【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及分子生物學dna標記，具體涉及用于鑒定溫州蜜柑易耐浮皮的snp分子標記及其應用。
技術介紹
1、浮皮是柑橘類果皮結構的生理性失調，是一種生理性障礙，常在果實成熟和采后貯藏過程中發生，具體表現為白皮層崩潰，包裹果肉的囊瓣膜與果皮分離后浮起，在果皮與囊瓣膜之間產生空隙[1]，同時果皮厚度增加，外表面粗糙不平，內表面變得松散[2]。嚴重時果皮果肉完全分離、果肉汁胞皺縮粒化、營養物質大量減少、果實風味劣變、完全失去食用價值和商品價值[3]。
2、果實浮皮是一個復雜的生理生化過程，與果實生長發育、糖酸代謝、酶含量、內源激素水平等有較密切的關聯，同時也與柑橘種類、品種、砧木、樹體生長環境、栽培管理、采收成熟度、采后貯藏環境等因素有著緊密的聯系。目前，國內外學者對柑橘果實浮皮的研究主要集中在生理生化變化、細胞形態學變化、栽培技術和防治措施等方面，多探討柑橘浮皮的相關影響因素，但對其發生機理尤其分子機理有待進一步闡明[4]。
3、浮皮指數是對柑橘浮皮易耐程度的體現，浮皮指數統計按圖1[4]所示方法進行，通過果實縱切面判斷浮皮程度，分為浮皮無(0級)、浮皮輕(1級，僅果柄端浮皮)、浮皮中等(2級，果柄端與兩側均浮皮)、浮皮重(3級，全果浮皮)4個等級，按以下公式計算：浮皮指數＝σ(浮皮級果數×代表級值)/(調查總果數×浮皮最重一級的代表值)。浮皮指數最高值為100，其值越高浮皮程度越嚴重，稱為易浮皮柑橘，反之稱為耐浮皮柑橘。當前對于浮皮指數易耐程度的分辨值并無明確定義，通常將完熟果實浮皮指數40作為易耐浮皮的
4、溫州蜜柑俗稱無核橘，因其優質豐產，栽培容易，是浙江省栽培最多的柑橘類品種。其遺傳背景相似，浮皮狀況不一，如有易浮皮的宮川品種，耐浮皮的上野品種。
5、單核苷酸多態性(snp)是指在基因組水平上由單個核苷酸變異引起的dna序列多態性。snp標記具有準確性高、變異豐富、操作簡單等優點，被廣泛應用于動植物個體鑒別和種源鑒定。
6、目前對于柑橘浮皮的鑒定只能通過將柑橘切開進行主觀判斷，通過其他物理方法及分子生物學手段不能進行有效地辨別。
7、[1]martinelli?f,ibanez?a?m,reagan?r?l,et?al.stress?responses?incitrus?peel:comparative?analysis?of?host?responses?to?huanglongbing?diseaseand?puffing?disorder[j].scientia?horticulturae,2015,192:409-420.
8、[2]栗山隆明.溫州ミカンの柚肌,浮皮の發現と防止策[j].農業およひ蕓，1972，47(6)：41-44.
9、[3]石學根，徐建國，張林，等.溫州蜜柑完熟果實的浮皮與貯藏性之間的關系[j].浙江農業學報，2008，20(4)：304-307.
10、[4]sharmar?r,awasthio?p,kumar?k.pattern?of?phenolic?content,antioxidant?activity?and?senescence-related?enzymes?in?granulated?vs?non-granulated?juice-sacs?of‘kinnow’mandarin(citrus?nobilis?x?c.deliciosa)[j].journal?of?food?science&technology,2016,53(3):1525.
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供用于鑒定溫州蜜柑易耐浮皮的snp分子標記及其應用，以解決現有技術的不足。
2、本專利技術通過以下技術方案實現：
3、本專利技術第一方面提供了一種用于鑒定溫州蜜柑易耐浮皮的snp分子標記，選自第一snp標記、第二snp標記、第三snp標記、第四snp標記、第五snp標記、第六snp標記中的一個或多個；
4、基于柑橘參考基因組甜橙v3版，所述第一snp標記位于8號染色體21550510bp處的堿基，耐浮皮性狀為純合基因型g/g，易浮皮性狀為雜合基因型g/a；
5、基于柑橘參考基因組甜橙v3版，所述第二snp標記位于8號染色體21550535bp處的堿基，耐浮皮性狀為純合基因型c/c，易浮皮性狀為雜合基因型c/a；
6、基于柑橘參考基因組甜橙v3版，所述第三snp標記位于8號染色體21550542bp處的堿基，耐浮皮性狀為純合基因型a/a，易浮皮性狀為雜合基因型a/g；
7、基于柑橘參考基因組甜橙v3版，所述第四snp標記位于8號染色體21550547bp處的堿基，耐浮皮性狀為純合基因型c/c，易浮皮性狀為雜合基因型c/t；
8、基于柑橘參考基因組甜橙v3版，所述第五snp標記位于8號染色體21550552bp處的堿基，耐浮皮性狀為純合基因型c/c，易浮皮性狀為雜合基因型c/t；
9、基于柑橘參考基因組甜橙v3版，所述第六snp標記位于8號染色體21550555bp處的堿基，耐浮皮性狀為純合基因型g/g，易浮皮性狀為雜合基因型g/a。
10、本專利技術第二方面提供了上述snp分子標記在鑒定溫州蜜柑易耐浮皮中的應用。
11、本專利技術第三方面提供了一種擴增上述snp分子標記的引物組合，所述引物組合包括正向引物f和反向引物r，所述正向引物f的序列如seq?id?no.1所示，所述反向引物r的序列如seq?id?no.2所示。
12、本專利技術第四方面提供了上述引物組合在鑒定溫州蜜柑易耐浮皮中的應用。
13、本專利技術的有益效果：
14、本專利技術提供了溫州蜜柑易耐浮皮相關的snp位點，通過檢測所述snp位點即可判斷溫州蜜柑是易浮皮還是耐浮皮。本專利技術為溫州蜜柑的分子標記輔助選擇育種提供了一個新方法。本專利技術對柑橘浮皮狀況的鑒定及柑橘耐浮皮新品種的選育均有重要意義。
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1.一種用于鑒定溫州蜜柑易耐浮皮的SNP分子標記，其特征在于，選自第一SNP標記、第二SNP標記、第三SNP標記、第四SNP標記、第五SNP標記、第六SNP標記中的一個或多個；
2.權利要求1所述的SNP分子標記在鑒定溫州蜜柑易耐浮皮中的應用。
3.一種擴增權利要求1所述的SNP分子標記的引物組合，其特征在于，所述引物組合包括正向引物F和反向引物R，所述正向引物F的序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述反向引物R的序列如SEQ?ID?NO.2所示。
4.權利要求3所述的引物組合在鑒定溫州蜜柑易耐浮皮中的應用。
【技術特征摘要】
1.一種用于鑒定溫州蜜柑易耐浮皮的snp分子標記，其特征在于，選自第一snp標記、第二snp標記、第三snp標記、第四snp標記、第五snp標記、第六snp標記中的一個或多個；
2.權利要求1所述的snp分子標記在鑒定溫州蜜柑易耐浮皮中的應用。
3.一...
【專利技術屬性】
技術研發人員：孫學鵬，王新勝，張嵐嵐，宮金禮，
申請(專利權)人：浙江農林大學，
類型：發明
國別省市：
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