【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于電化學(xué)免疫傳感器，具體涉及一種在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適配體的方法、碳電極及電化學(xué)免疫傳感器。
技術(shù)介紹
1、由于具有化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，導(dǎo)電性好的特點(diǎn)，并且具有成本低，可工業(yè)化大量生產(chǎn)的優(yōu)勢(shì)，所以碳材料經(jīng)常被制作成電化學(xué)反應(yīng)中的所需要的電極。而在生物化學(xué)的檢測(cè)中，由于碳材料易于功能化，電壓窗口范圍寬的特性，碳電極常被進(jìn)行材料表面的化學(xué)修飾，通過化學(xué)修飾的手段將一些免疫活性物質(zhì)（如抗體蛋白、酶等）偶聯(lián)在碳電極上。
2、目前，常用的辦法是對(duì)碳材料的表面進(jìn)行羧基化處理，使碳材料表面帶有游離的羧酸根，其中羧基化的方法有很多，包括：表面等離子體刻蝕氧化碳元素形成羧酸根，在碳材料表面增加鏈接蛋白的物質(zhì)（如標(biāo)記羧基的peg等）。蛋白質(zhì)通過與游離的羧酸根形成酰胺鍵的方式偶聯(lián)在碳材料表面。
3、如專利申請(qǐng)文件cn109507256a，公開了一種檢測(cè)癌胚抗原的無標(biāo)記電化學(xué)發(fā)光適配體傳感器的制備方法，專利申請(qǐng)文件cn103257167a，公開了一種核酸適配體用于腫瘤細(xì)胞高靈敏檢測(cè)的電極修飾方法。但上述方法只是關(guān)注蛋白質(zhì)是否偶聯(lián)到碳材料表面，并未關(guān)注蛋白質(zhì)在碳材料上偶聯(lián)修飾的數(shù)量是否足夠以及碳材料表面蛋白質(zhì)團(tuán)聚的問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、基于此，本專利技術(shù)提供一種在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適配體的方法，來解決上述蛋白質(zhì)在碳材料上偶聯(lián)修飾的數(shù)量不足以及碳材料表面蛋白質(zhì)團(tuán)聚的問題，從而使得該種技術(shù)進(jìn)一步推向商業(yè)化市場(chǎng)應(yīng)用。
2、本專利技術(shù)一方面提供一種在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適
3、（1）將碳電極浸泡在1-芘丁酸n-羥基琥珀酰亞胺酯的甲醇溶液中，取出后用pbs溶液清洗表面，在室溫下自然干燥；
4、（2）將待偶聯(lián)的蛋白適配體溶于由pbs、?氯化鉀與tween-80組成的混合溶液中，并將溶液ph調(diào)節(jié)至低于蛋白適配體等電點(diǎn)以下，渦旋震蕩均勻，得到蛋白質(zhì)溶液；
5、（3）將步驟（1）處理過的碳電極作為負(fù)極，未經(jīng)處理過的純碳電極作為正極，共同置于步驟（2）中得到的蛋白質(zhì)溶液中，在兩電極之間通直流電進(jìn)行處理；
6、（4）將步驟（3）處理過的碳電極用pbs溶液清洗，之后用去離子水清洗，室溫干燥。
7、所述方法基于使用1-芘丁酸n-羥基琥珀酰亞胺酯在碳材料表面羧基化的方式，通過優(yōu)化蛋白質(zhì)溶液組成，結(jié)合直流電處理，利用電極遷移，使蛋白適配體與羧酸根形成酰胺鍵，使蛋白適配體偶聯(lián)在碳材料電極表面，優(yōu)化蛋白質(zhì)在碳材料表面偶聯(lián)修飾的效果。其中蛋白質(zhì)溶液中pbs為蛋白質(zhì)緩沖溶液，用于調(diào)節(jié)ph；氯化鉀作為支持電解質(zhì)用于蛋白質(zhì)與羧酸根偶聯(lián)，tween-80為表面活性劑用于防止蛋白質(zhì)在溶液中沉淀聚合，另外蛋白質(zhì)溶液ph低于偶聯(lián)適配體等電點(diǎn)可以使適配體帶正電荷，便于實(shí)現(xiàn)電極遷移。
8、本專利技術(shù)所述的碳電極可以是常規(guī)的各種碳材料電極；優(yōu)選地，所述碳納米管材料電極，石墨烯材料電極，玻碳電極，或絲網(wǎng)印刷碳電極。
9、優(yōu)選地，步驟（1）中，1-芘丁酸n-羥基琥珀酰亞胺酯的甲醇溶液濃度為5-10mmol/l，如5mmol/l、6mmol/l、7mmol/l、8mmol/l、9mmol/l、10mmol/l等，浸泡時(shí)間≥30min，中pbs溶液濃度為0.01m。
10、優(yōu)選地，步驟（2）中，所述混合溶液由0.01m?pbs、0.1m氯化鉀與0.01wt%tween-80按照體積比1：1：1混合得到。
11、進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟（2）中，所述蛋白質(zhì)適配體在所述蛋白質(zhì)溶液中的濃度為100μg/ml。
12、優(yōu)選地，步驟（3）中，通直流電時(shí)間≥10min，如10min、15min、20min、30min等。電壓范圍為0.1v-1.0v，如0.1v，0.2v，0.3v，0.4v，0.5v，0.6v，0.7v，0.8v，0.9v，1v等。
13、優(yōu)選地，步驟（4）中，pbs溶液濃度為0.01m-0.1m，如0.01m，0.02m，0.03m，0.04m，0.05m，0.05m，0.07m，0.08m，0.09m，0.1m等。
14、本專利技術(shù)的另一方面還提供了一種碳電極，采用上述的在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適配體的方法制備得到。
15、本專利技術(shù)的再一方面，還提供了一種由上述的碳電極制備得到電化學(xué)免疫傳感器。
16、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)具有以下有益效果：
17、本專利技術(shù)所述方法基于使用1-芘丁酸n-羥基琥珀酰亞胺酯在碳材料表面羧基化的方式，通過優(yōu)化蛋白質(zhì)溶液組成，結(jié)合直流電處理，優(yōu)化了蛋白質(zhì)在碳材料表面偶聯(lián)修飾的效果，使得蛋白質(zhì)在碳材料表面的偶聯(lián)數(shù)量更加豐富，在碳材料表面修飾的蛋白質(zhì)分布更加均勻。本專利技術(shù)在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適配體的方法得到的碳電極可用于電化學(xué)免疫傳感器等應(yīng)用領(lǐng)域。
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1.一種在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適配體的方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適配體的方法，其特征在于，所述碳電極為碳納米管材料電極，石墨烯材料電極，玻碳電極，或絲網(wǎng)印刷碳電極。
3.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適配體的方法，其特征在于，步驟（1）中，1-芘丁酸N-羥基琥珀酰亞胺酯的甲醇溶液濃度為?5-10?mmol/L，浸泡時(shí)間≥30min，PBS溶液濃度為0.01M。
4.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適配體的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述混合溶液由0.01M?PBS、0.1M氯化鉀與0.01wt%Tween-80按照體積比1：1：1混合得到。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適配體的方法，其特征在于，步驟（2）中，蛋白質(zhì)適配體在所述蛋白質(zhì)溶液中的濃度為100μg/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適配體的方法，其特征在于，步驟（3）中，通直流電時(shí)間≥10min，電壓范圍為0.1V-1.0V。
7.根據(jù)權(quán)利要
8.一種碳電極，其特征在于，采用如權(quán)利要求1-7任一所述的在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適配體的方法制備得到。
9.一種電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于，由權(quán)利要求8所述的碳電極制備得到。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適配體的方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適配體的方法，其特征在于，所述碳電極為碳納米管材料電極，石墨烯材料電極，玻碳電極，或絲網(wǎng)印刷碳電極。
3.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適配體的方法，其特征在于，步驟（1）中，1-芘丁酸n-羥基琥珀酰亞胺酯的甲醇溶液濃度為?5-10?mmol/l，浸泡時(shí)間≥30min，pbs溶液濃度為0.01m。
4.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的在碳電極表面偶聯(lián)蛋白適配體的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述混合溶液由0.01m?pbs、0.1m氯化鉀與0.01wt%tween-80按照體積比1：1：1混合...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：夏銘辰，林炳然，姚政，吳澤超，鄭永旭，曹健，張秀娟，葉璐思，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：廣州市賽特檢測(cè)有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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