌及其代謝產物在抗幽門螺桿菌方面更好地協同作用，顯著提高抗幽門螺桿菌的效果。
4、優選地，所述益生菌對幽門螺桿菌的相對抑菌圈直徑≥3.5±0.1cm；
5、和/或，所述益生菌與幽門螺桿菌的交互凝集率≥65％；
6、和/或，所述益生菌與幽門螺桿菌混合時的尿素酶活力od550≤0.45±0.05。
7、在保證片劑中益生菌的活菌數和死菌數之比的基礎上，對于益生菌的選擇，將益生菌及其代謝產物的抗幽門螺桿菌活性控制在上述范圍內，更有利于保證益生菌及其代謝產物在抗幽門螺桿菌方面協同作用，顯著提高抗幽門螺桿菌的效果。
8、上述抗幽門螺桿菌活性指標中，益生菌對幽門螺桿菌的相對抑菌圈直徑、益生菌與幽門螺桿菌的交互凝集率、益生菌與幽門螺桿菌混合時的尿素酶活力均可采用本領域已知的常規方法進行測定。
9、其中，益生菌對幽門螺桿菌的相對抑菌圈直徑的測定方法為：采用瓊脂擴散法測量益生菌對幽門螺桿菌的抑制活性，以mrs液體培養基作為空白對照。取200μl幽門螺桿菌的菌懸液(≥107cfu/ml)均勻涂布于哥倫比亞血瓊脂平板上，每孔加入待測液體200μl(分別為益生菌發酵上清液和空白對照)。將接好待測液體的平板置于37℃、微需氧環境下培養48～72h，培養結束后，用游標卡尺測量抑菌圈直徑，相對抑菌圈直徑＝實驗組抑菌圈直徑-對照組抑菌圈直徑。
10、益生菌與幽門螺桿菌的交互凝集率的測定方法為：采用酶標儀測定益生菌與幽門螺桿菌的交互凝集率，測定幽門螺桿菌重懸液和益生菌菌懸液的od600的數值，分別記為x1和x2。取50μl幽門螺桿菌重懸液和益生菌菌懸液等體積比混合，測定其吸光值記為xmix1，后將其放置于37℃恒溫培養箱孵育24h，在t時取上清液測定吸光值，記為xmix2。初始凝集率a0＝[(x1+x2)-2xmix1]/(x1+x2)，t時凝集率at＝[(x1+x2)-2xmix2]/(x1+x2)，交互凝集率a＝at-a0。
11、益生菌與幽門螺桿菌混合時的尿素酶活力od550的測定方法為：采用比色法測定樣品的尿素酶活性，取40μl幽門螺桿菌分別與10μl益生菌菌懸液混勻，以10μl的無菌幽門螺桿菌液體培養基為對照。將混合液加入至干凈無菌的96孔板中，37℃微需氧環境培養48h。將培養好的混合液體取出，每個孔內加入150μl的尿素酶試劑(0.9％nacl，20mmol/l尿素，14μg/ml苯酚紅，用hcl調至ph為6.8)，測定其od550的數值。
12、在本專利技術的具體實施方式中，選用多種符合上述條件的益生菌作為示例性說明。
13、在本專利技術的一種實施方式中，所述益生菌為植物乳桿菌cn2018、羅伊氏乳桿菌dsm17648和鼠李糖乳桿菌hn001。植物乳桿菌cn2018、羅伊氏乳桿菌dsm17648和鼠李糖乳桿菌hn001在片劑原料中添加量的活菌數之比優選為2：2：1。
14、在本專利技術的一種實施方式中，所述益生菌為副干酪乳桿菌mp137、動物雙歧桿菌乳亞種bb-12和短雙歧桿菌m-16v。副干酪乳桿菌mp137、動物雙歧桿菌乳亞種bb-12和短雙歧桿菌m-16v在片劑原料中添加量的活菌數之比優選為3：3：4。
15、在本專利技術的一種實施方式中，所述益生菌為卷曲乳桿菌ccfm1118、嗜酸乳桿菌ncfm和長雙歧桿菌bb536。卷曲乳桿菌ccfm1118、嗜酸乳桿菌ncfm和長雙歧桿菌bb536在片劑原料中添加量的活菌數之比優選為3：3：4。
16、在本專利技術的一種實施方式中，所述益生菌為嬰兒雙歧桿菌r0033、瑞士乳桿菌r0052和兩歧雙歧桿菌r0071。嬰兒雙歧桿菌r0033、瑞士乳桿菌r0052和兩歧雙歧桿菌r0071在片劑原料中添加量的活菌數之比優選為3：3：4。
17、經實驗驗證，在保證片劑中益生菌的活菌數和死菌數之比在(0.25～4)：1范圍內的情況下，以上益生菌復配組合中，各種益生菌及其代謝產物能夠很好地協同配合作用，實現較好的抗幽門螺桿菌效果；上述益生菌復配組合作為活性成分配合本專利技術的胃滯留緩釋片劑劑型，能夠進一步提升抗幽門螺桿菌的效果。...
【技術保護點】
1.一種含益生菌的胃滯留緩釋片劑，其特征在于，所述片劑中，益生菌的活菌數與死菌數之比為(0.25～4)：1；
2.根據權利要求1所述的含益生菌的胃滯留緩釋片劑，其特征在于，所述益生菌對幽門螺桿菌的相對抑菌圈直徑≥3.5±0.1cm；
3.根據權利要求1或2所述的含益生菌的胃滯留緩釋片劑，其特征在于，所述片劑中，所述益生菌的活菌數至少為2.0×109CFU/g。
4.根據權利要求1～3任一項所述的含益生菌的胃滯留緩釋片劑，其特征在于，所述片劑在胃內或胃液模擬液中消化30min內的膨脹直徑大于人體幽門直徑。
5.根據權利要求1～4任一項所述的含益生菌的胃滯留緩釋片劑，其特征在于，所述片劑包含以下重量份的組分：天然多糖20～60份，益生菌粉10～30份，碳酸鹽5～30份；
6.根據權利要求1～5任一項所述的含益生菌的胃滯留緩釋片劑，其特征在于，所述片劑包含以下重量份的組分：天然多糖20～60份，益生菌粉10～30份，碳酸鹽5～30份，填充劑5～30份，粘合劑0.5～10份，潤滑劑0.5～10份，其他輔料0.5～10份；
...【技術特征摘要】
1.一種含益生菌的胃滯留緩釋片劑，其特征在于，所述片劑中，益生菌的活菌數與死菌數之比為(0.25～4)：1；
2.根據權利要求1所述的含益生菌的胃滯留緩釋片劑，其特征在于，所述益生菌對幽門螺桿菌的相對抑菌圈直徑≥3.5±0.1cm；
3.根據權利要求1或2所述的含益生菌的胃滯留緩釋片劑，其特征在于，所述片劑中，所述益生菌的活菌數至少為2.0×109cfu/g。
4.根據權利要求1～3任一項所述的含益生菌的胃滯留緩釋片劑，其特征在于，所述片劑在胃內或胃液模擬液中消化30min內的膨脹直徑大于人體幽門直徑。
5.根據權利要求1～4任一項所述的含益生菌的胃滯留緩釋片劑，其特征在于，所述片劑包含以下重量份的組分：天然多糖20～60份，益生菌粉10～30份，碳酸鹽5～30份；
6.根據權利要求1～5任一項所述的含益生菌的胃滯留緩釋片劑，其特征...
【專利技術屬性】
技術研發人員：黃松，宋貝，李騰，
申請(專利權)人：深圳研序微生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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