【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術屬于生物，具體涉及一種分支結構抗菌肽kw制備方法和應用。
技術介紹
1、抗菌肽(antimicrobial?peptides，amps)是廣泛存在于生物體天然免疫防御系統(tǒng)的一類小分子多肽類物質(zhì)，具有廣譜抗菌活性，作用迅速，因其獨特的抗菌作用機制被視為傳統(tǒng)抗生素的理想替代藥物。近年來，研究者發(fā)現(xiàn)一種新型抗菌肽，即分支肽，又稱多聚肽或樹狀多肽，其因具有高生物學活性以及高穩(wěn)定性，在藥物遞送、疾病治療、基因載體等領域的應用具有良好的應用前景。由于天然抗菌肽或傳統(tǒng)全新設計的線性抗菌肽往往存在活性不強、代謝不穩(wěn)定、毒性大等缺點，導致其在畜牧業(yè)開發(fā)與應用受到諸多限制。
技術實現(xiàn)思路
1、基于以上不足之處，本專利技術的目的是提供一種分支結構抗菌肽kw制備方法，利用lys具有兩個n端，一個c端的特點，構建分支狀結構，與相同氨基酸組成的線性多肽相比，分支抗菌肽仍能保持一定的抗菌活性，顯著降低毒性，解決了現(xiàn)有的天然抗菌肽或全新設計的傳統(tǒng)線性抗菌肽活性低，毒性強的問題。
2、本專利技術所采用的技術方案如下：一種分支結構抗菌肽kw，包括一個lys和兩組α-螺旋結構的七肽基團，所述的七肽基團的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，第一組七肽基團的第7位的arg的c端與lys的ε-n端相連，第二組七肽基團的第1位的leu的n端與lys的c端相連，并且所述的抗菌肽kw的c端采用氨基酰胺化。
3、進一步的，如上所述的一種分支結構抗菌肽kw，其分子式如式(i)所示，
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5、本專利技術的另一目的在于提供如上所述的一種分支結構抗菌肽kw的制備方法，方法步驟如下：
6、步驟一、利用α-螺旋七肽重復序列“abcdefg”作為基礎，選擇leu放置在a、d位置上形成leu拉鏈結構提供一定的疏水性；在c和f位置添加trp，使得trp-trp相互作用提高α-螺旋結構穩(wěn)定性，從而提高抗菌活性，其余位置添加arg以增加正電荷數(shù)，得到七肽基團序列如seq?id?no.1所示，將第一組七肽基團的第7位的arg的c端與lys的ε-n端相連，第二組七肽基團的第1位的leu的n端與lys的c端相連，得到多肽，并在所述的多肽的c端采用氨基進行酰胺化，以提供足夠正電荷保證抗菌活性；
7、步驟二、將所述的多肽采用固相化學合成法進行合成，再經(jīng)過反相高效液相色譜純化和質(zhì)譜鑒定后，進一步對所述的多肽進行抑菌活性檢測和溶血活性檢測，最后命名為抗菌肽kw。
8、本專利技術的另一目的是提供一種如上所述的分支結構抗菌肽kw在制備治療革蘭氏陽性菌和/或革蘭氏陰性菌感染性疾病的藥物中的應用。
9、進一步的，所述的革蘭氏陰性菌為大腸桿菌、綠膿桿菌或/和鼠傷寒沙門氏菌。
10、進一步的，所述的革蘭氏陽性菌為金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌或/和糞腸球菌。
11、本專利技術具有如下優(yōu)點及效果：本專利技術僅利用15個氨基酸即可達到良好的抗菌效果，有效降低了合成成本，同時顯著降低了抗菌肽的毒性。對得到的分支結構抗菌肽kw進行抗菌和溶血活性檢測，發(fā)現(xiàn)分支結構抗菌肽kw對大腸桿菌、綠膿桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、糞腸球菌等幾種測定的革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌都具有較高抑菌活性。雖分支結構抗菌肽kw抑菌活性稍低于線性抗菌肽w，但分支結構抗菌肽對所有待測菌株的最小抑菌濃度仍保持在8-16μm范圍內(nèi)。分支結構抗菌肽kw治療指數(shù)為30.00，具有良好的細胞選擇性，其ti值相較于線性抗菌肽w的治療指數(shù)(ti＝10.56)提高3倍。綜上所述，說明了將線性抗菌肽改造成分支結構抗菌肽這一策略能夠顯著改善線性多肽帶來的毒性大問題，在保證一定的抗菌活性基礎下進一步提高細胞選擇性。除此之外，分支結構抗菌肽kw有潛力成為治療革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌感染的廣譜抗菌藥物，并有很高的應用價值。
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1.一種分支結構抗菌肽KW，其特征在于：包括一個Lys和兩組α-螺旋結構的七肽基團，所述的七肽基團的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示，第一組七肽基團的第7位的Arg的C端與Lys的ε-N端相連，第二組七肽基團的第1位的Leu的N端與Lys的C端相連，并且所述的抗菌肽KW的C端采用氨基酰胺化。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種分支結構抗菌肽KW，其分子式如式(I)所示，
3.根據(jù)權利要求1所述的一種分支結構抗菌肽KW的制備方法，其特征在于，方法步驟如下：
4.根據(jù)權利要求1所述的一種分支結構抗菌肽KW在制備治療革蘭氏陽性菌和/或革蘭氏陰性菌感染性疾病的藥物中的應用。
5.根據(jù)權利要求4所述的應用，其特征在于：所述的革蘭氏陰性菌為大腸桿菌、綠膿桿菌或/和鼠傷寒沙門氏菌。
6.根據(jù)權利要求4所述的應用，其特征在于：所述的革蘭氏陽性菌為金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌或/和糞腸球菌。
【技術特征摘要】
1.一種分支結構抗菌肽kw，其特征在于：包括一個lys和兩組α-螺旋結構的七肽基團，所述的七肽基團的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，第一組七肽基團的第7位的arg的c端與lys的ε-n端相連，第二組七肽基團的第1位的leu的n端與lys的c端相連，并且所述的抗菌肽kw的c端采用氨基酰胺化。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種分支結構抗菌肽kw，其分子式如式(i)所示，
3.根據(jù)權利要求1所述的...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：呂銀鳳，薛萌，卞譯烽，楊城義，黃欣月，單安山，
申請(專利權)人：東北農(nóng)業(yè)大學，
類型：發(fā)明
國別省市：
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