【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥，具體涉及特異性結合sars-cov-2?rbd結構域的單克隆抗體或其抗原結合片段、其制備方法、相關產品及其在制備預防、治療和/或檢測新冠病毒感染的藥物中的應用。
技術介紹
1、
2、由于暫時沒有有效的特效藥，目前防治新型冠狀病毒的方式主要為接種疫苗。當面臨病毒攻擊時，記憶t細胞和記憶b細胞是提供主要的保護作用，而其中更加重要的就是中和抗體。面對已感染人群，fda批準使用抗病毒藥物veklury(remdesivir)或免疫調節劑olumiant(baricitinib)進行治療或使用抗體治療。
3、新型冠狀病毒初期，fda批準使用高滴度的抗sars-cov-2的恢復期血清進行治療，隨著研究的不斷進行，實驗人員不斷分離出了有效的中和單抗，除單獨使用外也可以將兩個抗體組合使用形成抗體雞尾酒療法。目前，fda批準的抗體雞尾酒療法包括regen-cov(casirivimab和imdevimab)，ly-cov016+ly-cov555(bamlanivilab+etesevimab),evusheld(tixagevimab+cilgavimab)以及單抗s309(sotrovimab)，ly-cov1404(bebtelovimab)；這些抗體均靶向sars-cov-2病毒表面s蛋白的受體結合區域(rbd)，該區域是直接與受體結合的區域，也是中和抗體的重要靶點之一。
4、隨著病毒的不斷變異，目前已有的治療性抗體出現了對新的突變株及流行株的中和能力降低，防治能力變差的情況。根
技術實現思路
1、專利技術目的
2、本專利技術的目的在于提供一種特異性結合sars-cov-2?rbd結構域的單克隆抗體或其抗原結合片段、其制備方法、相關產品及其在制備預防、治療和/或檢測新冠病毒感染的藥物中的應用。
3、解決方案
4、智飛(zf2001)是國內首個基于sars-cov-2?rbd區設計的重組蛋白疫苗，具有良好的免疫原性和安全性。除sars-cov-2原型毒株外，zf2001也能夠提供很好的針對其他變異株的保護。中國在2020年進行了緊急批準使用，目前，該疫苗已在四個國家中完成了三期臨床試驗。
5、根據目前fda批準使用的高中和治療性抗體均靶向rbd的情況，通過從免疫sars-cov-2rbd區域蛋白疫苗的志愿者體內分離高中和水平抗體無疑是一個更加快速的開發新治療性抗體的方法。因此，本申請的專利技術人嘗試從免疫zf2001的志愿者體內分離能夠廣譜中和目前最值得關注的突變株(voi?strains)的抗體。通過抗體功能篩選，專利技術人獲得了多株高中和性、高親和力的抗體，其可作為新冠病毒原型株及其一系列變異株的治療性抗體或其免疫檢測試劑使用。
6、具體地，本專利技術提供了如下技術方案：
7、第一方面，本專利技術提供了特異性結合sars-cov-2?rbd結構域的單克隆抗體或其抗原結合片段，其包含如下重鏈可變區和/或輕鏈可變區：
8、所述重鏈可變區包含：
9、氨基酸序列分別如seq?id?no:1、seq?id?no:2和seq?id?no:3所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；或
10、氨基酸序列分別如seq?id?no:11、seq?id?no:12和seq?id?no:13所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；
11、所述輕鏈可變區包含：
12、氨基酸序列分別如seq?id?no:4、seq?id?no:5和seq?id?no:6所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或
13、氨基酸序列分別如seq?id?no:14、seq?id?no:15和seq?id?no:16所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。
14、在優選實施方案中，所述單克隆抗體或其抗原結合片段包含：
15、(i)重鏈可變區，其具有氨基酸序列分別如seq?id?no:1、seq?id?no:2和seqidno:3所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和，輕鏈可變區，其具有氨基酸序列分別如seq?id?no:4、seq?id?no:5和seq?id?no:6所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；
16、或者包含：
17、(ii)重鏈可變區，其具有氨基酸序列分別如seq?id?no:11、seq?id?no:12和seqidno:13所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和，輕鏈可變區，其具有氨基酸序列分別如seq?idno:14、seq?id?no:15和seq?id?no:16所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。
18、在進一步優選的具體實施方案中，所述單克隆抗體或其抗原結合片段包含：
19、(i)重鏈可變區，其包含如seq?id?no:7所示的氨基酸序列或與seq?id?no:7所示的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，或由其組成；和，輕鏈可變區，其包含如seq?id?no:8所示的氨基酸序列或與seq?id?no:8所示的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，或由其組成；
20、或者包含：
21、(ii)重鏈可變區，其包含如seq?id?no:17所示的氨基酸序列或與seq?id?no:17所示的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，或由其組成；和，輕鏈可變區，其包含如seq?id?no:18所示的氨基酸序列或與seq?id?no:18所示的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，或由其組成。
22、作為進一步優選的具體實施方案的示例，所述單克隆抗體或其抗原結合片段包含：
23、(i)重鏈可變區，其氨基酸序列如seq?id?no:7所示；和，輕鏈可變區，其氨基酸序列如seq?id?no:8所示；
24、或者包含：
25、(ii)重鏈可變區，其氨基酸序列如seq?id?no:17所示；和，輕鏈可變區，其氨基酸序列如seq?id?no:18所示。
26、在本專利技術的單克隆抗體或其抗原結合片段的上述實施方案中，所述抗體或其抗原結合片段還包括恒定區；
27、優選地，所述恒定區為選自以下的任意一種：igg、iga或igm抗體的恒定區；
28、進一步優選地，所述恒定區為igg抗體的恒定區。
29、在更進一步優選的具體實施方案中，所本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.特異性結合SARS-CoV-2RBD結構域的單克隆抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區和/或輕鏈可變區，其中，
2.如權利要求1所述的單克隆抗體或其抗原結合片段，其中，所述抗體或其抗原結合片段包含：
3.如權利要求1或2所述的單克隆抗體或其抗原結合片段，其中，所述抗體或其抗原結合片段包含：
4.如權利要求3所述的單克隆抗體或其抗原結合片段，其中，所述抗體或其抗原結合片段包含：
5.如權利要求1-4任一項所述的單克隆抗體或其抗原結合片段，其中，所述抗體或其抗原結合片段還包括恒定區；
6.如權利要求1-5任一項所述的單克隆抗體或其抗原結合片段，其中，所述抗體或其抗原結合片段包含：
7.如權利要求6所述的單克隆抗體或其抗原結合片段，其中，所述抗體或其抗原結合片段包含：
8.如權利要求1-7任一項所述的單克隆抗體或其抗原結合片段，其中，所述抗原結合片段選自Fab、Fab'、Fab'-SH、Fv、scFv、F(ab')2、Fd、dAb、互補決定區片段、人抗體、嵌合抗體或雙特異或多特異抗體。
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