【技術實現步驟摘要】
本公開屬于生物化學領域；更具體地，本公開涉及一種腫瘤微環境激活的細胞因子及其應用。
技術介紹
1、細胞因子是分子信使，它允許免疫系統的細胞相互交流，以產生對目標抗原的協調、穩健但自限性的反應。雖然免疫系統的許多形式的交流是通過直接的細胞間相互作用發生的，但細胞因子的分泌使免疫信號以多方面和有效的方式快速傳播。
2、近年來，許多細胞因子，包括gm-csf、il-7、il-12、il-15、il-18和il-21，進入晚期癌癥患者的臨床試驗。基于在動物模型中發現的幾種促炎細胞因子的強效抗腫瘤活性，重組干擾素-α和白細胞介素-2用于治療多種惡性腫瘤臨床研究被批準，即使療效還亟待提高。
3、干擾素根據它們與稱為i型、ii型和最近描述的iii型ifn受體的特定受體結合的能力進行分類。雖然在向黑色素瘤患者提供輔助ifnα時，大劑量ifnα是最常用的方案，但非常需要具有更好治療指數的療法，目前正在研究多種這種情況下的各種其他方案。使用ifn的經驗已經形成了識別和管理毒性和副作用的既定指南。ifnα的毒性特征通常與劑量有關，大多數副作用可以在不停止治療的情況下控制，全身癥狀包括發熱、疲乏、頭痛、胃腸道癥狀和肌痛是很常見的，并且可能會發生在80％或更多的患者身上。ifnα也使一些患者的肝酶升高，特別是在高劑量靜脈注射期間，此時應經常監測患者，并在治療期間對肝酶升高的患者保持治療或減少劑量。因此，降低ifnα的使用劑量、提高ifnα的給藥效果，是這一領域亟待解決的問題。
技術實現思路>
1、本公開的目的在于提一種供腫瘤微環境激活的ifnα細胞因子及其用途。
2、在本公開的第一方面，提供一種ifnα細胞因子生物分子偶聯物，有以下結構：
3、r1-aan-pabc-r3-s-cys-ifnα
4、其中，
5、cys代表包含在ifnα表面單點突變成的半胱氨酸殘基；
6、s代表半胱氨酸殘基上的硫原子；
7、ifnα具有seq?id?no:1所示的氨基酸序列；
8、r1是一個阻止ifnα突變體與它的配體或受體結合的基團；
9、aan代表三肽，a為丙氨酸，n為天冬氨酸，pabc為對-氨基芐基氨甲酰基；
10、r3是一個帶有emc基團與ifnα的單點突變的半胱氨酸的硫原子共價偶聯形成的連接臂，其作用是當aan斷裂后，r3結構仍偶聯在細胞因子上，r3-s-cys-ifnα部分恢復，完全恢復，甚至提高與ifnα受體的親合力。
11、在一個或多個實施方式中，所述的生物分子偶聯物中r1選自(但不限于)分子量44至132000的聚乙二醇，例如1000至50000、3000至80000或10000至60000的聚乙二醇。
12、在一個或多個實施方式中，所述ifnα突變體為inf-α進行單點突變后獲得的突變體，其氨基酸序列根據seq?id?no:1，arg149、ala145、his57、gln61、phe64或ser68、phe27、ser152、arg162殘基突變為cys。
13、在一個或多個實施方式中，所述的生物分子偶聯物中，r1選自：
14、
15、
16、在一個或多個實施方式中，所述的生物分子偶聯物中，r3選自(但不限于)：
17、
18、
19、在一個或多個實施方式中，所述的生物分子偶聯物中，r1-aan-pabc-r3的結構選自：
20、
21、在本公開的另一方面，提供所述的生物分子偶聯物的用途，用于制備抑制腫瘤的組合物或藥盒。
22、在本公開的另一方面，提供所述的生物分子偶聯物的用途，用于與抗腫瘤抗體聯合、制備抑制腫瘤的組合物或藥盒。
23、在本公開的另一方面，提供一種用于抑制腫瘤的組合物或藥盒，所述組合物或藥盒中含有所述的生物分子偶聯物；較佳地，所述組合物還含有藥學上可接受的載體。
24、在一個或多個實施方式中，所述組合物中還含有抗腫瘤抗體。
25、在一個或多個實施方式中，所述藥盒中還含有：抗腫瘤抗體或含有抗腫瘤抗體的組合物。
26、在一個或多個實施方式中，所述的抗腫瘤抗體是抗pd-1抗體。
27、在一個或多個實施方式中，所述的生物分子偶聯物與所述抗pd-1抗體的按照質量比為1:(0.05～50)(如1:0.1，1:0.15，1:0.2，1:0.4，1:0.5，1:0.6，1:0.8，1:1，1:2，1:4，1:5，1:6，1:8，1:10，1:20，1:30，1:40)；較佳地為1:(0.2～8)；更佳地為1:(0.4～5)。
28、在一個或多個實施方式中，所述的組合物的劑型包括(但不限于)：注射劑，輸液劑，粉劑，片劑，膠囊劑等；較佳地為注射劑。
29、在一個或多個實施方式中，所述藥盒中包括容器，所述的inf-α突變體和/或抗腫瘤抗體或包含其的組合物被置于容器中。
30、在一個或多個實施方式中，所述的容器包括(但不限于)：注射器。
31、在一個或多個實施方式中，所述的藥盒中還含有：使用說明書，說明抑制腫瘤的方法。
32、在本公開的另一方面，提供一種制備腫瘤微環境中活化的inf-α的方法，包括：將inf-α進行單點突變，使其氨基酸序列的特定殘基突變為cys。
33、在本公開的另一方面，提供一種inf-α突變體，其為inf-α進行單點突變后獲得的突變體，其氨基酸序列根據seq?id?no:1，arg149、ala145、his57、gln61、phe64或ser68、phe27、ser152、arg162殘基突變為cys。
34、在本公開的另一方面，提供分離的多核苷酸，所述的多核苷酸編碼所述的inf-α突變體。
35、在本公開的另一方面，提供一種表達載體，它含有所述的多核苷酸。
36、在本公開的另一方面，提供一種遺傳工程化的宿主細胞，它含有所述的載體，或基因組中整合有所述的多核苷酸。
37、在本公開的另一方面，提供一種生產所述的inf-α的突變體的方法，包括步驟：(1)培養所述的宿主細胞，獲得培養物；和(2)從培養物中分離所述的inf-α突變體。
38、在本公開的另一方面，提供所述的inf-α突變體的用途，用于與r1-aan-pabc-r3偶聯形成抑制腫瘤的生物分子偶聯物；其中，r1是一個阻止ifnα突變體與它的配體或受體結合的基團；aan代表三肽，a為丙氨酸，n為天冬氨酸，pabc為對-氨基芐基氨甲酰基；r3是一個帶有emc基團與ifnα的單點突變的半胱氨酸的硫原子共價偶聯形成的連接臂，其作用是當aan斷裂后，r3結構仍偶聯在細胞因子上，r3-s-cys-ifnα部分恢復，完全恢復，甚至提高與ifnα受體的親合力。
39、在一個或多個實施方式中，所述的抑制腫瘤包括：預本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種IFNα細胞因子生物分子偶聯物，有以下結構：
2.如權利要求1所述的生物分子偶聯物，其特征在于，其中R1選自分子量44至132000的聚乙二醇，例如1000至50000、3000至80000或10000至60000的聚乙二醇；或
3.如權利要求2所述的生物分子偶聯物，其特征在于，R1選自：
4.如權利要求1所述的生物分子偶聯物，其特征在于，其中R3選自：
5.如權利要求1所述的生物分子偶聯物，其特征在于，R1-AAN-PABC-R3的結構選自：
6.權利要求1-5任一所述的生物分子偶聯物的用途，用于制備抑制腫瘤的組合物或藥盒。
7.權利要求1-5任一所述的生物分子偶聯物的用途，用于與抗腫瘤抗體聯合、制備抑制腫瘤的組合物或藥盒。
8.一種用于抑制腫瘤的組合物或藥盒，其特征在于，所述組合物或藥盒中含有權利要求1-5任一所述的生物分子偶聯物；較佳地，所述組合物還含有藥學上可接受的載體。
9.如權利要求8所述的組合物或藥盒，其特征在于，所述組合物中還含有抗腫瘤抗體；或
10
11.如權利要求8所述的組合物或藥盒，其特征在于，所述的生物分子偶聯物與所述抗PD-1抗體的按照質量比為1:(0.05～50)；較佳地為1:(0.2～8)；更佳地為1:(0.4～5)。
12.一種制備腫瘤微環境中活化的INF-α的方法，包括：將INF-α進行單點突變，使其氨基酸序列的特定殘基突變為Cys。
13.一種INF-α突變體，其為INF-α進行單點突變后獲得的突變體，其氨基酸序列根據SEQ?ID?NO:1，Arg149、Ala145、His57、Gln61、Phe64或Ser68、Phe27、Ser152、Arg162殘基突變為Cys。
14.分離的多核苷酸，所述的多核苷酸編碼權利要求13所述的INF-α突變體。
15.權利要求13所述的INF-α突變體的用途，用于與R1-AAN-PABC-R3偶聯形成抑制腫瘤的生物分子偶聯物；
16.如權利要求1-15任一所述，其特征在于，所述的腫瘤包括：黑色素瘤，NSCLC，頭頸鱗狀細胞癌，尿路上皮癌，經典霍奇金淋巴癌，胃癌，食管胃交界腺癌，宮頸癌，B細胞淋巴癌，肝細胞癌，默克爾細胞癌，腎細胞癌，原發性肝癌，小細胞肺癌。
...【技術特征摘要】
1.一種ifnα細胞因子生物分子偶聯物，有以下結構：
2.如權利要求1所述的生物分子偶聯物，其特征在于，其中r1選自分子量44至132000的聚乙二醇，例如1000至50000、3000至80000或10000至60000的聚乙二醇；或
3.如權利要求2所述的生物分子偶聯物，其特征在于，r1選自：
4.如權利要求1所述的生物分子偶聯物，其特征在于，其中r3選自：
5.如權利要求1所述的生物分子偶聯物，其特征在于，r1-aan-pabc-r3的結構選自：
6.權利要求1-5任一所述的生物分子偶聯物的用途，用于制備抑制腫瘤的組合物或藥盒。
7.權利要求1-5任一所述的生物分子偶聯物的用途，用于與抗腫瘤抗體聯合、制備抑制腫瘤的組合物或藥盒。
8.一種用于抑制腫瘤的組合物或藥盒，其特征在于，所述組合物或藥盒中含有權利要求1-5任一所述的生物分子偶聯物；較佳地，所述組合物還含有藥學上可接受的載體。
9.如權利要求8所述的組合物或藥盒，其特征在于，所述組合物中還含有抗腫瘤抗體；或
10.如權利要求9所述的組合物或藥盒，其特征在于，所述的抗腫瘤抗體是抗pd...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張蕊，陳濤，劉源，劉辰，
申請(專利權)人：亞飛上海生物醫藥科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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