一種從生物體中提取ＧＰ４Ｇ的方法技術

本發明專利技術提供了一種從生物體中提取ＧＰ４Ｇ（四磷酸二鳥苷）的方法，采用以下步驟對ＧＰ４Ｇ進行提取：原料預處理、脫水、破碎、浸取、中和、吸附、洗脫、脫鹽和真空濃縮，借助于本發明專利技術提供的技術方案，可以達到收率高、生產成本低，有利于工業化生產的優點。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種提取生物體中活性物質的方法，特別涉及一種從生物體中提取 GP4G(四磷酸二鳥苷)的方法。
技術介紹
GP4G(P1, P4-Di (guanosine 5' ) tetraphosphate)，化學名為四磷酸二鳥苷，在化 妝界被稱為細胞活化再生素，能滲透至真皮層，具有活化肌膚，幫助修復受損細胞，加強細 胞的再生功能，讓細胞之間的養分疏通效率更高；促進膠原蛋白成分合成，提升細胞整體活 力，延緩皺紋產生，改善和淡化皺紋，幫助肌膚恢復緊致與彈性。在化妝品行業具有廣闊的 市場前景。目前有報道的關于GP4G的提取方法見于F. J. FINAM0RE和A. H. WARNER于1963 年在 The Journal of Biological Chemistry 發表白勺文章 The occurrence of P1， P4-Diguanosine 5' -Tetraphosphate inBrine shrimp eggs。但是*艮據此文獻才艮道的提 取GP4G的方法，其GP4G的收率低，設備要求條件高，生產成本高，不利于工業化生產。
技術實現思路
鑒于此，本專利技術的目的是提供一種從生物體中提取GP4G的方法，與文獻中方法相 比，具有收率高、生產成本低，有利于工業化生產的特點。本專利技術采用以下的技術方案用含有GP4G的生物材料作為原材料，進行以下步驟 的操作原料預處理稱取1000kg 2000kg生物原材料，用100 200目的篩網進行篩選，去除雜物，再進行清洗；脫水將處理后的生物原材料放置到設有100 200目篩網的傳送機上進行脫水， 并以0. 5m/min 2m/min的速度傳送；破碎將脫水后的生物原材料進行破碎；浸取將破碎后的生物原材料的折純干重與lmol/L 3mol/L的_10°C 20°C的 酸性溶液按1 1 10kg L的比例混合，充分攪拌30min 120min，分離上清液；中和真空濃縮1 10倍后，用2mol/L 5mol/L堿性溶液調整浸取后的上清液 pH至7 8，收集固體析出物，去除清液，將固體析出物按5% 30%濃度采用蒸餾水或去 離子水溶解，再采用2mol/L 5mol/L酸性溶液調清液pH至2 5，準備上柱；吸附上述溶液用強酸性陽離子交換樹脂進行吸附，吸附飽和后，注入脫鹽水或去 離子水進行壓料；洗脫用0. 5mol/L 2mol/L的酸性洗脫劑進行洗脫解吸，并分段收集目標產物；脫鹽然后采用弱堿性陰離子交換樹脂進行過流工藝脫色脫鹽處理；真空濃縮在操作壓力為-0. 085MPa _0. 092MPa，溫度為30°C 60°C的真空狀 態下，當溶液中GP4G的含量達到6%時，開始收集GP4G。3所述含有gp4g的生物材料為含高鹽及含高礦物或耐高鹽的海洋浮游生物及內陸 湖里的殼類生物。優選為含高鹽及含高礦物或耐高鹽的鹵蟲或鹵蟲卵。所述浸取步驟中用到的酸性溶液為hc1，hcio4，h2so4, hno3, hc00h, ch3c00h中的一 種或幾種。所述浸取步驟中上清液的分離方法為虹吸、離心、過濾中的一種或幾種方式。所述中和步驟中所用到的堿性溶液為naoh，k0h，氨水中的一種或幾種。所述洗脫步驟中的酸性洗脫劑為甲酸、乙酸、HC1、H2S04中的一種或幾種。所述最終獲得的gp4g產物為液態或固態，優選為液態。在實際操作中，浸取過程中用到的酸性溶液中經常加入NaCl，(NH4)2S04, KC1等鹽 類用來加強浸取的效果；在第一次將上清液浸取完畢后，還有一些固體不溶物剩余，將這些 固體不溶物和酸性溶液按1 1 10的比例進行二次、三次浸取，后兩次浸取液可依次作 為下一批次的第一次、第二次浸取液進行使用，這樣操作的好處可以降低溶劑用量和廢水 量，同時可以提高浸提收率和節省浸提時間。再將剩余的固體不溶物用板框過濾機，操作壓 力為lOMPa 20MPa進行過濾處理，收集上清液，濾渣用于其他用途。得到真空濃縮的gp4g后，可按最終產品不同的規格要求，分別作后續加工。本專利技術與文獻中提到的方法相比，具有以下優點(1)本專利技術沒有采用直接調ph 沉淀的方法，而是采取先濃縮后調ph，這樣大大提高了收率，同時也節省了堿的用量；(2) 在采用陽離子柱吸附時是在吸附飽和后才進行壓水洗脫，這樣增加了樹脂吸附量，提高了 使用效率，降低了成本；(3)脫鹽時是采用弱堿性陰離子交換樹脂進行過流工藝脫色脫鹽 處理，而不是文獻中提到的木炭吸附或透析除鹽，這樣可以同時起到脫鹽和脫色的作用，提 高了效率。另外，在實際操作中還采用板框過濾替代高速離心和布氏漏斗的工藝，操作條件 要求低，利于工業化、規模化生產。綜上所述，本專利技術具有收率高、生產成本低，利于工業化 生產的特點。具體實施例方式結合具體實施例進行說明。實施例1通過以下步驟進行gp4g的提取第一步稱取1000kg鹽水豐年蟲卵，用100目篩網的機械振動篩振動，去除塵土和 細小的固體雜質，鹵蟲卵及比較大的固體雜質留在篩上，然后進入單向流動清洗池，利用比 重不同，在池另一端將浮在水面的鹵蟲卵采用120目的篩網進行撈取；第二步將撈取的鹽水豐年蟲卵放置在有120目篩網、30°傾角的帶式傳送機上， 以2m/min的速度進行傳送，使鹵蟲卵帶有的水份通過篩網漏下，而且傳送機的另一端與粉 碎機進料口相連，使得滴干水的鹵蟲卵直接進入粉碎機；第三步通過粉碎機將蟲卵破碎到其顆粒大小能通過140目的篩網為佳；第四步將破碎后的鹽水豐年蟲卵的折純干重與lmol/L的_4°C的酸性溶液HC1 按1 lkg L的比例混合，充分攪拌30min，采用離心方式分離上清；第五步真空濃縮2倍后，用2mol/L堿性溶液調整浸取后的上清液pH至7 8，收 集固體析出物，去除清液，將固體析出物按30%濃度用蒸餾水或去離子水溶解，再用2mol/L酸性溶液調清液pH至2 5，準備上柱；第六步上述中和后的溶液以0. 5BV/h速度在732強酸性陽離子交換樹脂進行上 柱吸附，吸附飽和后，停止上柱，然后采用脫鹽水進行壓料，壓液顏色變淡停止，壓料水進行 串柱吸附；第七步用0. 5mol/L的HC1酸性洗脫劑進行洗脫解吸，分段收集目標產物；第八步上柱速度為0. 5BV/h，采用弱堿性陰離子交換樹脂進行過流工藝脫色脫 鹽處理；至收集溶液pH為6. 5時停止脫鹽處理；第九步在真空操作壓力為-0. 090MPa，溫度為40°C的真空狀態下，當溶液中GP4G 的含量達到6%時，開始收集GP4G。用1000kg鹽水豐年蟲卵采用文獻中的方法進行提取，將所得的GP4G收率與本發 明中GP4G的收率進行對比，見下表 實施例2通過以下步驟進行GP4G的提取第一步稱取1500kg的Artemia Salina蟲卵，用100目篩網的機械振動篩振動， 去除塵土和細小的固體雜質，鹵蟲卵及比較大的固體雜質留在篩上，然后進入單向流動清 洗池，利用比重不同，在池另一端將浮在水面的鹵蟲卵采用120目的篩網進行撈取；第二步將撈取的鹵蟲卵放置在有120目篩網、30°傾角的帶式傳送機上，以lm/ min的速度進行傳送，使鹵蟲卵帶有的水份通過篩網漏下，而且傳送機的另一端與粉碎機進 料口相連，使得滴干水分的鹵蟲卵直接進入粉碎機；第三步通過粉碎機將蟲卵破碎到本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種從生物體中提取ＧＰ４Ｇ的方法，其特征在于：采用含有ＧＰ４Ｇ的生物材料作為原材料，進行以下步驟的操作：原料預處理：稱取１０００ｋｇ～２０００ｋｇ生物原材料，用１００～２００目篩網進行篩選，去除雜物，再進行清洗；脫水：將處理后的生物原材料放置到設有１００～２００目篩網的傳送機上進行脫水，并以０．５ｍ／ｍｉｎ～２ｍ／ｍｉｎ的速度傳送；破碎：將脫水后的生物原材料進行破碎；浸取：將破碎后的生物原材料的折純干重與１ｍｏｌ／Ｌ～３ｍｏｌ／Ｌ的－１０～２０℃的酸性溶液按１∶１～１０ｋｇ∶Ｌ的比例混合，充分攪拌３０ｍｉｎ～１２０ｍｉｎ，分離上清液；中和：真空濃縮１～１０倍后，采用２ｍｏｌ／Ｌ～５ｍｏｌ／Ｌ堿性溶液調整浸取后的上清液ｐＨ至７～８，收集固體析出物，去除清液，將固體析出物按５％～３０％濃度用蒸餾水或去離子水溶解，再用１～５ｍｏｌ／Ｌ酸性溶液調清液ｐＨ至２～５，準備上柱；吸附：溶液用強酸性陽離子交換樹脂進行吸附，吸附飽和后，注入脫鹽水或去離子水進行壓料；洗脫：用０．５ｍｏｌ／Ｌ～２ｍｏｌ／Ｌ的酸性洗脫劑進行洗脫解吸，并分段收集目標產物；脫鹽：然后采用弱堿性陰離子交換樹脂進行過流工藝脫色脫鹽處理；真空濃縮：在真空操作壓力為－０．０８５ＭＰａ～－０．０９２ＭＰａ，溫度為３０℃～６０℃的真空狀態下濃縮，當溶液中ＧＰ４Ｇ的含量達到６％時，開始收集ＧＰ４Ｇ。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：鄭春陽，魏國祥，
申請(專利權)人：天津強微特生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：12[中國|天津]