【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本公開提供用于合成寡聚化合物(包括作為反義劑或其部分的寡聚化合物)的穩定的試劑組合物，所述寡聚化合物包含具有至少一個修飾的核苷間連接基團的修飾的寡核苷酸。
技術介紹
1、反義技術背后的原理是，反義化合物與靶核酸雜交，并調節所述靶核酸的量、活性和/或功能。例如，在某些情況下，反義化合物導致靶標的轉錄或翻譯改變。這種表達的調節可通過例如靶rna降解或基于占位的抑制來實現。通過降解調節rna靶功能的一個實例是靶rna在與dna樣反義化合物雜交時基于rna酶h的降解。
2、通過靶降解調節基因表達的另一實例是rna干擾(rnai)。rnai是指通過利用rna誘導的沉默復合物(risc)的機制進行的反義介導的基因沉默。調節rna靶功能的另外的實例為通過基于占位的機制，如微小rna天然采用的機制。微小rna是調控蛋白質編碼rna的表達的小的非編碼rna。反義化合物與微小rna的結合阻止微小rna與其信使rna靶標的結合，因此干擾微小rna的功能。微小rna模擬物可增強天然微小rna功能。某些反義化合物改變前mrna的剪接。調節基因表達的另一實例是在crispr系統中使用反義化合物。無論具體機制如何，序列特異性都使得反義化合物值得被考慮作為用于靶標確認和基因功能化的工具以及作為選擇性調節參與疾病的發病機制的基因的表達的治療劑。
3、反義技術是用于調節一種或多種特定基因產物的表達的有效手段，因此可證明其在許多治療、診斷和研究應用中具有獨特的用途。可以將化學修飾的核苷結合到反義化合物中以增強一種或多種特性，如核酸酶抗性、耐受
4、按多步驟過程來化學合成包含寡核苷酸的寡聚化合物。取代的磺酰基疊氮化物是用于合成鍵修飾的寡核苷酸的有用試劑，但它們可能是高能量物質，并且特別是在生產規模上使用起來很危險。開發新的穩定試劑組合物和反應條件以大規模改善具有潛在危險性的化學物質仍然是一項重要挑戰。
技術實現思路
1、本公開提供合成包含修飾的寡核苷酸的寡聚化合物(包括作為反義劑或其部分的寡聚化合物)的方法，所述修飾的寡核苷酸由通過核苷間連接基團連接的連接核苷組成，其中所述核苷間連接基團中的至少一者具有式i：
2、
3、其中x和r如本文所定義。所述方法可包括將穩定化物質添加到高能量試劑的組合物中。
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1.一種制備修飾的寡核苷酸的方法，包括使具有亞磷酸三酯核苷間鍵的第一寡核苷酸中間體與至少一種穩定劑和與包含磺酰基氧化劑的氧化溶液接觸以形成具有式XIV的核苷間連接基團的第二寡核苷酸中間體：
2.如權利要求1所述的方法，其中R是甲基，且所述磺酰基氧化劑是甲磺酰基疊氮化物(MsN3)。
3.如權利要求1至2中任一項所述的方法，其中所述氧化溶液包含所述至少一種穩定劑。
4.如權利要求1至2中任一項所述的方法，其中所述氧化溶液不包含所述至少一種穩定劑。
5.如權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述氧化溶液包含選自乙腈、甲苯、二氯甲烷、吡啶、N-甲基-2-吡咯烷酮及其組合的溶劑。
6.如權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述至少一種穩定劑選自環丁砜和磷酸三苯酯(TPP)。
7.如權利要求1至6中任一項所述的方法，其中至少一種穩定劑是環丁砜，任選其中環丁砜是唯一的穩定劑。
8.如權利要求1至7中任一項所述的方法，其中至少一種穩定劑是TPP，任選其中TPP是唯一的穩定劑。
9.如權利要求1至
10.如權利要求9所述的方法，其中所述非交聯聚合物是聚苯乙烯。
11.如權利要求1至10中任一項所述的方法，其中通過從所述氧化溶液和所述至少一種穩定劑中蒸發所述溶劑獲得的殘留物具有小于500J.g-1的燃燒能。
12.如權利要求1至11中任一項所述的方法，其中通過從所述氧化溶液和所述至少一種穩定劑中蒸發所述溶劑獲得的殘留物具有小于300J.g-1的燃燒能。
13.如任一前述權利要求所述的方法，其中所述氧化溶液包含相對于所述磺酰基氧化劑為0.1至10當量的所述至少一種穩定劑。
14.如權利要求13所述的方法，其中所述氧化溶液包含相對于所述磺酰基氧化劑為1至10當量的所述至少一種穩定劑。
15.如權利要求13所述的方法，其中所述氧化溶液包含相對于所述磺酰基氧化劑為3至6當量的所述至少一種穩定劑。
16.如權利要求13所述的方法，其中所述氧化溶液包含相對于所述磺酰基氧化劑為4至5當量的所述至少一種穩定劑。
17.如前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述氧化溶液包含0.1至10M的所述磺酰基氧化劑。
18.如前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述氧化溶液包含0.5至5M的所述磺酰基氧化劑。
19.如前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述氧化溶液包含0.6至1.5M的所述磺酰基氧化劑。
20.一種合成修飾的寡核苷酸的方法，所述修飾的寡核苷酸包含至少一個式I的核苷間鍵：
21.如權利要求20所述的方法，其中每個R是甲基。
22.如權利要求20或21所述的方法，其中所述磺酰基氧化劑是甲磺酰基疊氮化物，且所述氧化溶液包含所述甲磺酰基疊氮化物和所述至少一種穩定劑。
23.如權利要求20至22中任一項所述的方法，其中所述至少一種穩定劑是環丁砜，任選其中環丁砜是唯一的穩定劑。
24.如權利要求20至22中任一項所述的方法，其中所述至少一種穩定劑是TPP，任選其中TPP是唯一的穩定劑。
25.如權利要求20至24中任一項所述的方法，其中通過從包含所述磺酰基氧化劑和所述至少一種穩定劑的溶液中蒸發所述溶劑獲得的殘留物具有小于500J.g-1的燃燒能。
26.如權利要求20至24中任一項所述的方法，其中通過從包含所述磺酰基氧化劑和所述至少一種穩定劑的溶液中蒸發所述溶劑獲得的殘留物具有小于300J.g-1的燃燒能。
27.如權利要求20至26中任一項所述的方法，其中每個X是O。
28.如權利要求20至27中任一項所述的方法，其中所述封端試劑是乙酸酐。
29.如權利要求20至28中任一項所述的方法，包括用氫氧化銨處理所述修飾的寡核苷酸以移除保護基團，并從所述固體支持物上切割所述修飾的寡核苷酸。
30.如權利要求20至29中任一項所述的方法，其中所述修飾的寡核苷酸包含12至25個連接核苷。
31.如權利要求1至30中任一項所述的方法，其中所述修飾的寡核苷酸包含硫代磷酸酯和甲磺酰氨基磷酸酯以及任選的磷酸二酯核苷間鍵。
32.如權利要求1至30中任一項所述的方法，其中所述修飾的寡核苷酸包含選自磷酸二酯、硫代磷酸酯和甲磺酰氨基磷酸酯核苷間鍵的核苷間鍵，并且不包含其它核苷間鍵。
33.如權利要求1至32中任一項所述的方法，其中所述修飾的寡核苷酸...
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
1.一種制備修飾的寡核苷酸的方法，包括使具有亞磷酸三酯核苷間鍵的第一寡核苷酸中間體與至少一種穩定劑和與包含磺酰基氧化劑的氧化溶液接觸以形成具有式xiv的核苷間連接基團的第二寡核苷酸中間體：
2.如權利要求1所述的方法，其中r是甲基，且所述磺酰基氧化劑是甲磺酰基疊氮化物(msn3)。
3.如權利要求1至2中任一項所述的方法，其中所述氧化溶液包含所述至少一種穩定劑。
4.如權利要求1至2中任一項所述的方法，其中所述氧化溶液不包含所述至少一種穩定劑。
5.如權利要求1至4中任一項所述的方法，其中所述氧化溶液包含選自乙腈、甲苯、二氯甲烷、吡啶、n-甲基-2-吡咯烷酮及其組合的溶劑。
6.如權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述至少一種穩定劑選自環丁砜和磷酸三苯酯(tpp)。
7.如權利要求1至6中任一項所述的方法，其中至少一種穩定劑是環丁砜，任選其中環丁砜是唯一的穩定劑。
8.如權利要求1至7中任一項所述的方法，其中至少一種穩定劑是tpp，任選其中tpp是唯一的穩定劑。
9.如權利要求1至8中任一項所述的方法，其中至少一種穩定劑是非交聯聚合物。
10.如權利要求9所述的方法，其中所述非交聯聚合物是聚苯乙烯。
11.如權利要求1至10中任一項所述的方法，其中通過從所述氧化溶液和所述至少一種穩定劑中蒸發所述溶劑獲得的殘留物具有小于500j.g-1的燃燒能。
12.如權利要求1至11中任一項所述的方法，其中通過從所述氧化溶液和所述至少一種穩定劑中蒸發所述溶劑獲得的殘留物具有小于300j.g-1的燃燒能。
13.如任一前述權利要求所述的方法，其中所述氧化溶液包含相對于所述磺酰基氧化劑為0.1至10當量的所述至少一種穩定劑。
14.如權利要求13所述的方法，其中所述氧化溶液包含相對于所述磺酰基氧化劑為1至10當量的所述至少一種穩定劑。
15.如權利要求13所述的方法，其中所述氧化溶液包含相對于所述磺酰基氧化劑為3至6當量的所述至少一種穩定劑。
16.如權利要求13所述的方法，其中所述氧化溶液包含相對于所述磺酰基氧化劑為4至5當量的所述至少一種穩定劑。
17.如前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述氧化溶液包含0.1至10m的所述磺酰基氧化劑。
18.如前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述氧化溶液包含0.5至5m的所述磺酰基氧化劑。
19.如前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述氧化溶液包含0.6至1.5m的所述磺酰基氧化劑。
20.一種合成修飾的寡核苷酸的方法，所述修飾的寡核苷酸包含至少一個式i的核苷間鍵：
21.如權利要求20所述的方法，其中每個r是甲基。
22.如權利要求20或21所述的方法，其中所述磺酰基氧化劑是甲磺酰基疊氮化物，且所述氧化溶液包含所述甲磺酰基疊氮化物和所述至少一種穩定劑。
23.如權利要求20至22中任一項所述的方法，其中所述至少一種穩定劑是環丁砜，任選其中環丁砜是唯一的穩定劑。
24.如權利要求20至22中任一項所述的方法，其中所述至少一種穩定劑是tpp，任選其中tpp是唯一的穩定劑。
25.如權利要求20至24中任一項所述的方法，其中通過從包含所述磺酰基氧化劑和所述至少一種穩定劑的溶液中蒸發所述溶劑獲得的殘留物具有小于500j.g-1的燃燒能。
26.如權利要求20至24中任一項所述的方法，其中通過從包含所述磺酰基氧化劑和所述至少一種穩定劑的溶液中蒸發所述溶劑獲得的殘留物具有小于300j.g-1的燃燒能。
27.如權利要求20至26中任一項所述的方法，其中每個x是o。
28.如權利要求...
【專利技術屬性】
技術研發人員：安德魯·A·羅德里格斯，
申請(專利權)人：IONIS制藥公司，
類型：發明
國別省市：
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